張靖飛

(西安市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，陜西 西安 71006)

奶牛乳腺炎是奶牛的常見(jiàn)病和多發(fā)病，給奶牛業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，引起奶牛乳腺炎的主要致病因素是傳染性病原微生物感染，主要病原菌包括金黃色葡萄球菌、無(wú)乳鏈球菌、停乳鏈球菌、大腸桿菌等。為了防治乳腺炎，臨床濫用抗生素，致使病原菌的抗藥性增強(qiáng)，且導(dǎo)致高藥物殘留等問(wèn)題。中草藥是純天然物質(zhì)，含有多種生物活性成分，具有抗菌、消炎、不易產(chǎn)生細(xì)菌耐藥性、低毒、無(wú)殘留或低殘留等特點(diǎn)；本試驗(yàn)選取魚(yú)腥草、蒲公英、黃芪等24味中藥及兩個(gè)復(fù)方進(jìn)行浸液制備。分別利用單味中藥和組成的兩個(gè)復(fù)方制劑對(duì)致乳房炎的大腸桿菌和金黃色葡萄球菌進(jìn)行體外抑菌試驗(yàn)，為研制治療奶牛乳腺炎的方劑提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)菌菌種 大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌均來(lái)由西安市某規(guī)?；膛?chǎng)的乳房炎奶牛乳汁中分離。

1.1.2 供試中藥均購(gòu)自于西安市醫(yī)藥公司 有魚(yú)腥草、蒲公英、黃芪、白芍、陳皮、甘草、王不留行、路路通、漏蘆、連翹、穿心蓮、瓜蔞、益母草、當(dāng)歸、紫花地丁、紅花、丹參、川芎、通草、柴胡、夏枯草、板藍(lán)根、黃連、大青葉24味中藥，由上述中藥組成的復(fù)方一、復(fù)方二。

1.1.3 主要儀器設(shè)備 全自動(dòng)壓力蒸汽滅菌器，恒溫培養(yǎng)箱，超凈工作臺(tái)(SW-CJ-1F型)，離心機(jī)等。

1.2 方法

1.2.1 中藥煎液的制備 取中藥50 g，加8倍于其體積的水浸泡2h，煎煮沸騰40 min，過(guò)濾，向沉淀中再加5倍體積的水煎煮20 min，合并煎液，紗布過(guò)濾后離心(5 000 r/min， 10 min)，加熱濃縮使濾液含生藥1 g/mL。

1.2.2 細(xì)菌的培養(yǎng) 將取得的大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和鏈球菌采用無(wú)菌操作的辦法接種于肉湯培養(yǎng)基中，恒溫箱中37℃培養(yǎng)16～20 h。

1.2.3 中藥抑菌試驗(yàn)

1.2.3.1 藥敏實(shí)驗(yàn) 采用平板挖洞灌藥法?！吨兴幩幚韺W(xué)》里藥敏試驗(yàn)抑菌圈直徑判斷其抑菌效果。

1.2.3.2 最低抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)測(cè)定 采用試管二倍稀釋法，設(shè)藥物對(duì)照、培養(yǎng)基和菌液對(duì)照。根據(jù)MIC和MBC值評(píng)價(jià)中藥抗菌活性。

2 結(jié)果

2.1 中藥抑菌圈試驗(yàn)結(jié)果

由表1可知，對(duì)大腸桿菌的抑菌直徑比較明顯的是： 蒲公英12.60 mm，黃芪11.26 mm，白芍10.02 mm，陳皮13.62 mm，紫花地丁12.06 mm。復(fù)方一：16.82 mm，復(fù)方二：10.22 mm。

對(duì)金黃色葡萄球菌抑菌直徑比較明顯的是： 蒲公英13.32 mm，黃芪13.24 mm，白芍12.42 mm，陳皮12.72 mm，路路通13.64 mm，丹參12.28 mm。復(fù)方一：14.42 mm，復(fù)方二：18.42 mm。

