■楊雨生 王 洋 曾祥茜 楊 廣 朱國霞 張寶龍 吳 旋 白東清*

（1.天津農(nóng)學(xué)院水產(chǎn)學(xué)院 天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點(diǎn)實驗室，天津 300384；2.天津渤海水產(chǎn)研究所，天津 300457；3.天津現(xiàn)代晨輝科技集團(tuán)有限公司，天津 301800；4.天津市靜海區(qū)畜牧水產(chǎn)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心，天津 301600）

黃顙魚(Pelteobagrus fulvidraco)，俗稱黃姑、黃臘丁、嘎魚、嘎牙子等，屬鯰目，鲿科，黃顙魚屬，是一種小型淡水經(jīng)濟(jì)魚類[1]。10年前黃顙魚主要在湖北、四川、遼寧、江蘇和浙江等地開展大規(guī)模養(yǎng)殖[2]，2012年江浙地區(qū)黃顙魚養(yǎng)殖面積達(dá)6萬畝，單產(chǎn)最高達(dá)到1 500 kg/667 m2[3]。目前黃顙魚的養(yǎng)殖形勢依舊樂觀，2017年華中地區(qū)整體黃顙魚魚價穩(wěn)定在18～22元/kg[4]。隨著養(yǎng)殖規(guī)模、養(yǎng)殖密度的加大，極易導(dǎo)致黃顙魚的抗應(yīng)激能力和抗病力下降，嚴(yán)重影響黃顙魚產(chǎn)業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展。目前通過在飼料中添加功能性添加劑來提高魚類的抗應(yīng)激能力以及免疫力的方式已得到了廣泛的應(yīng)用[5-6]。姜黃素是從姜科植物中提取的一種相對分子質(zhì)量小的多酚類物質(zhì)[7]，具有抗炎、抗氧化、清除氧自由基、抗過氧化脂質(zhì)損傷、抗衰老、抗纖維化、保護(hù)肝臟和腎臟等多種生理活性[8]，在畜禽和水產(chǎn)領(lǐng)域上已見報道[9-10]。殼聚糖又名幾丁質(zhì)糖、脫乙酰基甲殼素，具有較好的抑菌活性，可生物降解，其代謝產(chǎn)物無毒，能夠提高免疫力、調(diào)節(jié)脂肪代謝和降低血脂、膽固醇等多種生理功能[11]。VC具有提高免疫力、提高生長性能、增強(qiáng)抗壓調(diào)節(jié)能力及抗氧化能力等多種生理作用[12-13]，但是大部分魚類不能自身合成，易感缺乏[14]。VB2又稱核黃素，是動物必需的水溶性維生素之一，參與機(jī)體內(nèi)氧化還原反應(yīng)、細(xì)胞代謝等多種生理活動[15]，可以顯著提高團(tuán)頭魴幼魚的抗氧化能力，增強(qiáng)腸道消化功能[16]。姜黃素、殼聚糖、VC及VB2這四種添加劑都具有良好的應(yīng)用效果，但四者配伍的效果未見報道，基于此本研究擬將這四種添加劑及其配伍添加到飼料中，探究其對黃顙魚生長、消化及抗氧化能力的影響及作用機(jī)制，從而為黃顙魚復(fù)合飼料添加劑的篩選提供新思路。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗飼料

VC（純度≥90）購自山西萊克生物科技有限公司。姜黃素（純度為10%）、殼聚糖（純度為90%，脫乙酰度為92.1%）、VB2（純度為92.7%）均購自徐州江大生物科技有限公司。黃顙魚浮性膨化飼料購自天津市某飼料有限公司（主要原料：進(jìn)口魚粉、豆粕、面粉、磷酸二氫鈣、氯化鈉、多種維生素、多種微量元素等，其中VC含量為700 mg/kg、VB2含量為32 mg/kg）。

基礎(chǔ)飼料為黃顙魚浮性膨化飼料，營養(yǎng)成分含量為：粗蛋白質(zhì)≥40.0%、粗脂肪≥6.0%、粗纖維≤5.0%、粗灰分≤15.0%、鈣含量0.5%～2.5%、總磷含量0.6%～2.0%、氯化鈉含量0.3%～3.0%、賴氨酸≥2.0%、水分≤12%。

