范作卿　鄒德慶　王娜　郭光　朱琳

摘要：為了解柞蠶雄蛾?duì)I養(yǎng)液保肝降酶的功能，采用谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性檢測與病理組織學(xué)切片觀察的方法，研究柞蠶雄蛾?duì)I養(yǎng)液對四氯化碳中毒小鼠肝損傷的作用。結(jié)果表明：柞蠶雄蛾?duì)I養(yǎng)液大劑量組與小劑量組均可明顯降低四氯化碳中毒小鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）水平，治療效果達(dá)顯著水平（P<0.05），與乙肝寧具有相同作用。通過肝組織切片觀察，柞蠶雄蛾?duì)I養(yǎng)液小劑量組可見部分肝細(xì)胞點(diǎn)狀壞死，有輕度肝損傷，而柞蠶雄蛾?duì)I養(yǎng)液大劑量組小鼠肝組織結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞排列規(guī)則，未見炎癥。表明柞蠶雄蛾?duì)I養(yǎng)液能減少肝細(xì)胞變性、壞死的程度和范圍，對受損傷的肝組織具有明顯保護(hù)作用，且大劑量效果更佳。

關(guān)鍵詞：柞蠶雄蛾?duì)I養(yǎng)液；四氯化碳；保肝；谷丙轉(zhuǎn)氨酶；功能試驗(yàn)

中圖分類號：S885.1：F307.5 文獻(xiàn)標(biāo)識號：A 文章編號：1001-4942（2018）08-0148-04

Study on Liver-Protecting Function of Tussah

Male Moth Nutrient Solution on Mice

Fan Zuoqing， Zou Deqing， Wang Na， Guo Guang， Zhu Lin

（Sericultural Research Institute of Shandong Province， Yantai 264002， China）

Abstract To understand the liver-protecting function of tussah male moth nutrient solution， the alanine transaminase （ALT） activity assay and histopathological observation were used to study the effect of tussah male moth nutrient solution on liver injury of mice induced by carbon tetrachloride poisoning. The results showed that the tussah male moth nutrition in high dose group and low dose group both could decrease ALT level in serum of poisoning mice. The therapeutic effect was significant compared with the carbon tetrachloride model group（P<0.05）. And its effect was the same as that of positive drug Yiganning. The histopathologic examination showed that there were partial necrosis of liver cells and mild liver injury in low dose group. While the liver tissue structure was normal in high dose group. The liver cells arranged regularly， and no inflammation occurred. Therefore， it indicated that the nutrient solution of tussah moth could reduce the extent of liver cell degeneration and necrosis， and had a significant protective effect on the injured liver， and high doses were better.

Keywords Tussah male moth nutrient solution； Carbon tetrachloride； Liver protection； Alanine transaminase （ALT）； Function test

我國柞蠶資源豐富，近年來對柞蠶雄蛾的綜合加工利用已引起人們的高度重視，柞蠶雄蛾的相關(guān)保健品及藥物已被證明具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力[1]、降血脂[2]、抗腫瘤[3]等多種功能?，F(xiàn)已開發(fā)出一些食品、保健品和醫(yī)藥品，取得了較大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。例如“延生護(hù)寶液”系以雄蠶蛾為主藥，配以人參、鹿茸、驢腎、仙茅、肉桂等多味中藥而成，對男女腎虛引起的疾病有一定的防治作用[4]。新型中藥復(fù)方制劑——柞蠶雄蛾口服液具有明顯增強(qiáng)免疫力，降低過氧脂質(zhì)（Lpo）含量的抗衰老作用[5]。柞蠶雄蛾?duì)I養(yǎng)液是山東省蠶業(yè)研究所研究團(tuán)隊(duì)選用初羽化、未交尾的柞蠶雄蛾為原料，通過酒精浸泡后低溫減壓抽提得到的富含生物活性的保健產(chǎn)品，現(xiàn)已完成了其提取工藝研究及成分檢測[6，7]。柞蠶雄蛾?duì)I養(yǎng)液可明顯降低由半胱氨酸所致高脂血癥小鼠血清中的血脂四項(xiàng)水平，因而對于高脂血癥有良好的治療效果，經(jīng)試驗(yàn)證明其有效成分對小鼠的細(xì)胞免疫和體液免疫均具有明顯的增強(qiáng)作用，對單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)功能也有一定提升作用[2]，并且還可逆轉(zhuǎn)放療后荷瘤大鼠Th1/Th2 漂移狀態(tài)，改善荷瘤機(jī)體免疫功能，增強(qiáng)抗腫瘤細(xì)胞免疫功能，可作為惡性腫瘤傳統(tǒng)放療中的輔助用藥[8-10]。本研究對柞蠶雄蛾?duì)I養(yǎng)液是否對小鼠具有保肝降酶的作用進(jìn)行了試驗(yàn)，以期為柞蠶雄蛾?duì)I養(yǎng)液的保健與藥用價(jià)值提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料及主要儀器設(shè)備

