劉桂花 劉宣麟 譚梅娥 何承輝

摘要：目的 制備天山雪蓮提取物（SIHE）的固體脂質(zhì)納米粒（SLNs），并對其形態(tài)、粒徑、電位、包封率及穩(wěn)定性等進(jìn)行考察；考察SIHE-SLNs和SIHE中蘆丁和綠原酸在Caco-2細(xì)胞中的攝取。方法 采用HPLC建立蘆丁和綠原酸的含量測定方法。采用高壓勻質(zhì)法制備SIHE-SLNs。采用CCK-8法測定SIHE對Caco-2細(xì)胞存活率的影響。建立Caco-2細(xì)胞模型，進(jìn)行SIHE-SLNs和SIHE中有效成分蘆丁和綠原酸在Caco-2細(xì)胞中的攝取。結(jié)果 制備的SIHE-SLNs具有較小的粒徑和較高的包封率。SIHE濃度低于250 ?g/mL對Caco-2細(xì)胞無細(xì)胞毒性。SIHE-SLNs及SIHE中蘆丁和綠原酸在Caco-2細(xì)胞中的攝取量隨藥物濃度和藥物作用時間的增加而增加，SIHE-SLNs中的攝取量高于SIHE；抑制劑維拉帕米對SIHE-SLNs和SIHE中綠原酸的作用均隨濃度的增加而降低，對SIHE中兩成分的降低效果更顯著；底物根皮苷可以同時競爭性抑制SIHE-SLNs和SIHE中蘆丁的攝取，但對綠原酸影響不大。結(jié)論 本研究制備了質(zhì)量良好的SIHE-SLNs。SIHE-SLNs和SIHE中蘆丁和綠原酸在Caco-2細(xì)胞中的攝取受濃度、時間和P-糖蛋白抑制劑及底物的影響。

關(guān)鍵詞：天山雪蓮提取物固體脂質(zhì)納米粒；蘆??；綠原酸；Caco-2細(xì)胞；P-糖蛋白

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2018.12.019

中圖分類號：R283.5；R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1005-5304（2018）12-0076-07

Abstract： Objective To prepare Saussureae Involucaratae Herba extracts （SIHE） loaded solid lipid nanoparticles （SLNs）； To inspect the shape， particle size， potential， encapsulation efficiency and stability of SIHE-SLNs； To inspect uptake of rutin and chlorogenic acid of SIHE-SLNs and SIHE in Caco-2 cells. Methods The method for determination of rutin and chlorogenic acid was established by HPLC. SIHE-SLNs were prepared by high pressure homogenization. The effects of SIHE on the survival rate of Caco-2 cells were determined by CCK-8 method. Caco-2 cell model was established， and uptake test of rutin and chlorogenic acid in Caco-2 cells was carried out. Results Prepared SIHE-SLNs had a smaller particles size and higher entrapment efficiency. SIHE had no cytotoxicity to Caco-2 cells in the dose of 250 ?g/mL. The uptake of rutin and chlorogenic acid in Caco-2 cells of SIHE-SLNs and SIHE increased with increase of drug concentration and action time， while the absorption of SIHE-SLNs was higher than that of SIHE. The effects of verapamil on chlorogenic acid in SIHE-SLNs and SIHE decreased with increase of drug concentration and was more remarkable in SIHE. The substrate phloridzin could simultaneously competitively inhibit the uptake of rutin in SIHE-SLNs and SIHE， but had no effect on chlorogenic acid. Conclusion SIHE-SLNs prepared in this study have good quality. Uptake of rutin and chlorogenic acid in Caco-2 cells of SIHE-SLNs and SIHE are influenced by concentration， time， P-glycoprotein inhibitor and substrate.

