潘惠 汪元

【摘 要】目的：探討類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血中B細胞功能的變化及其與實驗室指標、中醫(yī)證候的關(guān)系。方法：選取60例類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者，根據(jù)DAS28評分，分為高活動組24例，中低活動組36例；同時選取20例健康體檢者為正常對照組。采用流式細胞儀檢測B細胞計數(shù)、B細胞百分比；采用ELISA法檢測抗環(huán)瓜氨酸肽（CCP）抗體、B細胞活化因子（BAFF）及其受體（BAFF-R）；采用免疫透射比濁法檢測免疫球蛋白IgA、IgG、IgM，補體C3、C4及類風(fēng)濕因子（RF）、C-反應(yīng)蛋白（CRP）；采用全自動血沉分析儀檢測紅細胞沉降率（ESR）。結(jié)果：類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的B細胞計數(shù)、B細胞百分比、BAFF、BAFF-R較正常對照組明顯增高（P < 0.05），且高活動組較中低活動組明顯增高（P < 0.01）。

B細胞計數(shù)與RF、抗CCP抗體、ESR、CRP、C3、IgG呈正相關(guān)（P < 0.05）；B細胞百分比與抗CCP抗體、ESR、CRP、C4呈正相關(guān)（P < 0.05）；BAFF與抗CCP抗體、ESR、CRP、C3、IgG呈正相關(guān)（P < 0.05）；BAFF-R與CRP呈正相關(guān)（P < 0.05）。B細胞計數(shù)與關(guān)節(jié)腫脹、關(guān)節(jié)壓痛、關(guān)節(jié)局部發(fā)熱、疲倦乏力、舌質(zhì)紫暗呈正相關(guān)（P < 0.05），B細胞百分比與關(guān)節(jié)腫脹、關(guān)節(jié)壓痛、關(guān)節(jié)局部發(fā)熱、納食減少呈正相

關(guān)（P < 0.05），BAFF與關(guān)節(jié)腫脹、關(guān)節(jié)壓痛、關(guān)節(jié)局部發(fā)熱呈正相關(guān)（P < 0.05），BAFF-R與納食減少、大便稀溏呈正相關(guān)（P < 0.05）。結(jié)論：類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的B細胞功能較正常人明顯升高，與疾病活動度、中醫(yī)證候呈正相關(guān)，說明B細胞功能變化可作為反映類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病情活動度的指標之一。

【關(guān)鍵詞】 關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕；B細胞功能；疾病活動度；中醫(yī)證候

Changes of B Cell Function in Patients with Rheumatoid Arthritis and Correlation Analysis

PAN Hui，WANG Yuan

【ABSTRACT】Objective：To investigate the changes of B cell function in peripheral blood of patients with rheumatoid arthritis and their relationship with laboratory indexes and TCM syndromes.Methods：Sixty cases

of rheumatoid arthritis were selected and divided into a high activity group（24 cases），a middle and a low activity group（36 cases）according to DAS28 score，and 20 healthy subjects were selected as a normal control group.The B cell count and the percentage of B cells were detected by flow cytometry.The anti CCP antibody，BAFF and its receptor BAFF-R were detected by ELISA，and immunoturbidimetry was used to detect immunoglobulin IgA，IgG，IgM，complement C3，C4 and rheumatoid factor（RF）and C-reactive protein（CRP）.Erythrocyte sedimentation rate（ESR）was detected by automatic ESR analyzer.Results：The number of B cells，the percentage

