李雪梅 孫延斌 周雪 張秀萍 侯甲福 劉世娟

[摘要]目的 觀察百華花楸果實水提取液的抗炎作用。方法 將實驗用鼠50只，隨機分為5組，每組10只，分別設為空白對照組，百花花楸小、中、大劑量組（5、10、15 g/kg）、陽性對照組。空白對照組灌胃給予0.9%氯化鈉溶液，陽性對照組灌胃給予藥物5 g/kg。采用氨水噴霧致咳法，觀察小鼠咳嗽次數；采用2%氯化乙酰膽堿和0.1%磷酸組織胺等量混合液致豚鼠哮喘法，觀察6 min內引喘潛伏期；采用氣管螺旋條實驗制備豚鼠氣管螺旋條法，觀察氣管松弛情況；采用小鼠足腫脹法觀察抗炎作用。結果 百華花楸小、中、大各劑量組小鼠的咳嗽次數均少于空白對照組（P<0.05）。百華花楸小、中、大各劑量組的6 min內引喘潛伏期均長于空白對照組（P<0.05）。百華花楸小、中、大各劑量組對豚鼠氣管平滑肌的松弛率均高于空白對照組（P<0.05），百華花楸小劑量組對豚鼠氣管平滑肌的松弛率低于陽性對照組，百華花楸中、大劑量組對豚鼠氣管平滑肌的松弛率均高于陽性對照組（P<0.05）。百華花楸小、中、大劑量組對小鼠足腫脹的抑制程度均高于空白對照組（P<0.05）。結論 百華花楸果實水提取液具有抗炎作用。

[關鍵詞]百華花楸果實；提??；抗炎作用

[中圖分類號] R965.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2018）11（c）-0030-04

[Abstract] Objective To observe the anti-inflammatory effect of water extract of Srobus pohuashanensis fruit. Methods A total of 50 experimental mice were randomly divided into 5 groups， and there were 10 mice in each group， namely blank control group， low， medium and high dose of Srobus pohuashanensis group （5， 10， 15 g/kg respectively） and positive control group. In the blank control group， 0.9% sodium chloride solution was intragastrically administered. In the positive control group， 5 g/kg drug was intragastrically administered. The mouse cough was induced by ammonium hydroxide spraying in order to observe the cough times of mice. The guinea pig asthma was induced by the mixture of 2% acetylcholine chloride and 0.1% phosphoric acid histamine in equal and the latency of asthma was observed within 6 min. Spiral strips of trachea were used to prepare spiral strips in guinea pigs， and tracheal relaxation was observed. The tracheal relaxation was observed using guinea pig tracheal spiral strip. The anti-inflammatory effect was observed by swelling of the mouse foot. Results The cough times in the mice of low， medium and high doses of Srobus pohuashanensis were lower than that of the blank control group （P<0.05）. The latency of asthma within 6 min in low， medium and high doses of srobus pohuashanensis was longer compared with the blank control group （P<0.05）. The relaxation rates of guinea pig tracheal smooth muscle were higher in the low， medium and high doses of Srobus pohuashanensis than that in the blank control group （P<0.05）. Compared with the positive control group， the relaxation rate of guinea pig tracheal smooth muscle in the low dose of srobus pohuashanensis was lower， while in the medium and high doses， the relaxation rates were higher （P<0.05）. The inhibition degree of foot swelling in the low， medium and high doses of Srobus pohuashanensis was greater than that of the blank control group respectively （P<0.05）. Conclusion The water extract of Srobus pohuashanensis fruit has an anti-inflammatory effect.

[Key words] Srobus pohuashanensis fruit； Extraction； Anti-inflammatory effect

百華花楸（Sorbus pohuashanensis）系薔薇科，花楸屬，落葉喬木，分布于我國東北和華北等地，其果實稱“花楸果”[1]?；ㄩ惫卸喾N維生素，味微苦略甜，生性平和，可以食用。含有多種具有生物活性的物質，包括黃酮類、氰苷類、三萜類、有機酸、氨基酸和蛋白質等八大類化合物[2]，及各種微量元素，豐富的抗壞血酸、胡蘿卜素、山梨醇、有機酸、維生素C等，具有清熱利肺、補脾生津之功效，是可進一步開發(fā)的珍貴資源[3-5]。目前臨床常用的哮喘治療藥物，主要有糖皮質激素和支氣管擴張劑等[6]，雖然這些藥物都有一定的療效，但也具有副作用較多且難以根治的缺點。傳統(tǒng)醫(yī)藥與西藥相比，具有調節(jié)整體功能、療效穩(wěn)定、副作用小的特點。因此，研制開發(fā)有效預防和治療該病的天然藥物極為迫切。百華花楸藥材資源非常豐富，采集枝葉、果實不破壞生態(tài)，且總黃酮有效部位含量達 50%以上[7]，具有很好的應用前景。本研究對白華花楸的止咳、抗炎、平喘等作用進行了考察。