Keywords： Saussureae Involucratae Herba extract loaded solid lipid nanoparticles； rutin； chlorogenic acid； Caco-2 cells； P-glycoprotein

天山雪蓮為菊科植物天山雪蓮Saussurea involucrata（Kar. et Kir.）Sch.-Bip.的地上部分，是維吾爾民族常用藥[1-2]。天山雪蓮具有散寒除濕、活血通經(jīng)、抗炎鎮(zhèn)痛、收縮子宮的功效，主要用于各種風(fēng)濕性關(guān)節(jié)病、風(fēng)寒濕痛、月經(jīng)不調(diào)等。研究表明，天山雪蓮含有黃酮類、苯丙素類、多糖、生物堿和內(nèi)酯等成分，具有抗氧化、抗炎、抗疲勞和抗腦缺血/再灌注損傷等藥理作用[3-5]。前期研究表明，蘆丁和綠原酸是天山雪蓮提取物（SIHE）的主要有效成分[6-7]，但因其溶解性較差，口服吸收效果差，生物利用度低，限制了其臨床使用[8]。

固體脂質(zhì)納米粒（solid lipid nanoparticles，SLNs）是20世紀(jì)90年代發(fā)展起來的一種納米給藥載體，是由可生物降解的固體脂質(zhì)為載體，將藥物包裹于其中制備而成[9-10]。SLNs具有高包封率，低毒或幾乎無毒，可有效提高藥物的生物利用度，同時能夠提高不穩(wěn)定藥物的穩(wěn)定性，良好的脂溶性使其具有緩控釋及靶向作用[11-13]。此外，SLNs具有多種制備方法及給藥途徑[14]，目前已用于多種藥物制劑的研究。

Caco-2細(xì)胞來源于人結(jié)腸腺癌細(xì)胞，其結(jié)構(gòu)和功能類似于人小腸上皮細(xì)胞，體外培養(yǎng)一段時間后能分化出小腸微絨毛結(jié)構(gòu)，并含有與小腸刷狀緣上皮相似的酶系[15-16]。Caco-2細(xì)胞模型可以在細(xì)胞水平提供關(guān)于藥物在小腸中的過程，被廣泛運(yùn)用于藥物口服機(jī)制的考察，研究藥物在小腸的攝取、代謝、轉(zhuǎn)運(yùn)和排泄等過程，及P-糖蛋白介導(dǎo)的多藥耐藥性（MDR）[17-19]。近年來，隨著藥學(xué)研究的發(fā)展，Caco-2細(xì)胞模型在中藥研究中的應(yīng)用越來越廣泛[20]。

本研究采用高壓勻質(zhì)法制備SIHE-SLNs，并通過Caco-2細(xì)胞模型研究SIHE-SLNs及SIHE中有效成分蘆丁和綠原酸在Caco-2細(xì)胞中的攝取，為后續(xù)研究提供基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

ME104型電子天平（美國梅特勒-托利多儀器有限公司），Agilent 1260型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司），NS1001L Panda2K型高壓勻質(zhì)機(jī)（意大利Niro Soavi），DZKW-S-A型電熱恒溫水浴鍋（北京永光明醫(yī)療儀器廠），KQ-100DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），Millipore超濾離心管（Microcon YM-10，截留分子量10 kDa，USA）。TGL-16K型高速冷凍離心機(jī)（湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司），JM21200EX透射電鏡（日本電子公司），SynergyHTX多功能酶標(biāo)儀（美國伯騰儀器有限公司），BDS-FL型倒置顯微鏡（日本奧林巴斯公司），HERA cell-150i CO2恒溫培養(yǎng)箱（美國賽默飛儀器有限公司），BCM-1300A超凈工作臺（日本AIRTECH公司）。

SIHE（批號20170315-1），新疆維吾爾自治區(qū)藥物研究所自制；蘆丁對照品（批號100080-201409，純度>98%），中國食品藥品檢定研究院；綠原酸對照品（批號110753-201415，純度>98%），中國食品藥品檢定研究院。單硬脂酸甘油酯（中國醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司，批號F20151002），卵磷脂（上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號F20160322），山崳酸甘油酯（Compritol 888 ATO，批號3545PPD），吐溫- 80（上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號F20161110）。胎牛血清（FBS，Gibco），DMEM培養(yǎng)基（Hyclone），磷酸鹽緩沖液（PBS，Gibico），Hank's平衡鹽溶液（HBSS，Gibico），胰蛋白酶（Hyclone），二甲基亞砜（DMSO，北京化工廠），維拉帕米（Sigma），根皮苷（Sigma），乙腈（色譜純，F(xiàn)isher），其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 蘆丁、綠原酸含量測定

