馬 麗，石榮珍，鄧九零，邵錦暉，高建莉

（浙江中醫(yī)藥大學(xué)，浙江杭州 310053）

乳腺癌是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，近年來(lái)我國(guó)乳腺癌的發(fā)病率逐年上升，嚴(yán)重危害了女性健康。乳腺癌早期不具有典型的癥狀及體征，一旦發(fā)現(xiàn)往往已處于晚期。乳腺癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是引起患者死亡的最重要原因。乳腺癌一般通過(guò)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血道轉(zhuǎn)移及直接蔓延轉(zhuǎn)移至肺、骨、肝等器官，轉(zhuǎn)移過(guò)程迅速。因此，研究乳腺癌轉(zhuǎn)移機(jī)制具有重要意義。

胸腺素最早是從小牛胸腺中提取獲得的一組小分子多肽，分為α，β和γ家族，其中胸腺素β4（thy?mosin β4，Tβ4）和Tβ10是Tβ家族中的2類(lèi)，是由多個(gè)氨基酸殘基組成的肌動(dòng)蛋白單體結(jié)合蛋白［1-2］。有文獻(xiàn)報(bào)道，Tβ4和Tβ10在肺癌、肝癌、食管癌和結(jié)腸癌等多種惡性腫瘤組織中表達(dá)明顯增強(qiáng)，且與腫瘤的轉(zhuǎn)移及侵襲密切相關(guān)［3-4］。在腫瘤轉(zhuǎn)移、血管生成、細(xì)胞凋亡和創(chuàng)傷愈合等多種生理病理過(guò)程中發(fā)揮重要作用。但Tβ4和Tβ10對(duì)乳腺癌的影響尚不清楚。

腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程極其復(fù)雜，涉及多種基因。大量資料證明，基質(zhì)金屬蛋白酶2（matrix metallopro?teinase-2，MMP2）和MMP9在胃癌、肺癌、子宮內(nèi)膜癌及膀胱癌等惡性腫瘤組織中的表達(dá)顯著上升，并與腫瘤細(xì)胞遷移有關(guān)［5］；信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄活化因子3（signal transducers and activators of transcrip?tion 3，Stat3）能影響腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲；癌基因c-myc是調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的癌基因之一，可激活腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制基因；骨髓基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1（stromal cell-derived factor-1，Sdf1）是由骨髓基質(zhì)細(xì)胞及其他相關(guān)細(xì)胞分泌的一種趨化因子，與腫瘤細(xì)胞增殖、浸潤(rùn)及定向遷移有關(guān)。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，Tβ4和Tβ10在小鼠乳腺癌組織及正常組織中的表達(dá)水平存在顯著差異，但關(guān)于Tβ4和Tβ10對(duì)小鼠乳腺癌增殖、轉(zhuǎn)移及侵襲的影響目前尚未有相關(guān)報(bào)道。本研究旨在通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)探究Tβ4和Tβ10對(duì)小鼠乳腺癌轉(zhuǎn)移的影響，并初步探索其可能的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、細(xì)胞、試劑和儀器

雌性BALB/c裸小鼠，SPF級(jí)，4～6周齡18只，體質(zhì)量14～16 g，許可證號(hào)碼：SCXK（滬）2013-0016，上海西普爾必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司；飼養(yǎng)條件：溫度 22～25℃，濕度 60%～80%，光照時(shí)間7∶00-19∶00，每日更換水、飼料和墊料。本實(shí)驗(yàn)內(nèi)容經(jīng)浙江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理與倫理委員會(huì)通過(guò)，所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物操作均按浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理辦法進(jìn)行。小鼠乳腺癌細(xì)胞4T1和熒光素酶標(biāo)記的4T1-Luc細(xì)胞由芝加哥大學(xué)何通川教授惠贈(zèng)，細(xì)胞用DMEM完全培養(yǎng)基（含10%胎牛血清、青霉素1×105U·L-1和鏈霉素0.1 g·L-1），在37℃，飽和濕度及5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每1～2 d按1∶4傳代。

