□ 楊小霞 肇慶市水產(chǎn)技術(shù)推廣中心 巫培豪 肇慶學(xué)院食品與制藥工程學(xué)院 曹 中 肇慶市水產(chǎn)技術(shù)推廣中心林曼玉 陳冰如 覃 亮 肇慶學(xué)院食品與制藥工程學(xué)院

紫背天葵（Begonia fimbristipula Hance）別名紅鳳菜、紅背菜、觀音菜等，屬多年生草本植物，其富含維生素B1、維生素A、鉀、鈣以及銅、鋅、鐵等人體必需的微量元素，可作為保健時(shí)蔬亦可干燥后入藥，是產(chǎn)后婦女補(bǔ)血的首選蔬菜[1-2]，且紫背天葵內(nèi)含豐富的黃酮苷和生物堿，具有抗寄生蟲及抗病毒的能力[3]。在肇慶，豐富肥沃的土地資源及舒適的溫濕度為紫背天葵的生長(zhǎng)提供了優(yōu)越的條件，紫背天葵作為肇慶主要特產(chǎn)之一深受市民的喜愛(ài)。由于紫背天葵特殊的營(yíng)養(yǎng)和藥用價(jià)值，本文就其對(duì)食品中常見(jiàn)腐敗菌的抑菌效果進(jìn)行了研究，以期提高紫背天葵作為功能性保健食品或藥物的開(kāi)發(fā)價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

新鮮紫背天葵，采于鼎湖山，經(jīng)烘干、粉碎后供實(shí)驗(yàn)使用；枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大腸桿菌（Escherichia coli）、黑曲霉菌（Aspergillus niger），由肇慶學(xué)院食品與制藥工程學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室提供；沙堡氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。

HH-S2恒溫水浴鍋，江蘇省金壇市環(huán)宇科學(xué)儀器廠；DHG-9070B干燥箱，上海浦東榮豐科學(xué)儀器有限公司；FY135粉碎機(jī)，天津市泰斯特儀器有限公司；SW-CJ-2FD超凈工作臺(tái)，蘇凈集團(tuán)安泰公司；PYX-DHS-50X65隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱，上海市躍進(jìn)醫(yī)療器械廠；LRH-150生化培養(yǎng)箱，上海浦東榮豐科協(xié)儀器有限公司；YX280A手提式不銹鋼壓力蒸汽滅菌器，上海三申醫(yī)療器機(jī)有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 紫背天葵水提物的制備

紫背天葵干燥品進(jìn)行粉碎后過(guò)40目篩，用電子天平稱量紫背天葵干燥品 50 g，放置 1 000 mL 燒杯中加入600 mL蒸餾水浸泡過(guò)夜，取浸泡好的紫背天葵浸液于已放置石棉網(wǎng)的電熱爐上加熱，先用武火煮沸后改再用文火煎煮1.5 h，用紗布隔渣過(guò)濾收集濾液，濾渣再加600 mL蒸餾水重復(fù)煎煮2次后進(jìn)行濾液合并，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在水浴60 ℃條件下把紫背天葵溶液減壓濃縮至50 mL，濃縮液冷卻后以4 000 r/min轉(zhuǎn)速在離心機(jī)中離心15 min，最后取上清液用孔徑為0.22 μm的濾膜進(jìn)行過(guò)濾除菌，即得以原藥計(jì)藥液質(zhì)量濃度為1 g/mL的紫背天葵水提物，密封標(biāo)記好于冰箱4 ℃條件下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 紫背天葵脂提物的制備

稱取50 g藥物裝入兩個(gè)濾紙筒后放入提取筒中，燒瓶?jī)?nèi)放入2顆沸石，連接固定好燒瓶和提取筒，用量筒量分別取150 mL乙酸乙酯試劑后從提取筒上方倒入燒瓶中，連接冷凝管索氏提取器安裝完畢，打開(kāi)水浴鍋電源，設(shè)置溫度為90 ℃，用索氏提取法加熱回流6 h直至提取筒中的提取液顏色接近無(wú)色時(shí)，關(guān)閉電源停止加熱，移去水浴鍋使之自然冷卻后用燒杯收集合并藥液，利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀40 ℃條件下減壓濃縮至 50 mL，以 4 000 r/min轉(zhuǎn)速離心15 min，最后取上清液用孔徑為0.22 μm的濾膜進(jìn)行過(guò)濾除菌，即得以原藥計(jì)藥液質(zhì)量濃度為1 g/mL的紫背天葵脂提物，密封標(biāo)記好置4 ℃條件下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 菌懸液的配制

用接種環(huán)挑取少量菌種接種于適宜的斜面培養(yǎng)基中，進(jìn)行2次反復(fù)轉(zhuǎn)種，活化好的菌種使用接種環(huán)刮取三環(huán)菌落，注入約30 mL已滅菌的無(wú)菌水中，來(lái)回震蕩混勻，制成含菌量約為106～107CFU/mL的菌懸液，備用。使用前需振蕩均勻，用以防止菌液濃度不均。