of B cells，BAFF and BAFF-R in the patients with rheumatoid arthritis were significantly higher than those in the normal control group（P < 0.05），and those in the high activity group were significantly higher than the low activity group（P < 0.01）.The number of B cells was positively correlated with RF，anti CCP antibody，ESR，CRP，C3 and IgG（P < 0.05），and the percentage of B cells was positively correlated with anti CCP antibody，ESR，CRP and C4（P < 0.05）.BAFF was positively correlated with anti CCP antibody，ESR，CRP，C3 and IgG（P < 0.05）.BAFF-R was positively correlated with CRP（P < 0.05）.There was a positive correlation between B cell count and joint swelling，joint tenderness，joint local fever，fatigue and lingual purple（P < 0.05）.The percentage of B cells was positively correlated with joint swelling，joint tenderness，joint local fever，and reduction of food intake（P < 0.05）.BAFF was positively correlated with joint swelling，joint tenderness，and joint local fever（P < 0.05）.BAFF-R was positively correlated with food intake reduction and loose stool（P < 0.05）.Conclusion：The B cell function of patients with rheumatoid arthritis is significantly higher than that of normal people，and it is positively related to the degree of disease activity and TCM syndrome，indicating that the function of B cells can be used as one of the indexes to reflect the degree of activity of rheumatoid arthritis.

【Keywords】 arthritis，rheumatoid；B cell function；disease activity；TCM Syndromes

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種累及多關(guān)節(jié)的慢性、系統(tǒng)性自身免疫性疾病。發(fā)病機制不明，多認為與免疫紊亂相關(guān)。B細胞在RA發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，近年來以B細胞為靶點治療RA的研究逐漸成為熱點，但也有研究表明在RA發(fā)病機制中，B細胞處于較次要的位置[1]。為進一步了解兩者的關(guān)系，本研究通過檢測B細胞計數(shù)、B細胞百分比、B細胞活化因子（BAFF）及其受體（BAFF-R）水平，了解RA患者B細胞功能變化特點，并探討B(tài)細胞功能變化與疾病活動度及中醫(yī)證候的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年6月至2017年10月在安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫科住院的活動期RA患者60例為RA組，其中男19例，女41例；年齡20～74歲，平均（47.37±13.70）歲；

病程1～30年，平均（14.60±13.70）年。所有患者均符合2010年美國風(fēng)濕病學(xué)會（ACR）/歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟（EULAR）共同提出的最新RA分類標準和評分系統(tǒng)。選取同期本院體檢中心健康體檢者20例為正常對照組，其中男6例，女

14例；年齡26～71歲，平均（50.45±13.79）歲。2組在性別、年齡等方面比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義

（P > 0.05），具有可比性。60例RA患者依據(jù)DAS28評分標準[2]，24例DAS28評分> 5.1分為高活動組，36例DAS28評分≤5.1分為中低活動組。

1.2 排除標準 ①重疊其他風(fēng)濕病者，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征、嚴重的膝骨關(guān)節(jié)炎等；

②合并心血管、腦、肺、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴重疾病或近期有嚴重感染者；③妊娠或哺乳期婦女；④精神病患者以及無民事行為能力者。

1.3 倫理學(xué)要求 本研究經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理委員會批準，受試對象知情同意。

1.4 檢測指標與方法 詳細記錄患者性別、年齡、病程；采用問卷方式進行中醫(yī)證候的評分；采用免疫透射比濁法檢測C-反應(yīng)蛋白（CRP）、類風(fēng)濕因子（RF）、抗環(huán)瓜氨酸肽（CCP）抗體、免疫球蛋白IgG、IgA、IgM，補體C3、C4；采用全自動血沉儀檢測紅細胞沉降率（ESR）；抽取研究對象空腹靜脈血3 mL左右，取全血于24 h內(nèi)采用流式細胞儀法檢測B細胞計數(shù)、B細胞百分比，試劑盒購自杭州艾森生物有限公司（生產(chǎn)批號B000087）；留取血清并于-80 ℃凍存，標本收集完整后采用ELISA法檢測BAFF、BAFF-R，試劑盒購自北京安迪華泰生物科技有限公司（生產(chǎn)批號E-12403&201703、E-10095&201703）。所有檢測步驟均按照說明書進行操作。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 22.0軟件進行統(tǒng)計分析。正態(tài)分布資料以表示，偏態(tài)分布資料以中位數(shù)（四分位數(shù)間距）表示；組間比較滿足正態(tài)分布采用兩獨立樣本t檢驗或校正t檢驗，偏態(tài)分布采用Mann-Whitney（U）檢驗；計數(shù)資料采用Pearson χ2檢驗或校正χ2檢驗；相關(guān)性檢驗正態(tài)分布采用Pearson相關(guān)分析，偏態(tài)分布采用Speraman相關(guān)分析。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組B細胞功能比較 B細胞計數(shù)、B細胞百分比、BAFF及BAFF-R，RA組較正常對照組明顯增高（P < 0.05），高活動組較中低活動組明顯增高（P < 0.01）。見表1。