胎牛血清（批號(hào)：A66E00F，美國(guó)Gemini公司）；DMEM培養(yǎng)基（批號(hào)：8117065，賽默飛世爾儀器有限公司）；對(duì)照腺病毒（pENTER）、Tβ4過(guò)表達(dá)腺病毒（TMSB4X）和Tβ10過(guò)表達(dá)腺病毒（TMSB10）（山東維真生物科技有限公司），Tβ4檢測(cè)引物，F(xiàn)：AGAAGCTTCCAGCAACCATGTCCGA；R：GCATTTTGGATCCTGCAAGACATCTT；Tβ10 檢測(cè)引物，F(xiàn)：TGGCAGACAAACCAGACATGG，R：CGAAGAGGACGGGGGTAGG；胰蛋白酶（杭州吉諾生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司）；磷酸鹽緩沖液粉末、青霉素-鏈霉素溶液、Hoechst 33258染色液（碧云天生物技術(shù)研究所）；四甲偶氮唑藍(lán)（methyl thiazolyltetrazolium，MTT）、二甲亞砜、聚凝胺（美國(guó)Sigma公司）；甲紫（結(jié)晶紫，中國(guó)上海標(biāo)本模型廠(chǎng)）；異氟烷（深圳瑞沃德生命科技有限公司）；乙酸（杭州化學(xué)試劑有限公司）；甲醛溶液（上海凌峰化學(xué)試劑有限公司）；基質(zhì)膠、24孔板和Transwell小室（美國(guó)BD Biosciences公司）。培養(yǎng)板和培養(yǎng)皿（美國(guó)BD Falcon公司）；BJ-2CD超凈工作臺(tái)（上海博訊實(shí)業(yè)有限公司）；離心機(jī)（德國(guó)Eppendorf公司）；MULTISKAN-FC酶標(biāo)儀（美國(guó)Thermo公司）；MCO-18AIC細(xì)胞培養(yǎng)箱（日本三洋公司）；PMI-3000B熒光倒置顯微鏡（德國(guó)徠卡公司）；7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR（美國(guó)ABI公司）。

1.2 MTT和甲紫法檢測(cè)4T1細(xì)胞增殖

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的4T1細(xì)胞，按每孔1×104均勻接種于96孔板，待細(xì)胞長(zhǎng)至85%～90%，分別加入0.5 μL pENTER,TMSB4X或TMSB10病毒液，每孔加入2 μL聚凝胺以促進(jìn)感染，每組3個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)24，48和72 h后，參照文獻(xiàn)［6］中MTT法，測(cè)定每組吸光度（A）值，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率。細(xì)胞增殖抑制率（%）=〔1-（TMSB4X 或TMSB10組A值-空白組A值）/（pENTER組A值-空白組A值）〕×100%。甲紫法檢測(cè)4T1細(xì)胞增殖能力：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的4T1細(xì)胞，按每孔5×104均勻接種于24孔板，待細(xì)胞長(zhǎng)至85%～90%，分別加入2.5 μL pENTER,TMSB4X或TMSB10病毒液，每孔加入2 μL聚凝胺以促進(jìn)感染，每組3個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)24，48和72 h，棄去培養(yǎng)液，每孔加入400 μL 0.2%結(jié)晶紫染液，室溫染色30～40 min后棄去染料，干燥后每孔加500 μL 20%醋酸，搖床振蕩10 min，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在波長(zhǎng)560 nm處讀取A值，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率。

1.3 劃痕法檢測(cè)4T1細(xì)胞遷移能力

4T1按每孔5×104細(xì)胞均勻接種于24孔培養(yǎng)板內(nèi)，過(guò)夜后，使用200 μL規(guī)格的槍頭在板底劃“一”字形劃痕。每孔分別加入2.5 μL對(duì)應(yīng)腺病毒，每孔加入7 μL聚凝胺提高感染率，培養(yǎng)24 h。棄培養(yǎng)液，顯微鏡下隨機(jī)選取6個(gè)視野拍照，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。細(xì)胞遷移率（%）=〔（0 h寬度-24 h寬度）/0 h寬度〕×100%。

