呂艷關(guān)，夏順林，朱 婷

(揚(yáng)州大學(xué)附屬淮安市婦幼保健院 a.檢驗(yàn)科；b.小兒外科，江蘇淮安 223002)

膽道閉鎖(biliary atresia，BA)是一種常見(jiàn)的兒童膽道疾病，其臨床表現(xiàn)主要為膽管的漸進(jìn)性炎癥損傷，進(jìn)而導(dǎo)致肝功能受損和肝內(nèi)外膽管的纖維炎性閉塞[1]。如果治療不及時(shí)，可迅速發(fā)展為終末期肝硬化，嚴(yán)重威脅兒童健康。尿激酶纖溶酶原激活物受體(urokinase plasminogen activator receptor，uPAR)是一種單鏈膜結(jié)合蛋白，由廣泛的免疫細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)，目前研究顯示，急性肝功能衰竭、慢性肝病、非酒精性脂肪肝均存在高水平循環(huán)uPAR[2～4]。ALT，AST和GGT是臨床用于診斷肝膽疾病的重要轉(zhuǎn)氨酶，也是重要的肝功能檢查項(xiàng)目。本研究檢測(cè)膽道閉鎖患兒血清uPAR的表達(dá)量及與ALT，AST，GGT水平的相關(guān)性，探討血清uPAR對(duì)膽道閉鎖及肝功能異常是否具有一定的預(yù)測(cè)評(píng)估價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2015年1月～2018年3月在淮安市婦幼保健院小兒外科住院治療的膽道閉鎖患者25例，男∶女=13∶12，年齡3月～10歲；同時(shí)選取我院健康體檢兒童25例作為正常對(duì)照組，男∶女=11∶14，年齡3月～10歲。兩組之間年齡、性別構(gòu)成比差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.081，P=0.65；χ2=0.325，P=0.763)。入選標(biāo)準(zhǔn)：膽道閉鎖組患兒診斷均經(jīng)手術(shù)后病理切片證實(shí)。

1.2 試劑和儀器 貝克曼AU5800生化分析儀及其配套試劑；uPAR試劑盒(ELISA)購(gòu)于北京冬歌生物有限公司。

1.3 方法 采集所有研究對(duì)象外周靜脈血3 ml，4℃條件下4 000 r/min離心15 min，將分離出的血清于-80℃冰箱保存。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)定量檢測(cè)各組血清uPAR濃度；血清ALT，AST，GGT水平檢測(cè)采用貝克曼AU5800生化分析儀(A450 nm)；所有操作嚴(yán)格遵守儀器作業(yè)指導(dǎo)書(SOP)。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清中uPAR，ALT，AST及GGT表達(dá)水平比較 BA組和對(duì)照組血清uPAR表達(dá)水平分別為6 059.3±418.1 pg/ml和4 384.4±299.7 pg/ml，兩組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=16.3，P<0.01)，與正常對(duì)照組相比，BA組血清uPAR表達(dá)水平明顯增高。BA組血清GGT，AST，ALT水平分別為2 405.1±682.3 U/L，160.8±19.8 U/L，158.7±21.1 U/L，對(duì)照組血清GGT，AST和ALT水平分別為11.9±6.2 U/L，8.2±3.8 U/L和10.8±2.7 U/L，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=24.9，29.4，30.1，均P<0.01)。

2.2 BA組血清uPAR與ALT，AST，GGT相關(guān)性分析 Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，BA組血清uPAR表達(dá)水平與ALT，AST，GGT水平均呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.822，0.813，0.502，均P≤0.01，見(jiàn)圖1。

圖1 BA組血清uPAR與ALT，AST，GGT相關(guān)性分析

3 討論

膽道閉鎖(BA)是一種病因不明的慢性進(jìn)行性纖維化肝病，其發(fā)生可能由病毒感染、慢性炎性、基因突變或免疫失調(diào)等多種原因所導(dǎo)致[5]，但其確切機(jī)制至今仍未闡明。目前，對(duì)于受影響嚴(yán)重的兒童來(lái)說(shuō)，尚無(wú)針對(duì)BA行之有效的藥物治療方案，早期診斷、早期行Kasai術(shù)和肝移植是唯一的選擇。uPAR是一種具有高親和力的細(xì)胞膜受體，通過(guò)與尿激酶型纖溶酶原激活因子(urokinase plasminogen activator，uPA)結(jié)合，參與了許多細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路的調(diào)控，如細(xì)胞黏附、遷移、增殖、分化和細(xì)胞存活[6]。近年來(lái)，循環(huán)uPAR水平也被證實(shí)與慢性肝病有關(guān)，包括慢性乙型和丙型肝炎、肝硬化和肝細(xì)胞癌[7～10]。然而目前，有關(guān)血清uPAR在BA中的研究鮮有報(bào)道。本次研究結(jié)果顯示：BA組與對(duì)照組之間，血清uPAR表達(dá)水平具有顯著性差異，與正常對(duì)照組相比，BA患兒血清uPAR表達(dá)水平明顯增高，表明uPAR可能在BA發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。與此觀察相一致，慢性肝病患者中的uPAR表達(dá)量比健康正常人明顯升高[4]。此外，Sjowall等[2]研究發(fā)現(xiàn)，uPAR在非酒精性脂肪肝疾病患者中的表達(dá)升高，與肝功能和肝纖維化的嚴(yán)重程度有關(guān)。

血清ALT，AST和GGT是肝臟疾病檢查中非常重要的酶學(xué)檢測(cè)項(xiàng)目，對(duì)各種肝膽疾病的臨床診斷都具有關(guān)鍵作用。其中ALT和AST均被廣泛用作肝細(xì)胞損傷的生化指標(biāo)。ALT是一種主要存在于肝細(xì)胞質(zhì)中的細(xì)胞內(nèi)酶，可以反映干細(xì)胞的實(shí)質(zhì)損傷，在各種肝炎中均可發(fā)現(xiàn)ALT表達(dá)升高[11]。AST廣泛存在于機(jī)體的各種組織細(xì)胞中，在心肌細(xì)胞中含量最高，其次為肝臟，血清內(nèi)水平略低[12]，當(dāng)肝細(xì)胞壞死嚴(yán)重時(shí)，線粒體內(nèi)的AST便釋放出來(lái)，且其值越高越能體現(xiàn)肝細(xì)胞受損傷的嚴(yán)重程度。GGT是一種微粒體酶，主要存在于腎、肝和胰等多種組織中。正常情況下血清的GGT大部分來(lái)源于機(jī)體的肝臟，存在于肝細(xì)胞漿和肝內(nèi)膽管上皮中，是谷氨酰循環(huán)的關(guān)鍵酶[13]。本次研究結(jié)果表明，BA組與對(duì)照組之間，血清ALT，AST和GGT水平具有顯著性差異，BA患兒血清uPAR表達(dá)水平與ALT，AST，GGT水平均呈正相關(guān)關(guān)系，提示uPAR可能在BA肝細(xì)胞損傷的機(jī)制中發(fā)揮作用，與BA患兒的肝功能異常有關(guān)。

綜上所述，uPAR參與了BA的發(fā)生、發(fā)展，且與BA患兒肝功能異常密切相關(guān)。血清uPAR可作為BA預(yù)測(cè)、診斷及肝功能異常評(píng)估的重要生物指標(biāo)。