2.1.1 色譜條件

色譜柱：Reliasil C18（4.6 mm×250 mm，5 ?m）；流動相：乙腈（A）-0.4%磷酸水溶液（B），梯度洗脫（0 min，13%A；15 min，13%A；16 min，15%A；40 min，l5%A）；流速1.0 mL/min；檢測波長：蘆丁257 nm，綠原酸327 nm；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：10 ?L。

2.1.2 混合對照品貯備液的制備

精密稱取蘆丁對照品4.83 mg、綠原酸對照品5.02 mg，置25 mL容量瓶中，加入甲醇溶液溶解，搖勻，定容，即得蘆丁濃度為193.20 ?g/mL、綠原酸濃度為200.80 ?g/mL的混合對照品貯備液。

2.1.3 供試品溶液的制備

稱取SIHE粉末5.23 mg，加入甲醇溶液溶解，搖勻，用0.22 ?m微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.1.4 專屬性考察

精密量取空白SLNs及含藥SLNs各3 mL，置于10 mL量瓶中，加入甲醇，于60 ℃水浴破壞10 min，用甲醇稀釋至刻度，離心，取上清液，過濾。精密吸取混合對照品貯備液2 mL至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度。按上述色譜條件進(jìn)樣，色譜圖見圖1。供試品色譜中與對照品色譜相同保留時間處有色譜峰，而陰性對照無相應(yīng)峰，說明樣品中其他成分對綠原酸和蘆丁的測定無干擾，且兩成分色譜峰與相鄰峰的分離度均大于1.5。

2.1.5 線性關(guān)系考察

分別精密吸取混合對照品貯備液0.125、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、8.00 mL加入10 mL容量瓶中，稀釋至刻度，即得蘆丁濃度分別為2.42、4.83、9.66、19.32、38.64、77.28、154.56 ?g/mL，綠原酸濃度分別為2.51、5.02、10.04、20.08、40.16、80.32、160.64 ?g/mL的系列混合對照品溶液。分別精密吸取混合對照品溶液10 ?L，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄相應(yīng)的峰面積。以對照品濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得蘆丁和綠原酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程分別為Y=25.139X-0.178（r2=0.999 8）、Y=76.521 X-2.612（r2=0.999 9），結(jié)果表明，蘆丁在2.42～154.56 ?g/mL、綠原酸在2.51～160.64 ?g/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.6 精密度試驗(yàn)

精密吸取蘆丁和綠原酸混合對照品溶液10 ?L，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件測定，連續(xù)測定6次，記錄峰面積，計算RSD。結(jié)果蘆丁和綠原酸的峰面積RSD分別為0.71%、1.01%，表明精密度良好。

2.1.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，精密吸取10 ?L，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件，分別于0、2、4、6、8、10、12、24 h測定，結(jié)果供試品溶液中蘆丁和綠原酸峰面積RSD分別為1.16%、0.59%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.8 重復(fù)性試驗(yàn)

按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液5份，精密吸取供試品溶液10 ?L，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件測定，結(jié)果蘆丁和綠原酸峰面積RSD分別為1.14%、1.27%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.1.9 加樣回收率試驗(yàn)

按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備已知蘆丁、綠原酸濃度分別為25.12、14.36 ?g/mL的供試品溶液，共3份，準(zhǔn)確加入蘆丁濃度為38.64 ?g/mL、綠原酸濃度為40.16 ?g/mL的混合對照品溶液0.5 mL，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件測定，計算蘆丁和綠原酸的回收率及其RSD。結(jié)果蘆丁的回收率分別為100.72%、98.15%、102.30%，RSD=2.08%；綠原酸的回收率分別為99.58%、101.90%、102.00%，RSD=1.35%。

2.2 天山雪蓮提取物固體脂質(zhì)納米粒的制備及表征

2.2.1 天山雪蓮提取物固體脂質(zhì)納米粒的制備

采用高壓勻質(zhì)法制備SIHE-SLNs。稱取處方量的山崳酸甘油酯、單硬脂酸甘油酯、卵磷脂、SIHE，加入適量無水乙醇，在（80±2）℃水浴條件下熔融混合均勻，形成均勻的油相。取處方量的吐溫-80分散于水中，在（80±2）℃水浴條件下熔融混合均勻，形成均勻的水相。將油相與水相攪拌混合均勻，加入高壓勻質(zhì)機(jī)中進(jìn)行2次勻質(zhì)乳化（10 000 r/min），冰水浴冷卻，即得。