1.4 Transwell法檢測(cè)4T1細(xì)胞侵襲能力

不同腺病毒感染后的4T1細(xì)胞培養(yǎng)24 h，收集細(xì)胞并制備細(xì)胞懸液。參考文獻(xiàn)［7］的方法，上室加5×1044T1細(xì)胞，下室加500 μL含3%FBS的培養(yǎng)液。培養(yǎng)箱中放20 h后，取出小室并擦去小室內(nèi)部的基質(zhì)膠和未遷移細(xì)胞，多聚甲醛固定20 min，Hoechst33258染色30 min，取下小室底部薄膜，顯微鏡下每組隨機(jī)選取5個(gè)視野拍照計(jì)數(shù)穿孔細(xì)胞，計(jì)算侵入到下室的細(xì)胞數(shù)目。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.5 小鼠乳腺癌模型制備

選取健康BALB/c裸小鼠18只，2%異氟烷氣霧麻醉小鼠后，于左側(cè)倒數(shù)第2對(duì)乳腺脂肪墊皮下接種分別感染了對(duì)照腺病毒（pENTER組）、過(guò)表達(dá)Tβ4腺病毒（TMSB4X組）或Tβ10腺病毒（TMSB10組）腺病毒36 h的熒光素標(biāo)記4T1細(xì)胞（每只1×106細(xì)胞），制備4T1乳腺癌小鼠模型［8］。造模成功后，每周于小鼠瘤體內(nèi)注射10 μL對(duì)應(yīng)腺病毒。每隔5 d用游標(biāo)卡尺測(cè)量瘤體長(zhǎng)徑L（mm）和短徑W（mm），計(jì)算瘤體積（V）。V（mm3）=（L+W）×L×W×0.2618。

1.6 小鼠活體熒光成像觀(guān)察腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移

造模成功后第7天開(kāi)始，每周每只小鼠腹腔注射熒光素酶底物0.1 mL，自由活動(dòng)5 min后放入吸入式麻醉機(jī)麻醉后進(jìn)行活體熒光成像，檢測(cè)小鼠腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移（連續(xù)5周）。第35天，頸椎脫臼處死。剖取肺及腫瘤組織，肉眼觀(guān)察臟器色澤、質(zhì)地并稱(chēng)質(zhì)量。肺組織用甲醛固定48 h后，計(jì)數(shù)肺組織表面轉(zhuǎn)移灶數(shù)量，游標(biāo)卡尺測(cè)量瘤灶大小，計(jì)算肺轉(zhuǎn)移率。肺轉(zhuǎn)移率（%）=（發(fā)生肺轉(zhuǎn)移的小鼠數(shù)/每組小鼠總數(shù)）×100%。

1.7 RT-PCR檢測(cè)4T1細(xì)胞MMP2，MMP9，Stat3，c-myc和Sdf1 mRNA水平

取1×1064T1細(xì)胞分別感染相應(yīng)腺病毒24 h后，根據(jù)說(shuō)明書(shū)用Trizol試劑分離提取細(xì)胞總RNA，逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA。按說(shuō)明書(shū)（2×SGFast PCR Master Mix）配制反應(yīng)體系，每個(gè)樣本設(shè)置3復(fù)孔，PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增條件為：94℃ 15 s，53℃20 s，72℃ 41 s，共41個(gè)循環(huán)，75℃延伸3 min?；蛳鄬?duì)表達(dá)用2-△△Ct計(jì)算，以GAPDH作為內(nèi)參基因，引物序列見(jiàn)表1。

Tab.1 Sequence of primers

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)用表示。使用SPSS 19.0分析數(shù)據(jù)。通過(guò)單因素方差分析（one-way ANOVA）和t檢驗(yàn)評(píng)估平均值差異的顯著性，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胸腺素 β4和 β10對(duì)4T1細(xì)胞增殖的影響

甲紫和MTT結(jié)果顯示（圖1，表2），Tβ4 和Tβ10過(guò)表達(dá)腺病毒作用4T1細(xì)胞24，48和72 h時(shí)，與pENTER組相比，TMSB4X和TMSB10組4T1細(xì)胞增殖及增殖抑制率無(wú)明顯變化。

Fig.1 Effect of thymosin β4（T β 44）and T β10 on prolifer?ation of 4T1 cells by crystal violet viability assay.4T1 cells were infected with 2.5 μL control adenovirus （pENTER），Tβ4 overexpression adenovirus （TMSB4X）and Tβ10 overexpression adenovirus （TMSB10）.Inhibition of cell proliferation was detected at 24，48 and 72 h，respectively.

