譚湘杰 于福來 黃梅 楊全 唐曉敏 李偉 龐玉新

摘 要 為研究不同初加工方式對裸花紫珠主要化學成分含量的影響，采用蒸氣殺青5 min后不同溫度干燥，以及不經(jīng)殺青不同溫度直接干燥處理新鮮裸花紫珠成熟葉，之后采用HPLC高效液相色譜法和UV紫外分光光度法對不同處理的樣品進行含量測定。結(jié)果表明：不同初加工方式間裸花紫珠主要化學成分含量具有顯著性差異（p<0.05），其中，蒸氣殺青5 min后干燥的裸花紫珠化學成分含量顯著高于直接干燥（p<0.05），并以殺青后55℃烘干處理的化學成分含量最高。因此，本研究得出，加工干燥過程中蒸汽殺青前處理可減少裸花紫珠主要化學成分含量的損失，適宜在其生產(chǎn)加工中推廣。

關(guān)鍵詞 裸花紫珠 ；初加工 ；化學成分

中圖分類號 S377 文獻標識碼 A Doi：10.12008/j.issn.1009-2196.2018.07.008

Abstract The fresh mature leaves of Callicarpa nudiflora were dried under different temperatures after steam treatment for 5 minutes or without steam treatment to analyze the contents of their main chemical constituents. Different processed samples were determined by using HPLC and UV spectroscopy. The results showed that there were significant differences in the contents of major chemical constituents of C. nudiflora （p<0.05） between the steam treatment and the non-steam treatment. The C. nudiflora dried after steam treatment for 5 minutes had higher content of chemical composition than that dried directly without steam treatment （p<0.05）. The drying treatment at 55℃ contained the highest chemical constituents. Therefore， it was concluded that pre-treatment for deactivation of enzymes can reduce the loss of chemical constituents of C. nudiflora leaves during drying， and was suitable for promotion in the production and processing.

Keywords Callicarpa nudiflora ； primary processing ； chemical composition

裸花紫珠（Callicarpa nudiflora Hook. et Arn.）為馬鞭草科紫珠屬植物，為海南地道藥材，通常以葉片入藥，具有抗炎止血的藥理活性[1]。栽培資源主要分布于白沙縣、五指山市等地區(qū)[2]，主要含有黃酮、皂苷和酚酸類成分[3-7]。以往的研究表明，不同初加工方式對中藥材的主要化學成分影響十分顯著，其中蒸氣殺青為葉類中藥材常用的干燥前處理手段，且能夠明顯保留某些中藥材有效成分。如綠茶經(jīng)殺青后，蛋白質(zhì)含量下降，而游離氨基酸總量增加，并產(chǎn)生茶葉特有的香氣[8]；董娟娥等[9]的研究發(fā)現(xiàn)，殺青處理與不殺青樣品比較，大青葉中靛藍、靛玉紅的含量呈增加趨勢，其中，靛玉紅以殺青陰干處理含量最高，靛藍以殺青70℃干燥處理含量最高，結(jié)果均說明，殺青能夠有效保留相關(guān)中藥材中的有效成分。

生產(chǎn)上裸花紫珠藥材通常以曬干為主，而關(guān)于其初加工方式的研究鮮有報道。因此，本研究通過比較殺青與不殺青處理后不同干燥溫度下裸花紫珠化學成分含量變化，分析不同初加工方式對裸花紫珠化學成分含量的影響，以期為裸花紫珠藥材規(guī)范化加工生產(chǎn)提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

所用樣品均于2017年10～12月采自于農(nóng)業(yè)部儋州熱帶藥用植物種質(zhì)資源圃，所有材料均為生長于同一區(qū)域3年生的健康裸花紫珠成熟葉片。對照：咖啡酸（生產(chǎn)批號Y17D6C7672）、連翹酯苷B（生產(chǎn)批號20140120）、木犀草苷（生產(chǎn)批號Y23S7H21785）、毛蕊花糖苷（生產(chǎn)批號PMO321SA14）、異毛蕊花糖苷（生產(chǎn)批號HA0820KA29）、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷（生產(chǎn)批號P20N6F6297，以下簡稱芹菜素糖苷）、木犀草素（生產(chǎn)批號YO1D6S6815）、蘆?。ㄉa(chǎn)批號P29D4F6327）、沒食子酸（生產(chǎn)批號Y15D6R6713）、齊墩果酸（生產(chǎn)批號20170423）均采購于上海源葉生物制藥公司，純度均在98%以上。