2.2.2 形態(tài)觀察

將SIHE-SLNs溶液1 mL用蒸餾水稀釋10倍后滴于銅網(wǎng)上，使用2%磷鎢酸染色，于透射電鏡下觀察其形態(tài)，結(jié)果見圖2。透射電鏡下，SIHE-SLNs為球形或類球形，大小相近，分布均勻。

2.2.3 粒徑及電位測定

將SIHE-SLNs溶液稀釋至適當(dāng)濃度，采用馬爾文粒度儀進(jìn)行粒徑及電位測定。結(jié)果顯示SIHE-SLNs的粒徑為（119.08±1.53）nm，多分散指數(shù)（PDI）為1.27±1.21，電位為-（16.15±2.02）mV，符合納米粒的要求，見圖3。

2.2.4 包封率測定

采用超濾離心法測定SIHE-SLNs的包封率，以有效成分蘆丁和綠原酸為考察指標(biāo)。精密吸取SIHE-SLNs溶液0.5 mL，加入超濾離心管中，高速離心（14 000 r/min）30 min，吸取下清液，HPLC測定，分別計算蘆丁和綠原酸的含量，即為其各自的游離藥物含量（WF）。精密吸取SIHE-SLNs溶液0.5 mL，加甲醇1.5 mL，超聲破乳，放冷至室溫，用0.22 ?m微孔濾膜過濾，進(jìn)行HPLC測定，計算蘆丁、綠原酸含量，即分別為其總藥物含量（WT）。包封率（%）=（WT-WF）÷WT×100%。結(jié)果SIHE-SLNs中蘆丁、綠原酸的包封率分別為（87.78±0.80）%、（83.82±0.32）%，表明SIHE-SLNs具有較高的包封率。

2.2.5 穩(wěn)定性考察

將制備的SIHE-SLNs分別于4 ℃和常溫條件下放置2個月，并分別于15、30、60 d測定其粒徑和包封率，結(jié)果見表1。SIHE-SLNs在4 ℃條件下穩(wěn)定性良好，30 d時粒徑和包封率變化較小，但仍符合納米粒的要求；而在常溫條件下30 d后粒徑和包封率均有較大的變化。

2.3 蘆丁、綠原酸在Caco-2細(xì)胞中的攝取

2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)

將Caco-2細(xì)胞復(fù)蘇，接種于25 cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，加入5 mL DEME培養(yǎng)基（含10%FBS），于37 ℃、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24 h后換液。待細(xì)胞長至對數(shù)生長期（細(xì)胞融合70%～80%）時，使用0.25%胰蛋白酶消化，計數(shù)，使用培養(yǎng)基配制成濃度為6×104個/孔的混懸液，接種于12孔培養(yǎng)板中。于細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育，24 h后更換新的培養(yǎng)液，第1周隔日換液，第2周每日換液，培養(yǎng)14 d后，棄去培養(yǎng)液，用孵育至37 ℃的HBSS緩沖液洗滌3次，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育30 min，以清除細(xì)胞表面對藥物吸收測定有干擾的物質(zhì)。

2.3.2 溶液配制

精密稱取SIHE粉末，用DMSO溶液配制成10 mg/mL貯備液，用HBSS稀釋至相應(yīng)濃度。

2.3.3 CCK-8試驗(yàn)

將對數(shù)生長期的Caco-2細(xì)胞1×104個/孔接種于96孔板中，置于5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。棄去培養(yǎng)基，加入用HBSS稀釋至濃度分別為25、50、80、100、150、200、250、300、500 ?g/mL的含1%DMSO的SIHE溶液200 ?L，于細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育48 h。每孔加入CCK-8溶液20 ?L，繼續(xù)孵育2 h后終止培養(yǎng)，于酶標(biāo)儀490 nm波長處測定吸光度（A），計算細(xì)胞存活率（%）。細(xì)胞存活率（%）=（A給藥組-A空白組）÷（A對照組-A空白組）×100%。結(jié)果見圖4?？梢?，SIHE濃度低于250 ?g/mL時，Caco-2細(xì)胞存活率>85%，表明其對Caco-2細(xì)胞毒性較小。

2.3.4 攝取試驗(yàn)