Tab.2 Effect of T β4 and T β10 on proliferation of 4T1 cells by MTT

2.2 胸腺素 β4和 β10對(duì)4T1細(xì)胞遷移能力的影響

劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果（圖2）顯示，不同腺病毒作用4T1細(xì)胞24 h后，對(duì)照pENTER組細(xì)胞遷移率為（22±7）%，TMSB4X和TMSB10組細(xì)胞遷移率分別為（36±6）%和（36±4）%（P＜0.05），表明Tβ4和Tβ10明顯促進(jìn)了4T1細(xì)胞的遷移。

2.3 胸腺素 β4和 β10對(duì)4T1細(xì)胞侵襲能力的影響

Transwell法結(jié)果（圖3）顯示，不同腺病毒作用4T1細(xì)胞20 h后，pENTER組穿過(guò)小室的細(xì)胞數(shù)目為179±25，TMSB4X和TMSB10組穿過(guò)小室的細(xì)胞數(shù)目分別為197±30和230±27，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示Tβ4和Tβ10對(duì)4T1細(xì)胞的侵襲無(wú)明顯影響。

2.4 胸腺素 β4和 β10對(duì)乳腺癌模型小鼠4T1細(xì)胞生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的影響

Fig.2 Effect of thymosin β4 and β10 on migration of 4T1 cells.See Fig.1 for cell treatment.Cell migration rate was detected at 24 h post infection.B was the semi-quantitative result of A.，n=3，＊P＜0.05，compared with pENTER group.

Fig.3 Effect of T β4 and T β10 on invasion of 4T1 cells.See Fig.1 for the cell treatment.Number of cells passing through Transwell was detected at 20 h.B was the semi-quantitative result of A.

乳腺癌模型小鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果（圖4A）顯示，各組小鼠瘤體積無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。小鼠活體熒光成像數(shù)據(jù)（圖4B）顯示，28 d時(shí)，pENTER組小鼠乳腺癌未出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，TMSB4X和TMSB10組小鼠乳腺癌開(kāi)始出現(xiàn)轉(zhuǎn)移。與pENTER組相比，TMSB4X和TMSB10組小鼠肺表面結(jié)節(jié)增多（P＜0.05），肺轉(zhuǎn)移率較高，但瘤質(zhì)量變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表3）。表明Tβ4和Tβ 10對(duì)小鼠乳腺癌轉(zhuǎn)移具有促進(jìn)作用。

Fig.4 Effect of T β4 and T β10 on growth and metastasis of breast cancer in mice.Breast cancer mice were injected with 10 μL pENTER，TMSB4X，or TMSB10 per week for 5 weeks，Tumor volume was measured every 5 d，tumor growth and metastasis in mice were observed by bioluminescence imaging every week.A：Tumor volume；B：Bioluminescence imaging at 28 d.＊P＜0.05，compared with pENTER group.

Tab.3 Effect of T β4 and T β10 on tumor mass,lung metastasis and pulmonary surface nodules of breast cancer in mice

2.5 胸腺素 β4和 β10對(duì)4T1細(xì)胞MMP2，MMP9，Stat3，c-myc和Sdf1 mRNA水平的影響

RT-PCR結(jié)果（圖5）顯示，不同腺病毒作用4T1細(xì)胞24 h后，與pENTER組相比，TMSB4X和TMSB10組4T1細(xì)胞MMP2，MMP9，Sdf1和Stat3mRNA水平顯著上調(diào)（P＜0.05，P＜0.01），c-mycmRNA水平較pENTER組無(wú)差異。

Fig.5 Effect of T β4 and T β10 on mRNA level of MMP2，MMP9，Stat3，c-myc and Sdf1 in 4T1 cells by RT-PCR.4T1 cells were infected with 12.5 μL pENTER，TMSB4X or TMSB10 for 24 h before detected.，n=3，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01，compared with pENTER group.