2.2 RA患者B細胞功能與實驗室指標的相關(guān)性 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，RA患者的B細胞計數(shù)與RF、抗CCP抗體、ESR、CRP、C3、IgG呈正相關(guān)

（P < 0.05）；B細胞百分比與抗CCP抗體、ESR、CRP、C4呈正相關(guān)（P < 0.05）；BAFF與抗CCP抗體、ESR、CRP、C3、IgG呈正相關(guān)（P < 0.05）；BAFF-R與CRP呈正相關(guān)（P < 0.05）。見表2。

2.3 RA患者B細胞功能與中醫(yī)證候的相關(guān)性 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，B細胞計數(shù)與關(guān)節(jié)腫脹、關(guān)節(jié)壓痛、關(guān)節(jié)局部發(fā)熱、疲倦乏力、舌質(zhì)紫暗呈正相關(guān)（P < 0.05）；B細胞百分比與關(guān)節(jié)腫脹、關(guān)節(jié)壓痛、關(guān)節(jié)局部發(fā)熱、納食減少呈正相關(guān)（P < 0.05）；

BAFF與關(guān)節(jié)腫脹、關(guān)節(jié)壓痛、關(guān)節(jié)局部發(fā)熱呈正相關(guān)（P < 0.05）；BAFF-R與納食減少、大便稀溏呈正相關(guān)（P < 0.05）。見表3。

3 討 論

3.1 B細胞計數(shù)與B細胞百分比 B細胞在抗原

的刺激下可分化為漿細胞，通過漿細胞合成和分泌自身抗體、免疫球蛋白，介導(dǎo)體液免疫應(yīng)答；而

B細胞的過量表達可引起自身免疫性疾病，特別是與RA的發(fā)病關(guān)系密切。早有研究發(fā)現(xiàn)RA患者滑膜下層及血管周圍有大量的B淋巴細胞浸潤[3]，還有研究發(fā)現(xiàn)RA外周循環(huán)及滑膜等組織中檢測的B細胞可通過參與產(chǎn)生自身抗體、活化T細胞、分泌炎性細胞因子[4-6]等參與RA的炎性反應(yīng)和骨破壞。本研究發(fā)現(xiàn)，RA患者B細胞計數(shù)、B細胞百分比較正常對照組明顯增高，高活動組較中低活動組明顯增高，提示RA患者體內(nèi)B細胞水平明顯增高，且與病情活動度呈正相關(guān)。本研究還發(fā)現(xiàn)，B細胞計數(shù)與RF、抗CCP抗體、ESR、CRP、C3、IgG呈正相關(guān)，B細胞百分比與抗CCP抗體、ESR、CRP、C4呈正相關(guān)，進一步說明RA患者過量表達的B細胞與特異性自身抗體和免疫球蛋白的產(chǎn)生、補體的激活及炎癥反應(yīng)的增強密切

相關(guān)。

3.2 BAFF與BAFF-R BAFF是腫瘤壞死因子配體超家族成員，是B淋巴細胞生長、分化和發(fā)育所需的重要免疫調(diào)控因子。研究表明，BAFF可通過抑制蛋白磷酸酶2A激活Erk1/2通路促進

B細胞的生存和增殖[7]；BAFF還通過與其細胞表面的受體結(jié)合產(chǎn)生信號發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用，如促進幼稚B細胞的分化和成熟，及抗體的產(chǎn)生和類型轉(zhuǎn)換[8]，目前已知BAFF有3個受體：B細胞成熟抗原、穿膜蛋白活化物和B細胞活化因子受