取“2.3.1”項(xiàng)下生長至14 d的Caco-2細(xì)胞，棄去培養(yǎng)基，用HBSS沖洗2次，洗去細(xì)胞表面雜質(zhì)，加入HBSS 1 mL，置于培養(yǎng)箱中孵育30 min，吸除HBSS。分別加入含不同濃度蘆丁、綠原酸的SIHE-SLNs和SIHE溶液，培養(yǎng)箱中孵育相應(yīng)時間后，棄去藥液。用4 ℃的HBSS洗去剩余藥液，每孔加HBSS 2 mL，使用細(xì)胞刮收集細(xì)胞，探頭超聲破碎（功率300 W，超聲2 s，停1 s）5 min，獲得細(xì)胞混懸液。一部分細(xì)胞混懸液采用考馬斯亮藍(lán)法測定細(xì)胞的蛋白質(zhì)含量；另一部分細(xì)胞混懸液加入乙腈溶液，離心（14 000 r/min）去蛋白，取上清液。按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件測定，分別計算SIHE-SLNs和SIHE中蘆丁和綠原酸在Caco-2細(xì)胞中的攝取量，結(jié)果以?g（藥物）/mg（蛋白）表示。

2.3.4.1 培養(yǎng)時間對攝取的影響

加入用HBSS稀釋的含1%DMSO的SIHE-SLNs和SIHE溶液（蘆丁濃度為30 ?g/mL，綠原酸濃度為15 ?g/mL），置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中分別培養(yǎng)15、30、45、60 min，測定，計算蘆丁和綠原酸的攝取量。培養(yǎng)時間對蘆丁和綠原酸在Caco-2細(xì)胞中攝取的影響見圖5。可見，SIHE-SLNs中蘆丁和綠原酸的攝取量高于SIHE，蘆丁和綠原酸在Caco-2細(xì)胞中的攝取量隨時間的延長先增加，在45 min時達(dá)到峰濃度，然后趨于飽和，后續(xù)培養(yǎng)時間確定為45 min。

2.3.4.2 藥物濃度對攝取的影響

加入用HBSS稀釋至DMSO含量為1%的SIHE-SLNs和SIHE溶液（蘆丁濃度分別為10、20、30、40、50 ?g/mL，綠原酸濃度分別為5、10、15、20、25 ?g/mL）4份，于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)45 min，測定，分別計算SIHE-SLNs和SIHE中蘆丁和綠原酸的攝取量，結(jié)果見圖6?？梢?，SIHE-SLNs和SIHE中蘆丁和綠原酸在Caco-2細(xì)胞中的攝取均呈濃度依賴性，而SIHE-SLNs的攝取量高于SIHE。

2.3.4.3 P-糖蛋白抑制劑對攝取的影響

取培養(yǎng)至14 d的Caco-2細(xì)胞，加入100 ?mol/L維拉帕米溶液，加入SIHE-SLNs和SIHE溶液（蘆丁濃度分別為20、30、40 ?g/mL，綠原酸濃度分別為10、15、20 ?g/mL，DMSO含量為1%），于細(xì)胞培養(yǎng)箱中分別培養(yǎng)45 min，測定并計算蘆丁和綠原酸的攝取量，結(jié)果見圖7。SIHE-SLNs和SIHE-SLNs+維拉帕米的蘆丁和綠原酸攝取量顯著高于SIHE；與SIHE-SLNs比較，SIHE-SLNs+維拉帕米的蘆丁攝取無顯著變化，綠原酸攝取量逐漸降低。表明P-糖蛋白抑制劑維拉帕米對蘆丁在Caco-2細(xì)胞中的攝取幾乎沒有影響，對SIHE-SLNs和SIHE中綠原酸在Caco-2細(xì)胞的攝取影響隨濃度增加而逐漸減小。

2.3.4.4 根皮苷對攝取的影響

取培養(yǎng)至14 d的Caco-2細(xì)胞，加入用HBSS配制的0.5 mmol/L根皮苷溶液，加入SIHE-SLNs和SIHE溶液（蘆丁濃度分別為20、30、40 ?g/mL，綠原酸濃度分別為10、15、20 ?g/mL，DMSO含量為1%），于細(xì)胞培養(yǎng)箱中分別培養(yǎng)45 min，測定并計算蘆丁和綠原酸的攝取量，結(jié)果見圖8。根皮苷可競爭性抑制SIHE-SLNs和SIHE中蘆丁在Caco-2細(xì)胞中的攝取，但其對SIHE中綠原酸的攝取量無明顯影響。