在基礎(chǔ)飼料基礎(chǔ)上，將姜黃素、殼聚糖、VC、VB2四種添加劑按照表1比例溶于蒸餾水后，使用微霧噴壺噴灑于均勻攤開的成品黃顙魚浮性膨化飼料表面，置于避光通風(fēng)處陰干后裝袋保存。每組飼料分別標(biāo)記為T1、T2、T3、T4、T5、T6、T7組，其中T1組投喂基礎(chǔ)飼料是對照組，T2組只添加姜黃素，T3組只添加殼聚糖，T4組添加VC和VB2，T5～T7組是四種添加劑的不同組合。

1.1.2 試驗用魚

試驗用1 050尾健康黃顙魚購自天津藍(lán)科水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司，初始體重(56.67±10.75)g，初始體長(15.86±1.23)cm，暫養(yǎng)10 d。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗用魚分組及飼養(yǎng)管理

1 050尾全雄黃顙魚被隨機(jī)分為7組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)50尾魚，分別飼養(yǎng)在直徑1.5 m，深度0.75 m的玻璃纖維缸中。每天早7:00，晚6:00各投飼一次，日投飼率為魚體重的2%左右，并根據(jù)實際情況進(jìn)行調(diào)整。試驗用水采用池塘水與深井水按3∶7混合的形式，蓄水池水溫維持在(19.64±2.99)℃左右，養(yǎng)殖水溫保持(20.75±3.65)℃左右，pH值8.2，氨氮含量為(0.11±0.05)mg/l，亞硝酸鹽含量維持在(0.15±0.06)mg/l，溶氧含量為(5.50±0.71)mg/l，24 h連續(xù)充氣，3 d全換水一次，每天早間吸底一次。試驗時間60 d。

表1 試驗飼料中四種添加劑添加水平(mg/kg)

1.2.2 取樣處理

飼養(yǎng)60 d后，對試驗魚進(jìn)行取樣，先用一次性注射器進(jìn)行尾靜脈取血，以4 500 r/min離心15 min，取上清液制得血清樣品，于-80℃凍存待測。然后進(jìn)行魚體解剖，取肝胰臟、脾臟、前腸、中腸、后腸，用預(yù)冷生理鹽水沖洗干凈后再用濾紙吸干稱重，按照肝胰臟(g)(或脾臟)∶生理鹽水=1∶9的比例，充分研磨，制成10%的勻漿液；前腸(g)(或中腸、后腸)∶生理鹽水=1∶4的比例冰浴勻漿，制成25%的勻漿液，4℃條件下4 000 r/min離心20 min，取上清液于-80℃凍存待測。

1.2.3 指標(biāo)測定方法

1.2.3.1 生長指標(biāo)及飼料利用率的計算公式

分別于試驗測定每尾魚的體長、體重，計算增重率和特定增長率；根據(jù)投放尾數(shù)和死亡尾數(shù)，計算成活率；根據(jù)投飼量和體重的增加量計算飼料系數(shù)。

增重率(WG，%)=100×(Wt-W0)/W0

特定增長率(SGR，%/d)=100×(Wt-W0)/t

飼料系數(shù)(FCR)=Id/(Wt-W0)

蛋白質(zhì)效率(PER，%)=100×(Wt-W0)/(Id×Pd)

存活率(SR，%)=100×(N2/N1)

式中：Wt——終末魚體質(zhì)量(g)；

W0——初始魚體質(zhì)量(g)；

L——試驗?zāi)~體長(cm)；

Id——攝食總量(g)；

Pd——飼料中蛋白含量(%)；

t——飼養(yǎng)時間(d)；

N1——試驗初魚尾數(shù)；

N2——試驗終魚尾數(shù)。

1.2.3.2 消化酶指標(biāo)

淀粉酶和脂肪酶活力的測定試劑盒均采購自南京建成生物工程研究所，具體測定方法參照所附說明書進(jìn)行；蛋白酶活力的測定采用福林酚法，福林酚試劑購自北京索萊寶有限公司。

1.2.3.3 抗氧化能力指標(biāo)

自南京建成生物工程研究所采購CAT、SOD、MDA、GSH、GSH-Px的測定試劑盒，具體的測定過程參照所附說明書進(jìn)行。

1.3 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，采用SPSS16.0單因素方差分析(one-way ANOVA)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，若差異達(dá)到顯著(P＜0.05)，則進(jìn)行Duncan's法多重比較。

