顧 娟

(啟東市中醫(yī)院檢驗科，江蘇 南通 226200)

產ESBLs(超廣譜β-內酰胺酶)大腸埃希菌是由大腸埃希菌產生的革蘭陰性桿菌中的常見菌種。大腸埃希菌是一種常見的細菌，主要寄生于人體的腸道中[1]。在人體機能正常的情況下，大腸埃希菌可促進胃腸道的消化功能，維持腸道菌群的平衡[2-3]。當人體受到細菌的入侵或自身的抵抗力下降時，體內的大腸埃希菌就會成為感染源，可誘發(fā)胃腸道感染、呼吸道感染、手術切口感染、泌尿系統(tǒng)感染及燒傷創(chuàng)面感染等感染性疾病[4]。本次研究主要探討產ESBLs大腸埃希菌的臨床分布特征及耐藥性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次研究的對象為2016年1月至2018年1月期間在啟東市中醫(yī)院各科室收集的198株大腸埃希菌菌株。這198株大腸埃希菌菌株的來源為血液、尿液、痰液、膿液、傷口分泌物等，且對同一患者同一類型的重復菌株進行剔除。這198株大腸埃希菌菌株的來源科室包括神經內科、心內科、腫瘤外科、呼吸內科、門診、腎內科、胸外科、泌尿外科和重癥監(jiān)護室。

1.2 研究方法

對這198株大腸埃希菌菌株均進行分離和鑒定，并對被檢出的產ESBLs大腸埃希菌菌株進行耐藥試驗。具體的方法是：1)對大腸埃希菌菌株進行分離和鑒定。⑴嚴格按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》[5]中的要求，將這198株大腸埃希菌菌株放在哥倫比亞血瓊脂平板和麥康凱平板上進行接種分離。⑵在35℃的條件下對分離出的菌株進行培養(yǎng)。⑶在對菌株進行培養(yǎng)18～24 h后，挑取單個菌落采用ATB-Expression及其附加生化試驗進行種屬鑒定。2)根據分離和鑒定的結果，對被檢出的產ESBLs大腸埃希菌菌株的標本類型和標本來源進行分析研究。3)對被分離出的產ESBLs大腸埃希菌菌株進行耐藥性試驗。⑴本次研究使用的藥敏紙片為Oxoid藥敏紙片(ESBLs藥敏紙片由杭州濱和微生物試劑有限公司生產)，包括下列各種藥的藥敏紙片：頭孢他啶、頭孢吡肟、頭孢呋辛、美洛培南、亞胺培南、妥布霉素、阿米卡星、慶大霉素、環(huán)丙沙星、氨曲南、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、替卡西林、氨芐西林、頭孢噻吩、頭孢西丁、頭孢噻肟、頭孢唑啉、萘啶酸、氧氟沙星、四環(huán)素、頭孢克肟、阿莫西林/克拉維酸、左氧氟沙星和頭孢哌酮/舒巴坦。⑵使用由法國生物梅里埃公司生產的微生物鑒定與藥敏分析儀采用MIC法對分離出的產ESBLs大腸埃希菌菌株進行藥敏試驗，并采用手工法對這些菌株進行K-B法藥敏試驗。⑶按照2016版CLSI(美國臨床實驗標準化研究所)[6]制定的標準對產ESBLs大腸埃希菌菌株的藥敏試驗結果進行判定，進行質控的菌株為大腸埃希菌ATCC25922。⑷依據2016版標準CLSI中的相關規(guī)定，對使用ATB藥敏分析儀判讀為ESBLs的可疑菌株進行表型確證試驗。將ESBLs的可疑菌株使用K-B法對頭孢他啶和頭孢他啶/棒酸、頭孢噻肟和頭孢噻肟/棒酸進行擴散試驗后，分別測量其抑菌環(huán)的直徑，若該種藥物的合劑抑菌環(huán)的直徑減去單劑抑菌環(huán)的直徑的差值≥5 mm即可判定為ESBLs對此藥的耐藥性為陽性[7]。

1.3 觀察指標

觀察這些大腸埃希菌菌株中產ESBLs大腸埃希菌菌株的陽性檢出率，觀察被檢出的產ESBLs大腸埃希菌菌株的標本類型和標本來源及其對各類抗菌藥的耐藥性。

1.4 統(tǒng)計學方法

使用WHONET5.6對細菌的耐藥性進行分析。將本次研究中的數據錄入到SPSS21.0軟件中進行處理，計數資料用%表示，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 對這198株大腸埃希菌菌株進行檢測的結果

在這198株大腸埃希菌菌株中，有92株產ESBLs大腸埃希菌菌株被檢出，其產ESBLs大腸埃希菌菌株的陽性檢出率為46.5%。

2.2 這92株產ESBLs大腸埃希菌菌株的標本來源

這92株產ESBLs大腸埃希菌菌株的標本來源由多至少依次為痰液(占59.7%)、尿液(占44.4%)、膿液(占40%)、血液(占35.7%)和傷口分泌物(占33.3%)。其中痰液標本是產ESBLs大腸埃希菌菌株最主要的標本來源。詳見表1。

表1 這92株產ESBLs大腸埃希菌菌株的來源[n(%)]