體[9]，其中BAFF-R是BAFF的特異性受體，在外周B細胞上表達[10]，能夠?qū)Ｒ慌cBAFF上的二硫鍵結(jié)合[11]，是介導(dǎo)B細胞存活的主要受體[12]。研究發(fā)現(xiàn)，BAFF通過與其特異性受體結(jié)合，介導(dǎo)PI3K/AKT/mTOR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，上調(diào)Bcl-2家族成員，可誘導(dǎo)抗凋亡蛋白Bcl-xL的表達，促凋亡蛋白Bad、Bim磷酸化等，從而抑制促凋亡蛋白，削弱凋亡，增加B細胞存活[13]。

本研究顯示，RA患者BAFF、BAFF-R較正常對照組明顯增高，高活動組較中低活動組明顯增高，且BAFF與抗CCP抗體、ESR、CRP、C3、IgG與呈正相關(guān)，BAFF-R與CRP呈正相關(guān)。早有研究表明，病情嚴重的RA患者滑液中可檢測到高濃度BAFF、BAFF-R[14]；RA患者血清中BAFF水平明顯升高，并與RF、ESR、CRP、PLT呈正相關(guān)[15]；BAFF的過度表達會造成B細胞免疫耐受失衡，導(dǎo)致RA的發(fā)生[16]。可見，RA患者體內(nèi)B細胞異常升高與高表達的BAFF、BAFF-R相關(guān)，且BAFF、BAFF-R與RA病情活動度呈正

相關(guān)。

3.3 RA患者B細胞功能與中醫(yī)證候的相關(guān)性分析 RA屬中醫(yī)學(xué)“尪痹”范疇，大多病程纏綿，而見關(guān)節(jié)腫脹、關(guān)節(jié)壓痛、關(guān)節(jié)局部發(fā)熱、疲倦乏力、納食減少、大便稀溏、舌質(zhì)紫暗等諸癥，本研究依據(jù)《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》[17]，將RA歸屬為“脾虛濕盛、脈絡(luò)痹阻”證候，早有研究發(fā)現(xiàn)脾虛濕盛、脈絡(luò)痹阻是RA發(fā)生、發(fā)展過程中的主要致病因素[18]，貫穿RA發(fā)展的始終，與RA患者的病情密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，B細胞計數(shù)與關(guān)節(jié)腫脹、關(guān)節(jié)壓痛、關(guān)節(jié)局部發(fā)熱、疲倦乏力、舌質(zhì)紫暗呈正相關(guān)，B細胞百分比與關(guān)節(jié)腫脹、關(guān)節(jié)壓痛、關(guān)節(jié)局部發(fā)熱、納食減少呈正相關(guān)，BAFF與關(guān)節(jié)腫脹、關(guān)節(jié)壓痛、關(guān)節(jié)局部發(fā)熱呈正相關(guān)，BAFF-R與納食減少、大便稀溏呈正相關(guān)，說明B細胞功能與RA的中醫(yī)證候呈正相關(guān)，可作為指導(dǎo)臨床辨證用藥及判斷中醫(yī)藥療效的實驗室指標之一。

4 結(jié) 語

越來越多的證據(jù)表明，B細胞的異?；罨赡茉诙喾N自身免疫性疾病的發(fā)病中起關(guān)鍵作用。B細胞調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)及其特異性調(diào)節(jié)生物制劑已經(jīng)成為研究熱點，本研究通過探討B(tài)淋巴細胞功能的變化及其與活動性指標、中醫(yī)證候的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，RA患者B細胞功能較正常對照組明顯增高，高活動組較中低活動組明顯增高，B細胞功能與RA疾病活動性指標及中醫(yī)證候呈正相關(guān)，說明RA患者

B細胞功能變化是反映病情活動性的指標之一，為臨床判斷RA病情、以B細胞為靶點治療RA、中醫(yī)藥治療RA提供了依據(jù)，有助于闡明RA的相關(guān)發(fā)病機制，為進一步治療RA提供了新思路。只有深入研究RA發(fā)病機制，才能有望尋找到更有效的治療策略，從而改善患者的指標及癥狀。但本研究未排除患者入選前用藥情況分析及藥物干預(yù)治療后上述指標的變化，下一步將進行更深入的

研究。

5 參考文獻

[1] 王勇，牟方祥，鐘兵，等.活動期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血T，B淋巴細胞及NK細胞表達變化的意義[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2017，14（11）：12-14.