2 結(jié)果

2.1 四種添加劑對黃顙魚生長指標(biāo)和飼料利用率的影響（見表2）

表2 四種添加劑對黃顙魚生長指標(biāo)和飼料利用率的影響

從表2可以看出，四種添加劑可以不同程度地提高黃顙魚的增重率、特定增長率、蛋白質(zhì)效率，而四者配伍效果更好，其中T6組的增重率、特定增長率、蛋白質(zhì)效率顯著高于T1組和T2組(P＜0.05)；試驗組飼料系數(shù)與對照組相比均有不同程度的降低，其中T6、T7組與對照組（T1組）相比，飼料系數(shù)顯著降低(P＜0.05)，且T6組飼料系數(shù)最低；與對照組相比，試驗組存活率也有不同程度地提高，其中配伍組（T5～T7組）的存活率顯著提高(P＜0.05)，分別提高了11%、12.71%、12.71%?？梢?，從生長指標(biāo)和飼料利用率角度來分析，本試驗T6配伍組對促進(jìn)黃顙魚生長性能效果最好，其中添加姜黃素150 mg/kg、殼聚糖4 500 mg/kg、VC 709 mg/kg（總量 1 409 mg/kg）、VB240 mg/kg（總量72 mg/kg）。

2.2 四種添加劑對黃顙魚腸道消化酶活力的影響

2.2.1 四種添加劑對黃顙魚腸道脂肪酶活力的影響（見表3）

表3 四種添加劑對黃顙魚腸道脂肪酶活力的影響(U/mg prot.)

由表3可知，黃顙魚腸道脂肪酶活力順序為前腸＞中腸＞后腸。各試驗組腸道脂肪酶活力均有不同程度提高(P＜0.05)，其中配伍組T6組的前腸、中腸、后腸脂肪酶活力均為最高值，分別約是對照組T1組的3.44倍、4.23倍和4.30倍(P＜0.05)。

2.2.2 四種添加劑對黃顙魚腸道蛋白酶活力的影響（見表4）

表4 四種添加劑對黃顙魚腸道蛋白酶活力的影響(U/mg prot.)

由表4可知，黃顙魚腸道蛋白酶活力順序與脂肪酶相同。各試驗組（T2組除外）前腸蛋白酶活力與對照組相比均顯著提高(P＜0.05)，且T6組前腸蛋白酶活力最高，是對照組的2.51倍(P＜0.05)；配伍組（T5、T6、T7組）中的中腸蛋白酶活力與對照組相比顯著升高(P＜0.05)，且最高活力出現(xiàn)在T6組；與對照組相比，T4組（VC、VB2合劑組）和配伍組中的后腸蛋白酶活力顯著提高(P＜0.05)，且配伍組中T6組活力最高，是對照組的5.35倍。

2.2.3 四種添加劑對黃顙魚腸道淀粉酶活力的影響（見表5）

表5 四種添加劑對黃顙魚腸道淀粉酶活力的影響(U/mg prot.)

由表5可知，黃顙魚腸道淀粉酶活力順序為中腸＞后腸＞前腸。配伍組（T5、T6、T7組）前腸淀粉酶活力與對照組（T1組）相比均顯著提升(P＜0.05)，其中T6組前腸淀粉酶活力最高；與對照組（T1組）相比配伍組中T7組中腸淀粉酶活力最高(P＜0.05)，T6組次之(P＜0.05)；除T4組外，與對照組（T1組）相比，各試驗組后腸淀粉酶活力均有不同程度地提高(P＜0.05)，其中配伍組T6組后腸淀粉酶活力最高，是對照組（T1組）的5.02倍(P＜0.05)。

2.3 四種添加劑對黃顙魚體內(nèi)抗氧化指標(biāo)的影響

2.3.1 四種添加劑對黃顙魚體內(nèi)CAT活力的影響（見表6）

表6 四種添加劑對黃顙魚體內(nèi)CAT活力的影響

由表6可以看出，黃顙魚體內(nèi)肝胰臟的CAT活力要高于脾臟和血清。各試驗組肝胰臟的CAT活力均有不同程度升高，其中T6組肝胰臟CAT活力最高，比T1組提高了約22.27%(P＜0.05)；T6組脾臟CAT活力最高，是對照組的1.27倍(P＜0.05)。與對照組相比，T6組血清CAT活力顯著升高(P＜0.05)，提高了約91.52%。2.3.2 四種添加劑對黃顙魚體內(nèi)SOD活力的影響（見表7）

由表7可知，黃顙魚體內(nèi)SOD活力大小為血清＞肝胰臟＞脾臟。肝胰臟SOD活力在T6組達(dá)到最高，是對照組的1.41倍(P＜0.05)，T5組次之(P＜0.05)；各試驗組脾臟SOD活力均有不同程度升高(P＜0.05)，配伍組（T5、T6、T7組）提升較為明顯，且T6組脾臟SOD活力最高，是對照組的1.70倍(P＜0.05)。血清中SOD活力也在T6組達(dá)到最高，約是對照組的1.65倍(P＜0.05)。