2.3 這92株產ESBLs大腸埃希菌菌株在各科室中的分布情況

這92株產ESBLs大腸埃希菌菌株在各科室中的分布由多至少依次為重癥監(jiān)護室(占66.7%)、泌尿外科(占52.5%)、胸外科(占45.7%)、腎內科((占45%)、呼吸內科(占42.9%)、腫瘤外科(占33.3%)、神經內科(占28.6%)、心內科(占22.2%)、門診(占21.1%)。其中產ESBLs大腸埃希菌菌株的主要來源為重癥監(jiān)護室。詳見表2。

表2 這92株產ESBLs大腸埃希菌菌株在各科室中的分布情況[n(%)]

2.4 對這92株產ESBLs大腸埃希菌菌株進行耐藥試驗的結果

這92株產ESBLs大腸埃希菌菌株對青霉素類藥物、喹諾酮類藥物、三代頭孢菌素類藥物等藥物均表現出較強的耐藥率，其對哌拉西林/他唑巴坦等β-內酰胺酶/β-內酰胺酶抑制劑類藥物及美洛培南、阿米卡星、頭孢哌酮/舒巴坦等藥物的耐藥率較低。亞胺培南類抗菌藥對大腸埃希菌菌株及產ESBLs大腸埃希菌菌株均具有極高的抗菌活性。詳見表3。

表3 對這92株產ESBLs大腸埃希菌菌株進行耐藥試驗的結果

3 討論

埃希菌屬包括六個菌種，大腸埃希菌是其中的代表菌種。大腸埃希菌又被稱為大腸桿菌，是最為常見的臨床分離菌種[8-9]。在嬰兒出生后的數小時內，大腸埃希菌便可進入其腸道中，并會伴隨其終生[10]。大腸埃希菌屬于革蘭陰性桿菌，在自然界中的分布廣泛，在自來水、污水、醫(yī)療器械、醫(yī)院環(huán)境及人體的痰液、咽部、口腔和糞便中均可分離出來大腸埃希菌[11]。早產兒、糖尿病患者、腫瘤患者、濫用抗生素的患者、進行氣管插管的患者、長期住院的患者、進行機械通氣治療的患者及長期使用免疫抑制劑的患者，大腸埃希菌均可作為條件致病菌導致其發(fā)生傷口感染、泌尿道感染、呼吸道感染、心內膜炎及菌血癥等疾病[12]。大腸埃希菌是引發(fā)院內感染的主要菌種之一，尤其是產ESBLs大腸埃希菌是導致院內感染流行性爆發(fā)的重要菌種。ESBLs是β-內酰胺酶，是由絲氨酸蛋白酶衍生所得的酶，其主要是由腸桿菌科的肺炎克雷伯桿菌和大腸埃希菌產生。ESBLs由質粒介導，不僅可在細菌之間通過接合作用進行廣泛的傳播，也可通過空氣和接觸進行傳播。ESBLs能夠對頭孢菌素類藥物、青霉素類藥物及單環(huán)類藥物進行水解，是目前臨床上革蘭陰性菌中的主要耐藥菌。本次研究的結果顯示：1)在這198株大腸埃希菌菌株中，有92株產ESBLs菌株被檢出，其產ESBLs菌株的陽性檢出率為46.5%。2)痰液標本是產ESBLs大腸埃希菌菌株最主要的標本來源。3)產ESBLs大腸埃希菌菌株的主要來源為重癥監(jiān)護室。這是因為重癥監(jiān)護室患者的病情較重，其住院的時間較長，其自身的免疫水平較低，且往往使用過較多的抗生素或進行過侵入性操作治療，易因院內交叉感染而產生產ESBLs大腸埃希菌。因此，重癥監(jiān)護室的臨床醫(yī)護人員需特別注意以下幾點：⑴必須為患者合理地應用抗生素。⑵做好防控院區(qū)感染的工作。⑶嚴格執(zhí)行無菌操作，注意手衛(wèi)生及對環(huán)境的消毒和清潔等。4)這92株產ESBLs大腸埃希菌菌株對青霉素類藥物、喹諾酮類藥物、三代頭孢菌素類藥物等藥物均表現出較強的耐藥性，其對哌拉西林/他唑巴坦等β-內酰胺酶/β-內酰胺酶抑制劑類藥物及美洛培南、阿米卡星、頭孢哌酮/舒巴坦等藥物的耐藥率較低。亞胺培南類抗菌藥對大腸埃希菌菌株及產ESBLs大腸埃希菌菌株均具有極高的抗菌活性。革蘭陰性菌主要的耐藥原因是ESBLs，而臨床上大量地使用第3代頭孢菌素類抗菌藥，使具有超廣譜β-內酰胺酶基因的產ESBLs細菌通過轉導、轉化、轉座、轉移接合及整合等形式在不同的細菌中傳遞耐藥性質?；颍瑢е屡R床上耐藥菌的流行。因此，臨床上要在監(jiān)督抗菌藥合理應用的同時，對產ESBLs大腸埃希菌菌株進行監(jiān)測，以有效地控制和預防產ESBLs大腸埃希菌在院內的傳播和擴散[13]。相關的研究表明，使用亞胺培南類抗菌藥治療由產ESBLs大腸埃希菌所致的重癥感染，一方面可提高患者的臨床療效，另一方面還可減少耐藥菌株的產生與傳播[14-15]。因此，可將亞胺培南類抗菌藥作為治療產ESBLs大腸埃希菌所致重癥感染的首選藥物。