柞蠶雄蛾?duì)I養(yǎng)液，山東省蠶業(yè)研究所2017年提取制備；雄性ICR小鼠，每只18～20 g，購自濟(jì)南金豐實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司；谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑盒，購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司；四氯化碳（分析純），購自天津市富宇精細(xì)化工有限公司；乙肝寧顆粒，購自九芝堂股份有限公司。

HM325輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)，購自賽默飛世爾（上海）儀器有限公司；機(jī)博視達(dá)拍照顯微鏡，購自深圳市博視達(dá)光學(xué)儀器有限公司；H2200R冷凍離心機(jī)，購自長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 小鼠分組及給藥 將小鼠隨機(jī)分設(shè)5組，每組6只，A組為空白對照組，B組為四氯化碳模型組，C組為乙肝寧陽性對照組，給藥劑量為6.8 mg/（g·d），D組為柞蠶雄蛾?duì)I養(yǎng)液大劑量組，給藥劑量為0.010 mL/（g·d），E組為柞蠶雄蛾?duì)I養(yǎng)液小劑量組，給藥劑量為0.005 mL/（g·d）。除A、B組外，其他組按照對應(yīng)藥物與劑量，每日灌胃小鼠1次，連續(xù)4 d，于最后一次灌胃1 h后，給小鼠腹腔注射2.5%四氯化碳油溶液0.010 mL/g（包括B組），20 h后每組隨機(jī)取3只小鼠摘眼取血于1.5 mL離心管中，靜置2 h后3 500 r/min離心，吸取上層血清，-20℃冷凍備用。

1.2.2 酶活性檢測與切片處理 用谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑盒測定小鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。同時(shí)對各組選取的3只小鼠進(jìn)行解剖，摘取肝臟組織，以純凈水洗去血污，4%福爾馬林固定，HE染色，石蠟包埋切片，在200×顯微鏡下進(jìn)行病理組織學(xué)觀察、拍照，并對肝臟炎癥及損傷情況進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 小鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測定結(jié)果

由表1看出，B組谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性顯著高于其余各組（P<0.05），表明B組小鼠四氯化碳中毒達(dá)顯著水平；而C、D、E組谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性都顯著低于B組（P<0.05），表明柞蠶雄蛾?duì)I養(yǎng)液大、小劑量組與乙肝寧藥品都對小鼠肝臟的保護(hù)作用達(dá)顯著水平；其中D組與A組無顯著差異，表明柞蠶雄蛾?duì)I養(yǎng)液大劑量組可將四氯化碳中毒小鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶降低到正常水平，因此認(rèn)為柞蠶雄蛾?duì)I養(yǎng)液可明顯降低四氯化碳中毒小鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平，對小鼠肝細(xì)胞具有明顯保護(hù)作用。

2.2 小鼠肝組織切片結(jié)果

如圖1所示，A組小鼠肝組織結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞排列均勻、規(guī)則，肝細(xì)胞未見變性、濁腫及壞死等形態(tài)學(xué)改變，匯管區(qū)也無急、慢性炎細(xì)胞浸潤。B組小鼠肝組織中可見肝細(xì)胞廣泛腫脹，部分肝細(xì)胞脂肪樣變性，甚至有較多的肝細(xì)胞壞死，壞死區(qū)可見較多的急、慢性炎細(xì)胞浸潤，說明小鼠受四氯化碳損傷嚴(yán)重。C組小鼠肝組織結(jié)構(gòu)較正常，壞死區(qū)可見急、慢性炎細(xì)胞浸潤，肝組織病變程度輕于B組，重于D組，說明乙肝寧對四氯化碳所致小鼠的肝臟損傷有一定的減輕作用。D組小鼠肝組織結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞排列較規(guī)則，腫脹不明顯，肝細(xì)胞中未見急、慢性炎細(xì)胞浸潤，說明大劑量柞蠶雄蛾?duì)I養(yǎng)液對四氯化碳所致小鼠的肝臟損傷有明顯減輕作用。E組小鼠肝組織中可見肝細(xì)胞輕度腫脹，部分肝細(xì)胞氣球樣變，肝組織中可見部分肝細(xì)胞點(diǎn)狀及小灶狀壞死，壞死區(qū)可見急、慢性炎細(xì)胞浸潤，但其壞死程度及范圍明顯輕于B組，說明小劑量柞蠶雄蛾?duì)I養(yǎng)液對四氯化碳所致小鼠的肝臟損傷有減輕作用。