表7 四種添加劑對黃顙魚體內(nèi)SOD活力的影響

2.3.3 四種添加劑對黃顙魚體內(nèi)MDA含量的影響（見表8）

由表8可知，黃顙魚體內(nèi)MDA含量大小為血清＞肝胰臟＞脾臟。各試驗組肝胰臟MDA含量與對照組相比均顯著下降(P＜0.05)，其中T6組下降幅度最為明顯，T5組次之，與對照組相比分別下降了80.45%、75.42%；脾臟和血清MDA含量最低值也均出現(xiàn)在T6組(P＜0.05)。

2.3.4 四種添加劑對黃顙魚體內(nèi)GSH含量的影響（見表9）

由表9可知，黃顙魚體內(nèi)GSH含量大小為血清＞肝胰臟＞脾臟。除T2組外，各試驗組肝胰臟GSH含量均有不同程度提高(P＜0.05)，其中配伍組T6組含量最高，約為對照組的1.87倍；各試驗組脾臟GSH含量也均有顯著升高(P＜0.05)，其中T6組脾臟GSH含量最高，T5組次之，分別為對照組的1.63倍和1.54倍；與對照組相比，T2、T5、T6、T7組血清GSH含量顯著升高(P＜0.05)，分別提高了約61%、81%、137%、95%。

表8 四種添加劑對黃顙魚體內(nèi)MDA含量的影響

表9 四種添加劑對黃顙魚體內(nèi)GSH含量的影響

2.3.5 四種添加劑對黃顙魚體內(nèi)GSH-Px活力的影響（見表10）

表10 四種添加劑對黃顙魚體內(nèi)GSH-Px活力的影響

由表10可知，黃顙魚體內(nèi)GSH-Px活力大小順序為血清＞肝胰臟＞脾臟。各試驗組肝胰臟GSH-Px活力均有不同程度升高(P＜0.05)，且GSH-Px活力最高值出現(xiàn)在T6組；除T3組外，各試驗組脾臟的GSH-Px活力均有顯著升高(P＜0.05)，且T6組脾臟GSH-Px活力最高(P＜0.05)。各試驗組血清GSH-Px活力與對照組相比均有不同程度提高(P＜0.05)，其中T7組活力最高。

3 討論

3.1 四種添加劑對黃顙魚生長性能和飼料利用率的影響

本試驗發(fā)現(xiàn)，單獨(dú)添加姜黃素對黃顙魚生長性能相關(guān)指標(biāo)有不同程度地提高，但卻未見顯著差異，這與孫全友等[17]、張寶彤等[18]、張滕閑等[10]結(jié)果類似，至于未出現(xiàn)顯著性結(jié)果可能是由于所添加姜黃素的劑量、純度、試驗對象種類、養(yǎng)殖環(huán)境、投飼頻率等不同所致。單獨(dú)添加殼聚糖對黃顙魚生長性能的影響與殼聚糖在畜禽和水產(chǎn)動物的應(yīng)用研究結(jié)果類似[19-23]，而未見顯著影響可能是由于殼聚糖的純度、脫乙酰度不同等因素所致。目前關(guān)于VC和VB2聯(lián)用的應(yīng)用研究相對較少，但其單獨(dú)在畜禽和水產(chǎn)動物領(lǐng)域的應(yīng)用已有大量報道[24-29]。本試驗發(fā)現(xiàn)，VC和VB2聯(lián)用可一定程度促進(jìn)黃顙魚生長性能，但效果不大，二者是否有協(xié)同功效還需深入研究。本試驗中配伍組T6組在促進(jìn)生長性能方面效果顯著，可見四種添加劑聯(lián)用在促生長方面具有一定的協(xié)同效果，分析其原因可能是由于姜黃素、殼聚糖和VC都能夠提高魚體的免疫力，使魚體保持健康狀態(tài)，同時殼聚糖有利于魚類腸道有益菌群的增殖，而有益菌的相關(guān)代謝產(chǎn)物又可被魚體利用；此外殼聚糖具有黏性，在飼料中添加后可在飼料表面形成一層保護(hù)膜，從而延長飼料的水化時間，減少飼料中營養(yǎng)成分的溶失，提高飼料的利用率。本試驗也發(fā)現(xiàn)，高劑量組（T7組）的生長性能并未繼續(xù)提升，這可能與四者配伍劑量有關(guān)，尤其是配伍中殼聚糖具有很強(qiáng)的吸附離子和蛋白質(zhì)的能力，過量添加會影響魚類對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用。