1.2 方法

1.2.1 樣品加工

將裸花紫珠鮮葉充分混勻，均分為12份，每份100 g，使用網(wǎng)袋裝好。取其中6份進行蒸氣殺青5 min 處理后與剩余6份鮮葉，分別以陰干、37、55、65、75和85℃烘干處理至葉樣恒重，將處理好的葉樣打粉過20目篩，收裝在自封袋中于低溫冰箱中保存。重復(fù)加工鮮葉樣品2次，共計24份樣品。

1.2.2 供試品制備方法和浸膏得率測定

供試品制備方法：稱取1 g裸花紫珠粉末置于100 mL離心管中，加入70%甲醇50 mL，在40 kHz、功率為400 W的超聲條件下提取20 min后，吸取上層清液后使用0.22 μm的微孔濾膜過率即得供試品溶液。

浸膏得率測定方法：稱取裸花紫珠粉末5 g，采用超聲醇提法，提取時間為42 min、料液比為1∶17、乙醇濃度為62%、提取2次，將所得濾液轉(zhuǎn)置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，在65℃下濃縮7 min后轉(zhuǎn)至于干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在鼓風干燥機中烘干至恒重，記錄蒸發(fā)皿重，減去空皿重，即得浸膏重量，再除以裸花紫珠粉末重量5 g即得浸膏得率。重復(fù)測定樣品3次。

1.2.3 單體化學成分含量測定

7種單體成分含量測定方法參照譚湘杰等[10]所建立的HPLC法測定。色譜條件：色譜柱Agilent-TC C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）； 流動相為乙腈（A）-0.4%磷酸（B），梯度洗脫：0～30 min，8%～16% A；30～45 min，16%～21% A；45～55 min，21%～24% A；55～65 min，24%～35% A；65～70 min，35%～100% A；流速1.0 mL/min；檢測波長330 nm；柱溫30℃；進樣量10 μL，每份樣品均重復(fù)測定3次。將所得數(shù)據(jù)帶入已建立的標準曲線中，求得各單體成分含量。

1.2.4 有效部位含量測定

有效部位含量測定方法參考顏小捷等[11]和寧德生等[12]的方法，供試品溶液中不同有效部位采用相關(guān)顯色方法后，使用UV紫外分光光度法對3種有效部位的吸光度進行測定，每份樣品均重復(fù)測定3次。將所得數(shù)據(jù)帶入已建立的標準曲線中，求得各有效部位含量。

1.2.5 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 19.0 對數(shù)據(jù)進行方差分析、Duncan's多重比較和主成分分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同加工方式對有效部位含量及浸膏得率影響

由表1和圖1可知，裸花紫珠樣品經(jīng)不同方式處理后，有效部位（總黃酮、總酚酸、總皂苷）含量、浸膏得率以蒸氣殺青處理5 min后干燥 （以下稱殺青干燥）高于直接干燥處理（以下稱直接干燥），僅總皂苷含量在陰干、37℃處理下是直接烘干的樣品含量稍高于殺青烘干，但差異不顯著；總黃酮含量以殺青55℃處理的裸花紫珠樣品含量最高，可達344.420 mg/g，以烘干85℃處理含量最低，為47.596 mg/g；總酚酸含量以殺青陰干處理含量最高，為128.331 mg/g，以85℃烘干處理最低，為12.031 mg/g；總皂苷含量以37℃烘干處理最高，為123.279 mg/g，以85℃烘干最低，為56.709 mg/g。