3 討論

本研究結(jié)果表明，Tβ4及Tβ10均顯著促進(jìn)小鼠乳腺癌的轉(zhuǎn)移。兩者體外均能促進(jìn)4T1細(xì)胞的遷移，但對(duì)增殖和侵襲無(wú)顯著影響。其促進(jìn)乳腺癌轉(zhuǎn)移的作用可能與上調(diào)MMP2，MMP9，Sdf1和Stat3mRNA水平有關(guān)。

在細(xì)胞水平研究發(fā)現(xiàn)，Tβ4能顯著促進(jìn)4T1細(xì)胞的遷移，對(duì)增殖和侵襲無(wú)顯著影響。與以前報(bào)道的Tβ4可明顯促進(jìn)黑色素瘤B16-F10細(xì)胞的遷移、而對(duì)B16-F10細(xì)胞的侵襲及增殖無(wú)明顯影響一致［9］。Ryu等［10］研究發(fā)現(xiàn)，Tβ4能誘導(dǎo)蛋白激酶磷酸化，進(jìn)而負(fù)性調(diào)節(jié)糖原合成酶激酶3α、β連環(huán)素和E鈣黏糖蛋白表達(dá)，促進(jìn)胃癌細(xì)胞的遷移。Tβ4的肽鏈結(jié)構(gòu)能與肌動(dòng)蛋白結(jié)合，影響腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)［11］。Tβ4能夠使細(xì)胞中E鈣黏糖蛋白表達(dá)下調(diào)，β連環(huán)素表達(dá)增加，細(xì)胞間黏附性降低進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)［12］。但Tβ4對(duì)不同腫瘤細(xì)胞增殖的作用差異較大，機(jī)制尚不明確。有報(bào)道稱(chēng)，結(jié)腸SW480細(xì)胞中Tβ4過(guò)表達(dá)能導(dǎo)致細(xì)胞骨架中微絲結(jié)構(gòu)的破壞，促進(jìn)細(xì)胞大量增殖［13］。Tang等［14］發(fā)現(xiàn)Tβ4可能通過(guò)提高IQ基序三磷酸鳥(niǎo)苷酶激活蛋白1（IQ motif containing GTPase activating protein 1，IQGAPI）/整合素連接激酶（integrin-link kinase，ILK）復(fù)合物的水平激活Ras相關(guān)性C3肉毒毒素底物1（Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1，Rac1）基因，從而促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞的遷移。

Tβ4與Tβ10有85%同源性。本研究結(jié)果顯示，Tβ10對(duì)4T1細(xì)胞的影響與Tβ4相似，Tβ10也能促進(jìn)4T1細(xì)胞的遷移，而對(duì)增殖及侵襲無(wú)明顯影響。據(jù)報(bào)道，Tβ10在乳腺癌、食管癌、黑色素瘤和結(jié)腸癌等癌組織中高表達(dá)，而在相應(yīng)的正?；蛄夹越M織中則未見(jiàn)表達(dá)，其表達(dá)水平與乳腺癌、胰腺癌、甲狀腺癌的轉(zhuǎn)移能力和惡化程度呈正相關(guān)［15］。但也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，Tβ10過(guò)表達(dá)能抑制膽管癌細(xì)胞的遷移，而Tβ10沉默則能促進(jìn)膽管癌細(xì)胞的遷移，其抑制作用與低表達(dá)的Tβ10激活Ras，上調(diào)細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2（extracellular regulated kinase 1/2，ERK1/2）水平有關(guān)［16］。Tβ10在不同腫瘤細(xì)胞中的作用具有差異性，Tβ10肽鏈中部與Tβ4具有一致的保守序列，也能與肌動(dòng)蛋白結(jié)合形成復(fù)合物來(lái)調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白纖維的組裝，進(jìn)而影響細(xì)胞骨架的重排，影響腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)［17］。細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力的增強(qiáng)是促進(jìn)腫瘤細(xì)胞遷移的重要因素之一，腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移潛能的增高伴有肌動(dòng)蛋白多聚體的丟失和微絲結(jié)構(gòu)的解聚，而Tβ10過(guò)表達(dá)與細(xì)胞骨架變化高度相關(guān)［18］。