2.3 小鼠肝臟炎癥及損傷情況分析

由表2可以看出，B組小鼠由于受四氯化碳毒性影響肝臟炎癥都達(dá)重度程度，肝損傷嚴(yán)重。C組受四氯化碳毒性影響肝臟炎癥中度或不明顯，肝損傷輕度或不明顯。D組受四氯化碳毒性影響肝臟炎癥輕度或不明顯，肝損傷情況極輕。E組受四氯化碳毒性影響肝臟炎癥中度，肝損傷情況輕度或中度。表明大、小劑量柞蠶雄蛾?duì)I養(yǎng)液均可起到保護(hù)小鼠肝臟不受四氯化碳損傷、減輕肝臟炎癥的功效，其中以大劑量柞蠶雄蛾?duì)I養(yǎng)液作用效果更佳。

3 討論與結(jié)論

柞蠶雄蛾?duì)I養(yǎng)液可明顯降低四氯化碳中毒小鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平，與B組相比，治療作用達(dá)顯著水平，且大劑量柞蠶雄蛾?duì)I養(yǎng)液可將四氯化碳中毒小鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶降低到正常水平。通過肝組織切片觀察，E組可見部分肝細(xì)胞點(diǎn)狀壞死，有輕度肝損傷，而D組小鼠肝組織結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞排列規(guī)則，未見炎癥。因而表明柞蠶雄蛾?duì)I養(yǎng)液能減少肝細(xì)胞變性、壞死的程度和范圍，對受損傷的肝組織具有明顯保護(hù)作用，且大劑量柞蠶雄蛾?duì)I養(yǎng)液作用效果更佳。

柞蠶雄蛾?duì)I養(yǎng)液是一類富含蛋白質(zhì)[6]、雄性激素類[11]、黃酮[12]等多種活性成分的復(fù)合營養(yǎng)制品，對其保肝降酶的功效成分還有待于進(jìn)一步定性，其對保肝降酶的作用機(jī)理及對相關(guān)基因的調(diào)節(jié)作用也有待于進(jìn)一步研究。

參 考 文 獻(xiàn)：

[1] 鄒德慶，鄭淑湘，李全宏，等.柞蠶雄蛾濃縮液成分及免疫調(diào)節(jié)功能的研究[J].食品科學(xué)，2006，27（5）：231-234.

[2] 鄒德慶，鄭淑湘，阮懷軍，等.柞蠶雄蛾濃縮液對肝細(xì)胞的保護(hù)和對高脂血癥的治療效果[J].蠶業(yè)科學(xué)，2006，32（4）：530-534.

[3] 張維東，張?jiān)掠ⅲ醭?，?柞蠶雄蛾提取液對荷瘤大鼠放療后免疫功能的影響[J].中國藥理學(xué)通報(bào)，2008，24（8）：1115-1116.

[4] 楊宇雁，紀(jì)雪松. 用薄層掃描法測定延生護(hù)寶液中人參皂苷含量[J]. 沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，1998，36（4）：287-288.

[5] 艾永循，曹華，張澤軍.柞蠶雄蛾口服液對小鼠、大鼠抗衰老作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2000，25 （4）：55-56.

[6] 范作卿，郭光，肖連明，等.柞蠶雄蛾濃縮液最佳提取工藝研究[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，47（5）：105-108.

[7] 范作卿，王娜，朱琳，等.柞蠶雄蛾濃縮液脫脂工藝改進(jìn)與檢測[J].中國蠶業(yè)，2017，38（3）：23-27.

[8] 張?jiān)掠?，張維東，王朝霞，等.柞蠶雄蛾提取液對放療后荷瘤大鼠Th1/Th2漂移的影響[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2009，9（5）：821-823.

[9] Zhang W D，Dong Q，Jia Q，et al.Experimental studies on effect of concentrated liquor from male zooid of Antheraea pernyi to the immune function of mice[J]. Journal of Qilu Oncology，2004，11（8）：799-802.

[10]Zhang W D，Huang S Y，Jia Q，et al.Experimental study on mechanisms of reversing the radiate immune inhibition of rats with the extract from male zooid of Antheraea pernyi[J].Journal of International Oncology，2006，33（8）：634-636.

[11] 范作卿，鄒德慶，李智峰，等.高效液相色譜法測定柞蠶雄蛾濃縮液中睪丸酮含量[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009（9）：97-98.

[12]田野，岳喜慶，楊梅. 柞蠶雄蛾黃酮的提取及其體外抗氧化活性分析[J].食品科學(xué)，2014，35（16）：85-90.