陳思航， 路宏朝， 尚書鳳， 王 琦， 顏文博， 王楊科

(陜西理工大學(xué) 生物科學(xué)與工程學(xué)院， 陜西 漢中 723000)

目前，飼料添加劑在水產(chǎn)養(yǎng)殖中已成為增產(chǎn)、增殖的常見方法。然而，長(zhǎng)期使用化學(xué)藥物、抗生素甚至激素，將導(dǎo)致食品安全、藥物殘留、耐藥性以及水體環(huán)境污染等問題的出現(xiàn)。因此，有關(guān)國(guó)際組織對(duì)某些抗生素和化學(xué)藥物在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用作了限制[1]，由此可見，減少乃至禁止抗生素在飼料中添加，將成為飼料產(chǎn)業(yè)發(fā)展的趨勢(shì)。所以，研究與開發(fā)新的替代藥物與開展健康安全養(yǎng)殖就成為水產(chǎn)養(yǎng)殖的發(fā)展方向，中草藥以其獨(dú)特的特點(diǎn)引起了人們的關(guān)注。中草藥是源于植物的藥材，具有天然、高效、毒副作用小、抗藥性不強(qiáng)、資源豐富等優(yōu)點(diǎn)，不僅能夠提高水產(chǎn)動(dòng)物的免疫力，防治常見疾病，而且還可調(diào)節(jié)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝、增進(jìn)食欲、降低餌料系數(shù)、促進(jìn)生長(zhǎng)，并能減少水質(zhì)污染[2]。研究開發(fā)對(duì)環(huán)境友好、無(wú)害、無(wú)殘留的中草藥添加飼料對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)發(fā)展，保證水產(chǎn)品安全及人類健康具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。本文以鯽魚為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，探討6味中草藥添加飼料對(duì)鯽魚誘食和生長(zhǎng)的影響，為進(jìn)一步開發(fā)魚用中草藥添加飼料提供資料。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)用魚

實(shí)驗(yàn)用鯽魚購(gòu)于漢中市魚類市場(chǎng)，體長(zhǎng)(13.13±1.17) cm，體重(38.56±4.07) g，個(gè)體均勻，健康活潑，雌雄兼用。

1.2 實(shí)驗(yàn)中草藥

實(shí)驗(yàn)所用中草藥購(gòu)于漢中市第二藥材公司，所用中草藥分別為甘草、板藍(lán)根、金銀花、陳皮、肉桂、杜仲葉粉，為減少誤差，確保實(shí)驗(yàn)一致性，一次性購(gòu)買足量6味中藥，冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 實(shí)驗(yàn)餌料

取等量上述6味中藥，水洗2次，加水浸泡30 min，第一次煎煮45 min，將藥汁倒出，再加水煎煮30 min，過濾，將2次藥汁合并濃縮成1 mL藥液相當(dāng)于1 g中藥干物質(zhì)的水煎劑，經(jīng)高壓滅菌后存放于冰箱(4 ℃)中。實(shí)驗(yàn)將處理好的中草藥藥液按適當(dāng)比例反復(fù)噴灑于基礎(chǔ)飼料上，攪勻、晾干，制成80 g/kg(Ⅱ組)、160 g/kg(Ⅲ組)、320 g/kg(Ⅳ組)的中草藥復(fù)方添加飼料備用。

1.4 實(shí)驗(yàn)用魚缸

50 cm×40 cm×40 cm方形玻璃透明魚缸用于誘食實(shí)驗(yàn)，57 cm×43 cm×33.5 cm的方形半透明塑料魚缸用于生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)期間魚缸內(nèi)盛有經(jīng)2 d曝氣的自來(lái)水，并有充氣泵不間斷充氣。

2 實(shí)驗(yàn)條件與方法

2.1 實(shí)驗(yàn)條件

實(shí)驗(yàn)期間水溫為16～20 ℃，pH為6～7，實(shí)驗(yàn)用水為曝氣2 d的自來(lái)水。

2.2 誘食實(shí)驗(yàn)

觸球法誘食觀察[3]：在實(shí)驗(yàn)開始前15 d，每天在魚缸內(nèi)放置吸取了蒸餾水的脫脂棉球，用以訓(xùn)練魚對(duì)棉球的啄咬。實(shí)驗(yàn)時(shí)，稱取3 g實(shí)驗(yàn)餌料，用紗布包扎后系上棉線，即為實(shí)驗(yàn)組試球(試球半徑約為1.5 cm)，為防止餌料漂浮在水面，可用不影響氣味的重物墜掛。對(duì)照組試球以3 g基礎(chǔ)餌料做同樣處理。