2.2 不同加工方式對單體成分含量的影響

從表2和圖3可知，除木犀草苷、木犀草素在37℃直接烘干處理含量最高外，裸花紫珠各單體成分含量均以殺青干燥處理高于直接烘干處理。其中，連翹酯苷B、毛蕊花糖苷和7個單體成分含量總和以殺青55℃烘干最高（分別為6.716、84.653和103.085 mg/g），咖啡酸和芹菜素糖苷含量以殺青后陰干最高（分別為0.054和0.327 mg/g），異毛蕊花糖苷含量以殺青后高溫烘干較高（10.176 mg/g），而木犀草苷和木犀草素含量最高值出現(xiàn)在直接37℃烘干處理（分別為3.828和0.249 mg/g）。同時，殺青干燥后的樣品單體成分對干燥溫度的響應(yīng)較小，而直接干燥的樣品隨著干燥溫度升高其成分損失較大，各成分在65℃以上干燥時，呈現(xiàn)較明顯的下降趨勢（其中咖啡酸低于檢測限），裸花紫珠7種單體成分色譜圖見圖2。

2.3 不同加工方式化學成分主成分分析

基于3種有效部位、浸膏得率及7種單體成分共11個指標，采用SPSS進行主成分分析，選取特征值大于1的成分為主成分，可見有 2個主成分，并且這2個主成分的方差累計貢獻率達 86.772%，能夠充分解釋原有所有指標成分的信息。所以，將選擇這2個主成分代表所有因子進行藥材品質(zhì)的分析，詳見表3。

采用主成分進行綜合得分分析并對不同初加工方式進行排序，每種加工方式按照下列公式進行計算Y=9.577/（9.577+1.704）×主成分得分1+1.704/（9.577+1.704）×主成分得分2，化簡為Y=0.848×主成分得分1+0.152×主成分得分2，主成分分析綜合排序詳見表4。同樣可以發(fā)現(xiàn)，殺青后成分含量高于直接烘干處理，且殺青處理后以55℃烘干較為適宜。

3 討論

蒸氣殺青處理5 min不同溫度干燥（以下稱殺青干燥）對裸花紫珠化學成分保留效果優(yōu)于不殺青不同溫度直接干燥處理（以下稱直接干燥）：裸花紫珠樣品經(jīng)不同處理方式處理后，有效部位（總黃酮、總酚酸、總皂苷）含量、浸膏得率、單體成分含量基本上以殺青干燥高于直接干燥。裸花紫珠的傳統(tǒng)加工方式一般是以曬干為主，受天氣影響較大，干燥時間較長，藥材質(zhì)量也不穩(wěn)定，而關(guān)于其初加工方式的研究少見報到。本研究采用多種有效成分作為裸花紫珠的質(zhì)量質(zhì)控指標，并采用主成分分析法進行驗證，對比考察了殺青干燥與直接干燥處理的裸花紫珠主要有效成分含量變化，研究表明，以殺青干燥55℃最為適宜，干燥時間短，有效成分含量高，與其他葉類中藥材殺青處理后成分含量呈現(xiàn)相同規(guī)律[8-9]。

不同初加工方式是讓新鮮藥材變?yōu)樯唐匪幉年P(guān)鍵的一步，中藥在初加工過程中會對中藥原藥材進行水分處理、發(fā)汗、切制及烘干等操作，不同初加工方式會使中藥固有成分發(fā)生變化或損失。選擇科學合理的加工方式對提高中藥材藥效成分或降低有毒成分含量有著顯著的影響[13-14]。據(jù)報道，鮮葉被采摘后，其葉內(nèi)原果膠酶、轉(zhuǎn)化酶、β-糖苷酶、淀粉酶、蛋白酶活力大大增強，促使淀粉水解成為糖、蛋白質(zhì)水解成為氨基酸、類脂和果膠水解出多種有機酸[15]；而殺青作為葉類中藥材初加工的常用手段之一，殺青過程中的熱化學變化，可迅速滅活植物細胞和能使相關(guān)成分降解的酶[16-17]。隨著現(xiàn)代技術(shù)不斷進步，現(xiàn)代殺青手段也越來越多，如微波殺青、熱風殺青[18-19]等，能夠?qū)崿F(xiàn)快速有效干燥藥材，減少實際生產(chǎn)過程中相關(guān)步驟以及初加工時間。故接下來可考察多種殺青方法對裸花紫珠的化學成分含量影響以及探討殺青過程相關(guān)酶的變化，以實現(xiàn)快速滅活相關(guān)酶保留有效成分的目的。

參考文獻

[1] 中國醫(yī)學科學院藥用植物資源開發(fā)研究所，中國醫(yī)學科學院藥物研究所，北京醫(yī)科大學藥學院，等. 中藥志·第五冊[M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社，1994：147.