3 討論

中藥復(fù)方由于藥理作用具有多靶點(diǎn)、多層次的優(yōu)點(diǎn)而越來越受到研究者的關(guān)注。然而，中藥復(fù)方也因其化學(xué)成分復(fù)雜、干擾因素多等而研究難度頗大。此外，中藥復(fù)方由多種活性成分組成，導(dǎo)致其水溶性受到了極大的影響，進(jìn)而使其藥效大打折扣。因此，提高中藥復(fù)方的溶解度，從而提高其生物利用度，是目前急需解決的關(guān)鍵問題。

SLNs是一種具有較小粒徑和較大包封率的脂溶性給藥載體，其較大的比表面積和良好的脂溶性能夠促進(jìn)藥物在細(xì)胞中的吸收，從而提高其生物利用度。本研究使用高壓勻質(zhì)法制備了SIHE-SLNs，并對其粒徑、電位及包封率進(jìn)行了相應(yīng)的表征。結(jié)果表明，SIHE-SLNs的粒徑在100 nm左右，表面帶有較大的電荷值，包封率>85%。較小的粒徑使SIHE-SLNs具有較大的表面積，而其表面的電荷值能夠保證其穩(wěn)定性。

Caco-2細(xì)胞模型容易在體外培養(yǎng)，在常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)條件下（37 ℃、5%CO2、相對濕度90%、DMEM培養(yǎng)基）即可自發(fā)分化形成腸細(xì)胞樣的細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)條件可精確控制，穩(wěn)定性好，用藥量小，獲得的藥物結(jié)構(gòu)與吸收相關(guān)性的信息量大，可研究藥物的吸收機(jī)制，預(yù)測藥物體內(nèi)吸收和相互作用。本研究考察了SIHE對Caco-2細(xì)胞的細(xì)胞毒性，結(jié)果顯示其濃度在250 ?g/mL范圍內(nèi)對Caco-2細(xì)胞沒有毒性。

攝取試驗(yàn)結(jié)果顯示，SIHE-SLNs和SIHE中蘆丁和綠原酸在Caco-2細(xì)胞中的攝取量呈濃度依賴性，由于SIHE-SLNs具有較大的表面積和較高的脂溶性，使其能夠與細(xì)胞膜相融合，進(jìn)入細(xì)胞的藥量增加，從而提高了SIHE-SLNs在Caco-2細(xì)胞中的攝取量。SIHE濃度在50～250 ?g/mL范圍內(nèi)，蘆丁和綠原酸在Caco-2細(xì)胞中的攝取量隨時間的增加先增加，在45 min達(dá)到峰濃度，60 min達(dá)到飽和，且其攝取量呈濃度依賴性。本結(jié)果與白宇等[21]研究的蘆丁在Caco-2細(xì)胞中的攝取結(jié)果相吻合。

P-糖蛋白是多藥耐藥基因（MDR1）調(diào)控的外排蛋白，主要參與口服藥物在小腸的吸收，通過與底物相結(jié)合將其從細(xì)胞漿中排出細(xì)胞外而降低底物的吸收。本試驗(yàn)考察了P-糖蛋白抑制劑維拉帕米對蘆丁和綠原酸在Caco-2細(xì)胞中攝取的影響。結(jié)果表明，加入維拉帕米后，蘆丁的攝取量稍增加但無明顯差異，即P-糖蛋白在蘆丁在Caco-2細(xì)胞中的攝取中并非主要參與者；維拉帕米可以增加綠原酸的攝取量，但隨著濃度的增加作用減弱。

Na+依賴葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)載體1有可能參與黃酮類化合物的吸收，其底物根皮苷可以競爭性抑制藥物的吸收。本試驗(yàn)考察了根皮苷對蘆丁和綠原酸在Caco-2細(xì)胞中的攝取的影響。結(jié)果表明，根皮苷可顯著抑制蘆丁的攝取，降低其在細(xì)胞中的含量，但對綠原酸的攝取無明顯影響。

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