誘食實(shí)驗(yàn)開始前，從魚缸中隨機(jī)取出12尾空腹24 h的鯽魚，放入實(shí)驗(yàn)魚缸中，讓其適應(yīng)20 min，隨機(jī)確定以魚缸一點(diǎn)為中心，半徑5 cm為有效實(shí)驗(yàn)區(qū)域(簡(jiǎn)稱有效區(qū))，把預(yù)先做好的試劑球懸掛到有效實(shí)驗(yàn)區(qū)域中心點(diǎn)的水面下5 cm處，投入試球3 min后，實(shí)驗(yàn)者在隱蔽處開始連續(xù)目測(cè)記錄鯽魚進(jìn)入有效區(qū)的次數(shù)(啄食試球的總次數(shù))，統(tǒng)計(jì)時(shí)間為5 min，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，方法同上。實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)注意：①實(shí)驗(yàn)用水均為靜置2 d的自來(lái)水，水深約15 cm，每次實(shí)驗(yàn)進(jìn)行時(shí)都需要保證實(shí)驗(yàn)在同一個(gè)水平(將充氣泵取出)；②每次實(shí)驗(yàn)后換水，對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組交替進(jìn)行，保持每次實(shí)驗(yàn)條件一致；③每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后徹底清洗玻璃缸并更換實(shí)驗(yàn)魚，用過的實(shí)驗(yàn)魚放入水箱內(nèi)暫養(yǎng)。由于魚的取食有時(shí)間性，因此每次實(shí)驗(yàn)都安排在9：00進(jìn)行。

2.3 生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)

攝食生長(zhǎng)法[4]：挑選體質(zhì)健康、大小基本一致的個(gè)體，空腹24 h之后稱重，隨機(jī)放入魚缸內(nèi)，每缸15尾。實(shí)驗(yàn)分為4組。Ⅰ為對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)飼料；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ為實(shí)驗(yàn)組，分別飼喂制備好的實(shí)驗(yàn)餌料。喂食30 d，同時(shí)設(shè)置1個(gè)平行組。采用飽食量投喂法，按體重的2%進(jìn)行投餌，并根據(jù)生長(zhǎng)速度、水溫條件和攝餌情況作適當(dāng)調(diào)整。每日投喂兩次，時(shí)間分別為9：30和14：30，次日8：00換水1/3，31 d逐缸逐尾稱重并記錄。

測(cè)定方法：

增重率=[(實(shí)驗(yàn)?zāi)~體重-實(shí)驗(yàn)初魚體重)/實(shí)驗(yàn)初魚體重]×100%，

成活率=成活尾數(shù)/總尾數(shù)×100%，

特定生長(zhǎng)率=(ln末均重-ln初均重)/飼養(yǎng)天數(shù)×100%。

2.4 數(shù)據(jù)處理

誘食實(shí)驗(yàn)以5 min為單位，取實(shí)驗(yàn)鯽魚進(jìn)入有效區(qū)的次數(shù)作為觀察值，計(jì)算各重復(fù)觀察值的平均數(shù)，用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(M±SD)表示。以實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組數(shù)值之差的大小判斷實(shí)驗(yàn)餌料的誘食效果，差值為正表示誘食反應(yīng)，差值為負(fù)表示抑制反應(yīng)，用SPSS17.0軟件作統(tǒng)計(jì)分析。

生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)的原始數(shù)據(jù)通過Excel和SPSS處理，求實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的平均值與標(biāo)準(zhǔn)差，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(M±SD)表示，并用SPSS17.0軟件作t檢驗(yàn)。

所有檢驗(yàn)結(jié)果，當(dāng)P<0.05視為差異顯著，P<0.01視為差異極顯著意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

3.1 誘食實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理及分析

由表1可見，中草藥添加飼料后的各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間的誘食活性比較，3個(gè)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的差值均為正值，比值也均大于1，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)組均具有不同程度的誘食效應(yīng)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，Ⅱ組與對(duì)照組相比，誘食活性差異不顯著(P>0.05)；Ⅲ組與對(duì)照組相比，誘食活性差異顯著(P<0.05)；Ⅳ組與對(duì)照組相比，誘食活性差異極顯著(P<0.01)，同時(shí)Ⅲ組與Ⅳ組的差異亦有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此，這三組實(shí)驗(yàn)組之間的誘食活性強(qiáng)弱為：Ⅳ組>Ⅲ組>Ⅱ組。

表1 中草藥添加飼料對(duì)鯽魚的誘食活性

注：表中*表示與對(duì)照組比較差異顯著(P<0.05)，**表示差異極顯著(P<0.01)

3.2 生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)處理及分析

不同組實(shí)驗(yàn)餌料對(duì)鯽魚生長(zhǎng)的影響見表2。從實(shí)驗(yàn)對(duì)比來(lái)看，在同一基礎(chǔ)餌料中加入不同比例的中草藥并飼喂鯽魚，增重率較對(duì)照組高，尤其是Ⅲ組、Ⅳ組增重率顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。表明飼料添加中草藥能夠促進(jìn)鯽魚的生長(zhǎng)。

表2 中草藥添加飼料對(duì)鯽魚生長(zhǎng)的影響

注：表中*表示與對(duì)照組比較差異顯著(P<0.05)

比較對(duì)照組和各實(shí)驗(yàn)組的特定生長(zhǎng)率，可見，實(shí)驗(yàn)組特定生長(zhǎng)率均大于對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組隨中草藥濃度的增加，特定生長(zhǎng)率增大，顯示添加中草藥對(duì)鯽魚生長(zhǎng)具有促進(jìn)作用。

