楊成 陸華龍（通訊作者）（陜西合成藥業(yè)股份有限公司 陜西 西安 715100）

磷酸左奧硝唑酯二鈉為化學(xué)藥物1.1類新藥。該新藥為奧硝唑的左旋異構(gòu)體磷酸酯衍生物的鈉鹽，作為左旋奧硝唑的前體藥物，磷酸左奧硝唑酯二鈉在體內(nèi)可以迅速分解為有效成分左旋奧硝唑而起到抗厭氧菌的作用。主要用于：用于治療由脆弱擬桿菌、狄氏擬桿菌、多形擬桿菌、普通擬桿菌、梭狀芽胞桿菌、真桿菌、消化球菌和消化鏈球菌、幽門(mén)螺桿菌、黑色素?cái)M桿菌、梭桿菌、牙齦類桿菌等敏感厭氧菌所引起的多種感染性疾病。迄今為止，尚未見(jiàn)磷酸左奧硝唑酯二鈉的含量方法的相關(guān)報(bào)道，鑒于此，我們研究開(kāi)發(fā)了磷酸左奧硝唑酯二鈉的含量測(cè)定方法采用高效液相色譜法測(cè)定，旨在尋找一種更加科學(xué)合理的檢測(cè)方法。

1.儀器與試藥

儀器：美國(guó) Thermo U3000高效液相色譜儀，包括 U3000四元泵，U3000可變檢測(cè)波長(zhǎng), U3000柱溫箱，U3000自動(dòng)進(jìn)樣器。

試藥：磷酸左奧硝唑酯二鈉由陜西合成藥業(yè)股份有限公司提供。

對(duì)照品：磷酸左奧硝唑酯二鈉由陜西合成藥業(yè)股份有限公司提供。

甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2.方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Welch，XtimateTM-C18，（4.6×250mm Column 5-Micron）檢測(cè)波長(zhǎng)：321nm；柱溫：30℃；流速：1.0ml/min；流動(dòng)相：以含0.01%庚烷磺酸鈉的0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液（用三乙胺調(diào)pH至6.5）-甲醇（85：15）。理論板數(shù)按磷酸左奧硝唑酯二鈉峰計(jì)算應(yīng)不低于2500。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

取磷酸左奧硝唑酯二鈉對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每 1ml約含磷酸左奧硝唑酯二鈉0.04mg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取磷酸左奧硝唑酯二鈉適量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每 1ml約含磷酸左奧硝唑酯二鈉0.04mg的溶液， 即得。

2.4 專屬性試驗(yàn)

取流動(dòng)相溶液按上述色譜條件測(cè)試。結(jié)果在磷酸左奧硝唑酯二鈉對(duì)照品出峰位置未見(jiàn)其它雜質(zhì)的干擾峰(見(jiàn)圖1～3)，說(shuō)明按本文的試驗(yàn)條件測(cè)定， 空白溶劑無(wú)干擾。

圖1 空白溶劑圖譜

圖2 供試品溶液圖譜

圖3 對(duì)照品溶液圖譜

2.5 線性關(guān)系考察

精密稱取磷酸左奧硝唑酯二鈉對(duì)照品適量，用流動(dòng)相溶解并稀釋成每1ml含磷酸左奧硝唑酯二鈉91.8、81.6、71.4、61.2、51.0、40.8、30.6、20.4ug的溶液，精密量取各溶液20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積Y為縱坐標(biāo)，以濃度X為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見(jiàn)表1。

表1 含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線

結(jié)論：線性回歸方程Y=0.5341X+0.7177 R2=0.9994 n=8磷酸左奧硝唑酯二鈉在91.8～20.4μg/ml的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系較好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取磷酸左奧硝唑酯二鈉供試品適量，共六份，分別用流動(dòng)相溶解并稀釋制成含磷酸左奧硝唑酯二鈉40ug/ml的溶液，作為供試品溶液，精密稱取磷酸左奧硝唑酯二鈉對(duì)照品適量，用流動(dòng)相溶解并稀釋制成含磷酸左奧硝唑酯二鈉40ug/ml的溶液，作為對(duì)照品溶液。取供試品和對(duì)照品溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 磷酸左奧硝唑酯二鈉含量測(cè)定重復(fù)性結(jié)果

2.7 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密稱取磷酸左奧硝唑酯二鈉對(duì)照品適量，用流動(dòng)相溶解并稀釋制成含磷酸左奧硝唑酯二鈉40ug/ml的溶液，室溫下放置0、2、4、6、8、10、12小時(shí)后測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 含量測(cè)定溶液放置穩(wěn)定性

2.8 回收率試驗(yàn)

供試品溶液的制備：精密稱取磷酸左奧硝唑酯二鈉32mg、40mg、48mg各三份，分別置9個(gè)10ml量瓶中，分別用流動(dòng)相溶解，搖勻，精密量取1ml，置100ml量瓶中，用上述溶劑稀釋制成每1ml中約含磷酸左奧硝唑酯二鈉32ug、40ug、48ug的溶液，即得80%、100%、120%的樣品溶液各三份；另精密稱取磷酸左奧硝唑酯二鈉對(duì)照品適量，同法制成每1ml約含磷酸左奧硝唑酯二鈉40ug的溶液，作為對(duì)照品溶液，照上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算出本品含量測(cè)定的回收率，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 含量測(cè)定回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 含量測(cè)定

取磷酸左奧硝唑酯二鈉適量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1ml約含磷酸左奧硝唑酯二鈉0.5mg的溶液，作為供試品溶液，精密量取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取磷酸左奧硝唑酯二鈉對(duì)照品適量，精密稱定，同上操作，作為對(duì)照品溶液，同法測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 含量測(cè)定結(jié)果

3.討論

我們選用高效液相色譜法測(cè)定磷酸左奧硝唑酯二鈉的含量，使其和制劑測(cè)定方法相統(tǒng)一，減少各方法間的誤差，準(zhǔn)確的控制制劑生產(chǎn)各環(huán)節(jié)的含量，避免因原料含量中磷酸左奧硝唑酯二鈉測(cè)定過(guò)高，導(dǎo)致投料量小，給中間體和成品帶來(lái)含量過(guò)低重新加料的麻煩。