呂鳳艷 王曉剛

摘要 目的：探討甲氨蝶呤微乳對(duì)小鼠銀屑病模型的影響。方法：對(duì)于雌激素期的小鼠陰道分別給藥，分別為0.1%甲氨蝶呤微乳、0.2%甲氨蝶呤微乳和0.1維A酸軟膏，1次/d，給藥持續(xù)10d，10d后檢測(cè)小鼠陰道上皮基底細(xì)胞有絲分裂指數(shù);對(duì)于小鼠尾部分別給藥：分別為0.1%甲氨蝶呤微乳、0.2%甲氨蝶呤微乳和0.1%維A酸軟膏，1次/d，給藥持續(xù) lOd，lOd后考察小鼠尾部顆粒層形成情況及皮膚厚度。結(jié)果：甲氨蝶呤微乳對(duì)小鼠雌激素期陰道上皮有絲分裂具有明顯的抑制作用，更加有效地促進(jìn)了小鼠尾部顆粒層形成情況及皮膚厚度。結(jié)論：甲氨蝶呤與維A酸軟膏比較，更能有效地促進(jìn)銀屑病樣小鼠模型恢復(fù)。

關(guān)鍵詞 甲氨蝶呤微乳;銀屑病;模型

甲氨蝶呤（MTX）可以抑制二氫葉酸還原酶，同時(shí)干擾葉酸代謝，進(jìn)一步發(fā)揮其抗腫瘤作用，在白血病、絨毛膜上皮癌、肝癌等惡性腫瘤中有廣泛應(yīng)用[1]。在銀屑病的治療中，甲氨蝶呤也發(fā)揮著重要作用，特別是用于嚴(yán)重銀屑病的治療[2]。甲氨蝶呤治療銀屑病的作用機(jī)制還不完全明確，銀屑病動(dòng)物模型在我國也沒有成熟的建模方案[3]。小鼠陰道上皮在雌激素期的生長特點(diǎn)與銀屑病相似，同時(shí)，小鼠尾鱗表面也具有相似的生長特點(diǎn)，所以得到廣泛應(yīng)用。本次研究利用以上兩種不同的時(shí)期、部位的上皮為模型，進(jìn)一步探討甲氨蝶呤微乳的應(yīng)用價(jià)值。

資料與方法

藥品與試劑：0.1%甲氨蝶呤微乳和0.2%甲氨蝶呤微乳，山東醫(yī)專附屬醫(yī)院藥劑科自制;維A酸軟膏，重慶華邦制藥股份有限公司，批號(hào)：12214;己烯雌酚原料藥，北京市京潤生化制造有限公司，批號(hào)：20100615;秋水仙堿原料藥，連云港錦港技術(shù)有限公司，批號(hào)：20130308。

試驗(yàn)動(dòng)物：昆明小鼠，18～26g，由山東醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校試驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

試驗(yàn)方法：①小鼠陰道上皮模型創(chuàng)建：雌性小鼠40只，給予己烯雌酚0.2mg/只，11次/d，共3d（d0～d2）。隨機(jī)分組為4組，每組10只，分別為空白對(duì)照（生理鹽水）組、陽性對(duì)照（維A酸軟膏）組、甲氨蝶呤微乳高劑量組、甲氨蝶呤微乳低劑量組。d3～d9各組經(jīng)陰道給藥分別為：空白對(duì)照組為等體積生理鹽水;陽性對(duì)照組為維A酸軟膏（0.2 g/只）;高劑量組為0.2%甲氨蝶呤微乳（0.5mg/kg）;低劉量組為0.1%甲氨蝶呤微乳（0.5mg/kg），均為1次/d。最后1次給藥后于當(dāng)天上午9：00給每只小鼠腹腔注別秋水刊堿2mg/kg，6h后斷頸處死小鼠，取陰道上皮組織。固定、包埋、染色。用光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞有絲分裂，計(jì)數(shù)300個(gè)陰道基底細(xì)胞的有絲分裂數(shù)。②鼠尾鱗片模型：昆明小鼠40只，隨機(jī)分成4組，即空白對(duì)照組、維A酸軟膏對(duì)照組、甲氨蝶呤高劑量組和甲氨蝶呤低劑量組?？瞻讓?duì)照組給予生理鹽水;陽性對(duì)照組給予維A酸軟膏;高劑量和低劑量組甲氨蝶呤微乳，各試驗(yàn)組每天涂抹尾部1次，共1周，給藥2h后，頸椎脫斷處死小鼠，尾背部皮膚一長條（0.1cm×0.5cm），固定、包埋、染色。在光學(xué)顯微鏡下逐一觀察每鼠的尾部鱗片。凡是一個(gè)鱗片有連接成行的顆粒層細(xì)胞者，即為有顆粒層的鱗片。

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS17.5進(jìn)行方差分析，（x±s）表示計(jì)量資料，使用最小顯著性差異檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較。結(jié)果

上皮細(xì)胞有絲分裂指數(shù)：甲氨蝶呤微乳高、低劑量組與維A酸組明顯抑制小鼠陰道上皮細(xì)胞有絲分裂（有絲分裂指數(shù)，P<0.05、P<0.01），見表1。

甲氨蝶呤微乳對(duì)小鼠尾鱗片顆粒層形成的影響：與空白對(duì)照組相比，MTX微乳低劑量與維A酸軟膏對(duì)小鼠尾部鱗片顆粒層形成有促進(jìn)作用（顆粒層的鱗片數(shù)，P<0.05）;甲氨蝶呤微乳高劑量組對(duì)小鼠尾部鱗片顆粒層形成有促進(jìn)作用（顆粒層的鱗片數(shù)，P<0.01），見表2。

討論

甲氨蝶呤可以抑制表皮細(xì)胞的增值，增強(qiáng)免疫細(xì)胞的作用，進(jìn)一步起到治療銀屑病的作用，同時(shí)，甲氨蝶呤還會(huì)抑制表皮增殖。近年研究表明，微乳作為透皮藥物載體，能夠使被包容的藥物分散度提高，并且微乳的結(jié)構(gòu)能夠改變微乳的親和力，有利于藥物進(jìn)入并突破角質(zhì)層的屏障作用，同時(shí)微乳中的成分具有滲透促進(jìn)劑的作用，可以增大藥物透皮速率和透皮量，維持恒定的有效血藥濃度[4]。本試驗(yàn)研究表明，MTX微乳在0.5mg/kg劑量下和維A酸乳膏0.2g/只劑量下均可以顯著抑制小鼠雌激素期陰道上皮的有絲分裂。與維A酸乳膏相比，甲氨蝶呤微乳高低劑量組抑制作用更強(qiáng);與甲氨蝶呤微乳低劑量組相比，高劑量組抑制作用更明顯，說明抑制程度與藥物劑量有密切的關(guān)系。本試驗(yàn)把主藥甲氨蝶呤做成微乳劑，相比于傳統(tǒng)用藥維A酸乳膏，效果更明顯，且其能降低用藥量，再根據(jù)微乳劑的特點(diǎn)，微乳劑可起到緩釋作用，所以MTX微乳的應(yīng)用可能要縮短用藥周期，有望成為治療銀屑病的一種新藥。

參考文獻(xiàn)

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