4 討論與結(jié)論

4.1 中草藥添加飼料對(duì)鯽魚的誘食效果

魚類的攝食活動(dòng)是由不同的感受器，如化學(xué)、視覺、機(jī)械等感受器，尤其是化學(xué)感受器受到刺激，引起的吞咽反射。誘食劑的作用正是這樣，隨飼料溶于水，會(huì)刺激魚類的嗅覺和味覺，影響魚類的攝食活動(dòng)。

通常認(rèn)為，中草藥添加飼料的誘食效果主要取決于水產(chǎn)動(dòng)物對(duì)其氣味、味道的嗜好[5]。由于不同物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的差異，魚類嗅覺與味覺感受器對(duì)它們的識(shí)別能力及敏感性均不同[6]，所以，誘食與魚類自身的生物學(xué)特性及生理機(jī)能有關(guān)，如張琳琳等發(fā)現(xiàn)鱸魚對(duì)肉桂等有一定的趨避反應(yīng)，而郭永軍等[7]實(shí)驗(yàn)表明，肉桂對(duì)鯉魚具有誘食作用。目前知道，水產(chǎn)動(dòng)物攝食引誘物質(zhì)主要是氨基酸類、生物堿和核苷酸等物質(zhì)[8-9]，同時(shí)，具有芳香性、甜味性或苦味性的中草藥都不同程度具有誘食作用，且不同中草藥提取物起效所需的濃度也不同。

本實(shí)驗(yàn)中，所采用6味中藥中的陳皮、肉桂，含有肉桂醛、檸檬烯、月桂烯等揮發(fā)油，被較多的實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)具有較好的誘食效果[7，10-12]。甘草雖未見報(bào)道作為魚類誘食劑，但甘草含的甜度(相當(dāng)于蔗糖的300倍左右)是可以提高和擴(kuò)展誘食因子的作用范圍。

誘食作用及效果不僅與誘食活性成分有關(guān)，也與其濃度有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在所設(shè)定的濃度范圍內(nèi)，中草藥添加的濃度越高，誘食效果越好。然而，并不是濃度越高越好，梁思析等[13]用黃柏水抽提液濃度為0.005%以上時(shí)有引誘作用，至0.05%濃度時(shí)，引誘效果較好，但當(dāng)濃度超過5.0%時(shí)，引誘效果就沒有再增加。陳振昆等[14]實(shí)驗(yàn)表明，濃度0.10%陳皮對(duì)草魚誘食作用最佳，當(dāng)陳皮添加量達(dá)0.25%以后，再增加添加量，其誘食作用反而減小，當(dāng)添加量達(dá)3.00%時(shí)，其誘食作用完全消失。可見，誘食劑的添加還要控制濃度。

4.2 中草藥添加飼料對(duì)鯽魚生長(zhǎng)的影響

中草藥含有多種活性物質(zhì)和天然營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，可以增進(jìn)食欲，促進(jìn)機(jī)體的代謝和蛋白質(zhì)以及酶的合成，提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率，進(jìn)而加快水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育，提高餌料轉(zhuǎn)化率，降低餌料系數(shù)，增強(qiáng)水產(chǎn)動(dòng)物免疫力和抗應(yīng)激能力，改善水產(chǎn)品品質(zhì)。

本實(shí)驗(yàn)選用的6味中草藥，其單味藥對(duì)魚類生長(zhǎng)的影響，已有文獻(xiàn)報(bào)道[15-20]，結(jié)果顯示，添加單味中草藥對(duì)不同魚類生長(zhǎng)有積極的作用，可以不同程度地提高魚體的增重率和生長(zhǎng)性能，降低飼料系數(shù)。本實(shí)驗(yàn)6味中草藥配伍的復(fù)方制劑添加于常規(guī)魚飼料中，提高了鯽魚的增重率、特定生長(zhǎng)率和成活率，顯著促進(jìn)了鯽魚生長(zhǎng)，提高了飼料利用率。其機(jī)理可能與以下三方面有關(guān)：首先，此中草藥復(fù)方添加，具有較好的誘食作用，增加魚的攝食，促進(jìn)生長(zhǎng)；其次，中草藥含有多種復(fù)雜的生物活性物質(zhì)(生物堿類、黃酮類、多糖類、萜類、微量元素)和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，可起到補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)的作用，為其生長(zhǎng)奠定物質(zhì)基礎(chǔ)；最后，中草藥復(fù)方添加提高生長(zhǎng)性能還可能通過促進(jìn)對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收來(lái)實(shí)現(xiàn)[2，21-22]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組成活率比對(duì)照組成活率高，由此說(shuō)明，這種復(fù)方中草藥添加飼料有可能通過提高魚的抵抗能力，從而提高魚的成活率，反映了中草藥添加飼料具有增強(qiáng)魚免疫力的功效。

因此，魚類養(yǎng)殖中，使用中草藥添加飼料不僅能增強(qiáng)魚的免疫力、促進(jìn)魚的生長(zhǎng)，而且環(huán)保、健康，是一種值得開發(fā)，具有廣闊前景的綠色魚用飼料添加劑，是今后養(yǎng)殖業(yè)研究和發(fā)展的方向，應(yīng)該開展更加深入的研究探討。