小鼠乳腺癌模型的結(jié)果表明，TMSB4X和TMSB10組小鼠乳腺癌較早出現(xiàn)肺轉(zhuǎn)移，且肺表面結(jié)節(jié)數(shù)較多。Kobayashi等［19］發(fā)現(xiàn)，Tβ4過(guò)表達(dá)的纖維肉瘤小鼠較Tβ4沉默的纖維肉瘤小鼠更易發(fā)生腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移Cha等［9］發(fā)現(xiàn)，Tβ4過(guò)表達(dá)較Tβ4沉默的B16-F10細(xì)胞所形成的腫瘤更易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。蘭海燕［20］發(fā)現(xiàn)，Tβ10在正常乳腺組織及癌旁組織中不表達(dá)，而在乳腺癌癌細(xì)胞質(zhì)中呈彌漫表達(dá)，與本研究結(jié)果一致。

本研究檢測(cè)了幾種與細(xì)胞遷移有關(guān)的基因的表達(dá)水平。結(jié)果顯示，Tβ4和Tβ10均能夠上調(diào)4T1細(xì)胞MMP2，MMP9和Sdf1mRNA的水平，顯著上調(diào)Stat3mRNA的水平，對(duì)c-mycmRNA的水平無(wú)顯著影響。MMP2和MMP9是細(xì)胞外基質(zhì)重塑和腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中的明膠酶，其上調(diào)與多種腫瘤的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。MMP2與MMP9均能夠促進(jìn)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的生成，其水平與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)［21］。MMP2和MMP9也可與星形細(xì)胞上調(diào)基因1（astro?cyte elevated gene-1，AEG-1）相互作用從而促進(jìn)甲狀腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移［22］。Sdf1能與宮頸癌Hela細(xì)胞表達(dá)的蛋白聚糖4（syndecan-4）形成復(fù)合物，增加Hela細(xì)胞MMP9的水平［23］，起到促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移的作用。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，Sdf1在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中過(guò)表達(dá)，敲除Sdf1可以抑制肺A549細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移［24］。Stat3可通過(guò)抑制腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的促炎癥反應(yīng)細(xì)胞因子從而促進(jìn)腫瘤的遷移［25］。據(jù)報(bào)道，Stat3能夠促進(jìn)黑色素瘤的轉(zhuǎn)移，Stat3沉默可抑制黑色素瘤細(xì)胞的遷移［26］。以上結(jié)果說(shuō)明，Tβ4與Tβ10促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞遷移并促進(jìn)小鼠乳腺癌肺轉(zhuǎn)移的作用，可能與其上調(diào)MMP，MMP9，Stat3和Sdf1水平有關(guān)。

腫瘤轉(zhuǎn)移是多個(gè)信號(hào)通路參與的多階段的復(fù)雜過(guò)程，腫瘤細(xì)胞經(jīng)過(guò)黏附、降解、運(yùn)動(dòng)遷移和血管生成等生物學(xué)過(guò)程最終發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。有學(xué)者檢測(cè)了大腸癌患者腫瘤組織及正常黏膜組織中Tβ4和VEGF基因的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)二者的表達(dá)水平呈明顯正相關(guān)，且在腫瘤組織中二者表達(dá)水平較高，說(shuō)明Tβ4促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移還可能與促進(jìn)腫瘤血管的生成有關(guān)［27］。與Tβ4相似，Tβ10的過(guò)表達(dá)能夠影響VEGF的生成進(jìn)而影響腫瘤細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移［18］。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，Tβ10通過(guò)干擾Ras抑制其下游信號(hào)通路，減少VEGF的生成，進(jìn)而抑制血管生成。

本研究未能進(jìn)一步研究Tβ4和Tβ10研究4T1細(xì)胞VEGF的影響及其及其與乳腺癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系，也未考察沉默Tβ4和Tβ10后乳腺癌轉(zhuǎn)移的變化。上述內(nèi)容值得進(jìn)一步研究?？傊琓β4和Tβ10過(guò)表達(dá)與小鼠乳腺癌轉(zhuǎn)移及4T1細(xì)胞遷移有關(guān)，有望成為對(duì)抗乳腺癌轉(zhuǎn)移的新治療靶點(diǎn)，對(duì)開(kāi)發(fā)抗乳腺癌藥物的新型治療策略具有重要意義。