1.2.4 紫背天葵提取物對(duì)菌種活性的抑制測(cè)定

分別取紫背天葵水提取液、酯提液2 mL于燒杯中，以無(wú)菌水為空白對(duì)照，分別放入若干直徑為6 mm的無(wú)菌濾紙密封于浸泡過(guò)夜。用移液槍吸取200 μL菌懸液于固體培養(yǎng)基中涂布均勻，用鑷子分別取出浸泡了紫背天葵提取液的濾紙片吹干后貼于含菌的平板上，每個(gè)樣品進(jìn)行3組重復(fù)濃度。以上操作均在無(wú)菌條件下進(jìn)行，所應(yīng)用的試驗(yàn)儀器均經(jīng)高壓滅菌處理，操作完成后將菌株置于37 ℃培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)18～24 h后觀察結(jié)果，真菌置28 ℃培養(yǎng)48 h后觀察，用游標(biāo)卡尺量取抑菌圈大小，記錄數(shù)據(jù)取平均值[4-5]。

1.2.5 最低抑菌濃度（MIC）測(cè)定

取 10 mL 1 g/mL 紫背天葵提取物于試管中，采用二倍稀釋法對(duì)藥液進(jìn)行濃度稀釋至1、0.5、0.25、0.125、0.062 5、0.032、0.016 g/mL。在各平皿內(nèi)分別加入2.0 mL不同濃度的紫背天葵提取液，每皿再倒入20 mL已滅菌的培養(yǎng)基，冷卻后制成含藥培養(yǎng)基。分別加入0.2 mL備用的菌懸液，涂布均勻，放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，觀察各種菌生長(zhǎng)情況。以完全沒(méi)有菌生長(zhǎng)的最低提取物濃度為該提取物的最低抑菌濃度（MIC），每個(gè)濃度重復(fù)操作3次。

2 結(jié)果與分析

2.1 紫背天葵提取物的抑菌效果

紫背天葵提取物對(duì)不同菌的抑菌效果見(jiàn)表1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，紫背天葵水提取物和脂提物對(duì)金黃色葡萄球菌菌表現(xiàn)出顯著的抑制效果，對(duì)枯草芽孢桿菌和大腸桿菌的抑制效果一般，對(duì)黑曲霉菌均無(wú)抑制作用。對(duì)于同一種細(xì)菌的抑制效果，紫背天葵水提物的抑菌效果優(yōu)于脂提物。

2.2 紫背天葵提取物的最低抑菌濃度（MIC）

不同濃度紫背天葵提取物對(duì)供試菌的抑菌活性見(jiàn)表2、3，紫背天葵水提取物對(duì)金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和大腸桿菌的最低抑菌濃度為0.062 5、0.25、0.5 g/mL；紫背天葵脂提取物對(duì)金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和大腸桿菌的最低抑菌濃度為0.25、0.5、1 g/mL。

3 討論

本文研究和比較了紫背天葵水提和脂提物對(duì)金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和黑曲霉菌的生長(zhǎng)抑制作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，紫背天葵水提取物和脂提物對(duì)金黃色葡萄球菌均表現(xiàn)出顯著的抑制效果，對(duì)枯草芽孢桿菌和大腸桿菌的抑制效果一般，對(duì)黑曲霉菌無(wú)抑制作用。而且對(duì)于同一種細(xì)菌的抑制效果，紫背天葵水提物的抑菌效果優(yōu)于脂提物。目前，由于抗生素的濫用造成很多微生物產(chǎn)生了抗藥性，這給臨床治療帶來(lái)了一定的困難，急需尋找新的抗菌藥源。本實(shí)驗(yàn)證明了紫背天葵水提和脂提物能對(duì)部分細(xì)菌表現(xiàn)出不同的抑制作用，希望能為紫背天葵日后在醫(yī)藥、食品方面的應(yīng)用提供研究基礎(chǔ)。

表1 紫背天葵提取物對(duì)幾種微生物的抑菌效果

表2 紫背天葵水提取物對(duì)幾種微生物的最低抑菌濃度（MIC）

表3 紫背天葵脂提取物對(duì)幾種微生物的最低抑菌濃度（MIC）

注：-表示無(wú)菌生長(zhǎng)；+表示有不超過(guò)1/6平皿面積生長(zhǎng)；++表示有不超過(guò)1/4平皿面積的菌落生長(zhǎng)；+++表示有不超過(guò)1/3平皿面積的菌落生長(zhǎng)；++++表示有不超過(guò)1/2平皿面積的菌落生長(zhǎng)；+++++表示有不超過(guò)2/3平皿面積的菌落生長(zhǎng)，++++++表示有超過(guò)2/3平皿面積的菌落生長(zhǎng)。