1材料與方法

1.1 藥物與試劑

百華花楸果實（2016年9月份采于黑龍江牡丹江地區(qū)，經牡丹江醫(yī)學院藥學院鑒定為薔薇科植物百華花楸的果實）；氨水（哈爾濱華利爾化工有限公司）；氯化乙酰膽堿[赫澎（上海）生物科技有限公司]；磷酸組織胺（上海遠慕生物科技有限公司）；鹽酸異丙腎上腺素（ISO，濟南為民制藥有限公司）；氨茶堿（杭州民生藥業(yè)有限公司）；急支糖漿（太極集團浙江東方制藥有限公司）；二甲苯（淄博德魯克經貿有限公司）。

1.2儀器與動物

BL-410微機型生物機能實驗系統(tǒng)；402型超聲霧化器（上海合力醫(yī)療器械廠）；BT125型電子分析天平[托利多梅特勒（上海）有限公司]。健康小鼠，體重18～22 g，健康豚鼠，體重300～400 g。

1.3方法

1.3.1花楸果提取液的制備 將百華花楸進行系統(tǒng)分離，取天山花楸干燥果實研碎，依次用石油醚，95%乙醇溶液各回流提取3次，分別合并提取液，濃縮，回收溶劑，得石油醚部分（1.6 kg）和乙醇部分（2.7 kg）浸膏。取百華花楸浸膏，依次用乙酸乙酯，正丁醇萃取，各萃取液置于水浴減壓濃縮收盡溶劑，分別得到萃取物浸膏，加入2.5%吐溫-80配制成所需濃度溶液，得提取液組[8]。

1.3.2鎮(zhèn)咳作用研究 小鼠50只，隨機分成5組，每組10只，各組小鼠連續(xù)灌胃給藥5 d，每天1次?？瞻讓φ战M灌胃給予0.9%氯化鈉溶液；陽性對照組灌胃給予急支糖漿5 g/kg。按照百華花楸使用量，將對照組分為小劑量組、中劑量組、大劑量組，使用量分別為5、10、15 g/kg；末次給藥1 h后，將小鼠放入誘咳引喘儀中恒壓噴入濃氨水氣霧，觀察小鼠3 min內的咳嗽次數。

1.3.3平喘作用研究

1.3.3.1整體引喘實驗 采用濃氨水噴霧法[9-10]，將豚鼠放入氣霧箱，用超聲霧化器噴入引喘藥液（2%氯化乙酰膽堿與0.1%磷酸組織胺的等量混合液）15 s，記錄6 min豚鼠的哮喘反應（出現呼吸困難，前足抓撓面部，身體傾斜，跌倒等），豚鼠的哮喘潛伏期，與發(fā)生抽搐的動物數。陽性對照組灌胃給予氨茶堿5 g/kg，按照百華花楸使用量，將對照組分為小劑量組、中劑量組、大劑量組，使用量分別為5、10、15 g/kg；每天1次，連續(xù)7 d。末次給藥1 h后記錄豚鼠的哮喘潛伏期，觀察百華花楸果實水提取液不同劑量的平喘作用。

1.3.3.2氣管螺旋條實驗 制備豚鼠氣管螺旋條[11-12]，盛放于裝于營養(yǎng)液的（37.0±0.5）℃恒溫水浴培養(yǎng)皿中，將氣管螺旋條一端連于通氣管上，另一端連肌力換能器并與BL-410生物機能實驗系統(tǒng)相連，通氧氣，將基線調于固定水平。記錄2 h正?；顒忧€，待基線平穩(wěn)后向浴槽中加入磷酸組織胺或氯化乙酰膽堿[13-15]，待氣管收縮達高峰并穩(wěn)定3～5 min后，加入百華花楸果實提取液，按照百華花楸使用量，將對照組分為小劑量組、中劑量組、大劑量組，使用量分別為5、10、15 g/kg，陽性對照組灌胃給予氨茶堿5 g/kg，觀察氣管松弛情況。