[2] 黃 梅，陳振夏，于福來，等. 海南島裸花紫珠種質(zhì)資源調(diào)查報告[J]. 中國現(xiàn)代中藥，2017，19（12）：1 717-1 721.

[3] 梁紀軍，徐 凱，李留法，等. 裸花紫珠總黃酮的抗炎、止血作用研究[J]. 現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2009，18（26）：3 612-3 613.

[4] 蔡 灝，吳翠萍，孫秀漫，等. 5種紫珠屬藥材中總酚、總黃酮與其抗氧化活性的相關(guān)性研究[J]. 中國實驗方劑學雜志，2013，19（20）：55-60.

[5] 邵 軍，陳偉康，馬雙成，等. UPLC法同時測定裸花紫珠中5種類黃酮類成分[J]. 中草藥，2014，45（10）：1 473-1 476.

[6] 諶樂剛，宋永強. 分光光度法測定裸花紫珠藥材水提物中總黃酮的含量[J]. 華西藥學雜志，2005，20（5）：449-450.

[7] 王紅剛，潘利明. 分光光度法測定5種紫珠屬中藥總黃酮的含量[J]. 四川中醫(yī)，2003，31（3）：57-58.

[8] Yuanyuan Huang， Jianchun Sheng， Fangmei Yang， et al. Effect of enzyme inactivation by microwave and oven heatingon preservation quality of green tea[J]. J. Food Engineer， 2007， 78： 687-692.

[9] 董娟娥，龔明貴，梁宗鎖，等. 干燥方法和提取溫度對板藍根、大青葉有效成分的影響[J]. 中草藥，2008，39（1）：11-114.

[10] 譚湘杰，于福來，龐玉新，等. 海南裸花紫珠藥材中7種成分含量分析[J]. 中國現(xiàn)代中藥，2018，20（2）：173-178.

[11] 顏小捷，谷陟欣，盧鳳來，等.裸花紫珠中總酚、總黃酮和總皂苷的含量測定[J]. 時珍國醫(yī)國藥，2013，24（12）：2 852-2 854.

[12] 寧德生，李典鵬，黃 勝，等. 七種紫珠屬植物水提物中總黃酮、總酚酸及其抗氧化活性的測定[J]. 廣西植物，2012，6（24）：845-849.

[13] 張菊花，張曉艷. 探析不同炮制方法對附子藥理作用及毒性的影響[J]. 海峽藥學，2008，20（10）：89.

[14] 熊 艷，高慧敏，王智民，等. 金銀花不同干燥技術(shù)HPLC指紋圖譜研究[J]. 中國中藥雜志，2009，34（8）：1 015-1 017.

[15] 段金廒，宿樹蘭，嚴 輝，等. 藥材初加工“殺青”環(huán)節(jié)與藥材品質(zhì)形成的探討[J]. 中藥材，2011，34（1）：1-4.

[16] V.V.Mosolov， T.A.Valueva. Proteinase Inhibitors and Their Function in Plants： A Review[J].Appl. Biochem. Microbiol， 2005， 41（3）：227-246.

[17] 金心怡，陳濟斌，吉克溫. 茶葉加工工程[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2003：56-60.

[18] 趙潤懷，段金廒，高振江，等. 中藥材產(chǎn)地加工過程傳統(tǒng)與現(xiàn)代干燥技術(shù)方法的分析評價[J]. 中國現(xiàn)代中藥，2013，15（12）：1 026-1 035.

[19] 石 磊. 現(xiàn)代干燥技術(shù)對烏龍茶品質(zhì)的影響[D]. 廣州：暨南大學，2010.