[2] FELSON DT，ANDERSON JJ，BOERS M，et al.American college of rheumatology preliminary definition of improvement in rheumatoid arthritis[J].Arthritis Rheum，1995，38（6）：727-735.

[3] 葛均波，徐永健，梅長林.內(nèi)科學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2013：808-814

[4] KLEYER A，F(xiàn)INZEL S，RECH J，et al.Bone loss before the clinical onset of rheumatoid arthritis in subjects with anticitrullinated protein antibodies[J].Ann Rheum Dis，2014，73（5）：854-860.

[5] SUN JB，XIANG Z，SMITH KG，et al.Important role for FcγRIIB on B lymphocytes for mucosal antigen-induced tolerance and Foxp3+ regulatory T cells[J].J Immunol，2013，191（8）：4412-4422.

[6] TAKEMURA S，KLIMIUK PA，BRAUN A，et al.T cell activation in rheumatoid synovium is B cell dependent[J].

J Immunol，2001，167（8）：4710-4718.

[7] LIANG D，ZENG Q，XU Z，et al.BAFF activates Erk1/2 promoting cell proliferation and survival by Ca2+-CaMKII-dependent inhibition of PP2A in normal and neoplastic Blymphoid cells[J].Biochem Pharmacol，2014，87（2）：332-343.

[8] STOHI W.Biologic differences between various inhibitors of the BLyS/BAFF pathway：should we expect

differences belimumab and other inhibitors in develop

（下轉(zhuǎn)第32頁）

（上接第20頁）

ment？[J].Curr Rheumatol Rep，2012，14（4）：303-309.

[9] SHU HB，HU WH，JOHNSON H.TALL-1 is a novel member of the TNF family that down-regulated by mitogens[J].J Leukoc Biol，1999，65（5）：680-683.

[10] CHEN M，LIN X，LIU Y，et al.The function of BAFF on T helper cells in autoimmunity[J].Cytokine Growth Factor Rev，2014，25（3）：301-305.

[11] LIU Y，HONG X，KAPPLER J，et al.Ligand-receptor binding revealed by the TNF family member TALL-1[J].

Nature，2003，423（6935）：49-56.

[12] RYAN MC，GREWAL IS.Targeting of BAFF and APRIL for autoimmunity and oncology[J].Adv Exp Med Biol，2009，647：52-63.

[13] 張玲玲，魏偉.BAFF/BAFF-R通過PI3K/Akt/mTOR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)節(jié)B淋巴細胞功能在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病機制中的意義[J].中國藥理學(xué)通報，2010，26（7）：847-850.

[14] WOO YJ，YOON BY，JHUN JY，et al.Regulation of B cell activating fator（BAFF）receptor expressin by NK-κB signaling in rheumatoid arthritis B cells[J].Exp Mol Med，2011，43（6）：350-357.

[15] 王曉磊.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎B淋巴細胞刺激因子及CD19CD25B細胞亞群的研究[D].石家莊：河北醫(yī)科大學(xué)，2009.

[16] STOHL W，METYAS S，TAN SM，et al.B lymphocyte stimulator overexpression in patients with systemic lupus erythematosus：longitudinal observations[J].Arthritis Rheum，2003，48（12）：3475-3486.

[17] 國家食品藥品監(jiān)督管理局.中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原

則[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2002：115.

[18] 曹永賀，劉健.從脾論治類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的研究概

述[J].風(fēng)濕病與關(guān)節(jié)炎，2014，3（6）：65-67.

收稿日期：2018-05-19；修回日期：2018-06-29