1.3.3.3蛋清足腫脹法 取小鼠50只，雌雄各半，體重，隨機分為組，空白對照組灌胃給予0.9%氯化鈉溶液，陽性對照組灌胃給予地塞米松5 g/kg（相當人7倍用量），按照百華花楸使用量，將對照組分為小劑量組、中劑量組、大劑量組，使用量分別為5、10、15 g/kg。所有藥物均用蒸餾水混懸，按0.2 ml/kg體重灌胃，每天1次，連續(xù)7 d。末次給藥前，以螺旋測微儀測量右后足跖厚度，作為致炎前右后足正常厚度。末次給藥后1 h，在每只小鼠右后足跖皮注射蛋清0.1 mL/只，測量注入致炎后1、2、3 h后右足厚度，并減去致炎前小鼠右后足正常厚度，作為各鼠在不同時間的足腫脹度[16-20]。

2 結果

2.1各組咳嗽次數的比較（鎮(zhèn)咳作用研究）

與空白對照組比較，百華花楸小、中、大各劑量組小鼠的咳嗽次數均少于空白對照組（P<0.05），陽性對照組小鼠的咳嗽次數少于空白對照組（P<0.05）（表1）。

2.2平喘作用研究

2.2.1各組給藥前后6 min內引喘潛伏期的比較

與空白對照組比較，百華花楸小、中、大各劑量組豚鼠的6min內引喘潛伏期均長于空白對照組（P<0.05），陽性對照組豚鼠的6 min內引喘潛伏期長于空白對照組（P<0.05）。百華花楸小、中、大各劑量組，陽性對照組給藥后的6 min內引喘潛伏期均長于給藥前（P<0.05）（ 表2）。

2.2.2各組對豚鼠氣管平滑肌松弛率的比較（氣管螺旋條實驗）

與空白對照組比較，百華花楸小、中、大各劑量組對豚鼠氣管平滑肌的松弛率均高于空白對照組（P<0.05），其中百華花楸大劑量組對豚鼠氣管平滑肌的松弛率較高，陽性對照組對豚鼠氣管平滑肌松弛率高于空白對照組（P<0.05）。與陽性對照組比較，百華花楸小劑量組對豚鼠氣管平滑肌的松弛率低于陽性對照組，百華花楸中、大劑量組對豚鼠氣管平滑肌的松弛率均高于陽性對照組（P<0.05）（表3）。

2.2.3各組對小鼠足腫脹抑制程度的比較（蛋清足腫脹法）

注射蛋清后，小鼠足跖在10 min后開始腫脹程度最明顯。與空白對照組比較，百華花楸小、中、大各劑量在不同時間對小鼠足腫脹抑制程度均高于空白對照組（P<0.05），陽性對照組對小鼠足腫脹抑制程度高于空白對照組（P<0.05）（表4）。

3討論

呼吸系統(tǒng)疾病的一個主要癥狀就是咳嗽，是一種保護性反射，而劇烈的咳嗽會使患者感到非常痛苦，引起并發(fā)癥，甚至導致哮喘的發(fā)生。支氣管哮喘是一種由多種細胞特別是肥大細胞、嗜酸性細胞和淋巴細胞參與的慢性氣道炎癥。為防止疾病進一步嚴重，對于咳嗽應首先采用鎮(zhèn)咳藥進行治療。鎮(zhèn)咳藥的鎮(zhèn)咳作用能夠減輕因咳嗽引起的不適，從而防止原發(fā)病及并發(fā)癥的產生。鎮(zhèn)咳藥在支氣管哮喘的治療中，也會起到輔助治療的作用，具有一定的意義。

實驗使用濃氨水噴霧法對百華花楸的鎮(zhèn)咳作用進行研究，濃氨水是一種強的刺激物，能刺激呼吸道黏膜上皮的感受器，反射性地引起咳嗽。實驗表明百華花楸能明顯減少小鼠咳嗽次數。組胺引喘實驗是評價藥物平喘作用的常用藥理學方法，實驗表明百華花楸可延長組胺引喘豚鼠的引喘潛伏期，具有抗哮喘作用。實驗采用小鼠足腫脹模型來代表慢性增殖炎癥模型，在小鼠注射蛋清后，小鼠足趾在10 min后開始腫脹程度最明顯，提示百華花楸可抑制小鼠足腫脹程度，具有一定的抗炎作用。

綜上所述，百華花楸果實小、中、大劑量組均可減少小鼠的咳嗽次數；延長由濃氨水所誘導的小鼠咳嗽的潛伏期；延長豚鼠哮喘的潛伏期；降低小鼠足腫脹程度，提示百華花楸有很好的鎮(zhèn)咳、平喘、抗炎作用，也為進一步研究其藥物作用給出可行性方向，為藥物開發(fā)作出準備，有望將其研究成為一種新的治療呼吸系統(tǒng)疾病的藥物。

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