對(duì)鏈球菌抑菌直徑比較明顯的是：蒲公英12.44 mm，魚(yú)腥草12.48 mm，黃連13.66 mm，紫花地丁11.22 mm柴胡11.22 mm。復(fù)方一：13.32 mm，復(fù)方二：15.47 mm。對(duì)大腸桿菌、金黃色球菌和鏈球菌效果都顯著的是蒲公英、復(fù)方一、復(fù)方二。

2.2 中藥的最低抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)結(jié)果

中藥魚(yú)腥草、蒲公英、黃芪等24味中藥的最低抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 中藥隱性乳房炎主要致病菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果

注：AD為抑菌直徑：抑菌效果按《消毒規(guī)程》相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)判定，即AD<4mm為不敏感，用“-”表示，5～8為中度敏感，AD>9mm為高度敏感。

由表1可知，蒲公英、紫花地丁、復(fù)方一、復(fù)方二對(duì)大腸桿菌具有很好的殺菌作用，魚(yú)腥草、蒲公英、路路通、穿心蓮、金銀花、丹參、白芍、復(fù)方一、復(fù)方二對(duì)金黃色葡萄球菌具有很好的殺菌作用。蒲公英、魚(yú)腥草、黃連、柴胡、復(fù)方一、復(fù)方二對(duì)鏈球菌具有很好的殺菌作用。蒲公英、復(fù)方一、復(fù)方二對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌均具有很好的殺菌作用。

3 分析與討論

3.1 該試驗(yàn)采用兩種方法進(jìn)行中藥抑菌試驗(yàn)

采用藥槽灌注法對(duì)抑菌效果不是很精確，因?yàn)椴僮魃系恼`差掩蓋其抑菌效果，而試管二倍稀釋法測(cè)定的結(jié)果比較精確，但有些中藥提取液色澤深，渾濁度大，在試管內(nèi)培養(yǎng)后不易觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況。同時(shí)采用兩種方法，可以較準(zhǔn)確的測(cè)定各藥物的抑制作用。

3.2 中藥抑菌試驗(yàn)結(jié)果

大腸桿菌對(duì)蒲公英、紫花地丁、白芍、復(fù)方一、復(fù)方二較敏感，金黃色葡萄球菌對(duì)魚(yú)腥草、蒲公英、路路通、穿心蓮、金銀花、丹參、白芍、復(fù)方一、復(fù)方二較敏感，蒲公英、魚(yú)腥草、黃連、柴胡、復(fù)方一、復(fù)方二對(duì)鏈球菌具有很好的殺菌作用；綜合判定以蒲公英、復(fù)方一、復(fù)方二對(duì)這3種細(xì)菌抑菌效果好。

3.3 試驗(yàn)過(guò)程

連翹的抑菌圈直徑不大，但是抑菌的最低抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)卻很高，可能是細(xì)菌自身抗藥性發(fā)生了改變，或者所購(gòu)買的藥物出現(xiàn)問(wèn)題。有些藥在試驗(yàn)中抑菌圈效果很好，但最低抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)效果不理想，有些藥物的抑菌圈效果不明顯，但是最低抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)效果卻很好，這可能是試驗(yàn)方法對(duì)比或是對(duì)中藥的耐藥性發(fā)生改變，關(guān)于這個(gè)問(wèn)題還有待進(jìn)一步試驗(yàn)。

3.4 中藥應(yīng)用前景廣闊

該實(shí)驗(yàn)測(cè)定的是中藥煎劑的抑菌效果，但由于生藥的某些成分不溶于水或遇熱易分解，導(dǎo)致某些有效成分丟失。同時(shí)，又進(jìn)行高壓滅菌，也可導(dǎo)致一些活性降低?？紤]抗生素的殘留，抑菌效果和成本等問(wèn)題，中藥還是有很大的發(fā)展前景，因此，要全面了解中草藥的功能，還需對(duì)其進(jìn)行體內(nèi)試驗(yàn)。