3.2 四種添加劑對黃顙魚消化能力的影響

魚類的消化酶對魚類的生長發(fā)育有著極其重要的作用，魚類消化酶活性的強(qiáng)弱也決定了魚類對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收能力，進(jìn)而影響其生長[30]。魚類的消化酶主要有蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶這三種[31]。已有大量研究表明，一些外源添加劑可以增強(qiáng)魚類的消化酶活性，從而促進(jìn)其消化能力。本試驗發(fā)現(xiàn)姜黃素在促進(jìn)腸道脂肪酶活力方面效果顯著，對其它腸道消化酶活性雖無顯著提高，但卻有所提升，這與胡忠澤等[32]、張滕閑等[10]的研究結(jié)果類似。華雪銘等[33]的研究結(jié)果表明，適量的殼聚糖可以提高暗紋東方鲀的腸道淀粉酶活力，從而促進(jìn)其消化能力，這與本試驗結(jié)果基本一致，本試驗發(fā)現(xiàn)，殼聚糖可顯著提高中腸和后腸淀粉酶活性，對腸道脂肪酶活性和前腸蛋白酶活性也均有顯著影響，這也顯示出殼聚糖具有一定促進(jìn)消化的作用。本試驗中VC和VB2聯(lián)用可顯著提高黃顙魚腸道脂肪酶活力以及前腸、后腸的蛋白酶活力，但對腸道淀粉酶活力影響并不顯著，這與王菲等[16]、劉揚(yáng)等[34]的研究結(jié)果類似。本試驗中配伍組T6組的腸道消化酶活力最高，T7組次之，可見四種添加劑聯(lián)用對促進(jìn)黃顙魚消化能力具有一定協(xié)同效果，且腸道消化酶活性并未隨添加劑量的提升而升高。有研究表明，由于殼聚糖具有螯合作用，因此較高劑量的殼聚糖的攝入會影響機(jī)體對水溶性維生素的吸收[35]，據(jù)此可推測本試驗中配伍組T7組的殼聚糖劑量較高從而可能對VC和VB2的吸收利用產(chǎn)生影響，限制了其促消化的效果。

3.3 四種添加劑對黃顙魚抗氧化能力的影響

檢測動物SOD、CAT和GSH-Px等抗氧化酶及氧化產(chǎn)物的變化能比較準(zhǔn)確地反映機(jī)體內(nèi)的抗氧化系統(tǒng)的情況，以此來評價機(jī)體的抗氧化能力[36-41]。姜黃素結(jié)構(gòu)骨架主要包括兩個苯丙烯?；粋€酚羥基和一個甲氧基各位于兩個苯環(huán)上，丙烯基與一個β-雙酮（烯醇式）結(jié)構(gòu)相連，其抗氧化活性被認(rèn)為與此結(jié)構(gòu)密切關(guān)聯(lián)，而作為一種天然抗氧化劑，其抗氧化活性可與花青素等相比，且經(jīng)研究證明，姜黃素抗氧化能力優(yōu)于常規(guī)的維生素[42-45]。本試驗發(fā)現(xiàn)，姜黃素可以顯著提高黃顙魚體內(nèi)的SOD、GSH-Px活性和GSH含量，降低體內(nèi)MDA含量，這與胡忠澤等[46]、王雅慧等[47]、張滕閑等[10]的研究結(jié)果相互印證。殼聚糖具有多種生理功能，其抗氧化活性也被大量研究證明。有研究表明，殼聚糖體外對O2-的清除率可達(dá)到73.1%[48]。本試驗發(fā)現(xiàn)，T3組（殼聚糖組）SOD、GSH-Px活力顯著升高，MDA含量顯著降低，這與部分殼聚糖的應(yīng)用研究結(jié)果類似[49-51]，可見殼聚糖對黃顙魚的抗氧化能力具有一定的促進(jìn)作用，而殼聚糖提高黃顙魚的抗氧化能力可能是由于其具有螯合作用，從而促進(jìn)了機(jī)體對金屬離子的吸收，增強(qiáng)了抗氧化酶的合成性能。VC本身可在機(jī)體內(nèi)直接清除自由基，同時VC可以補(bǔ)充機(jī)體內(nèi)的GSH，維持其還原狀態(tài)，并保持機(jī)體疏基酶的活性，從而在抗氧化系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用[52-53]。VB2在生物體內(nèi)主要以FAD和FMN這兩種形式存在，而FAD作為多種抗氧化酶的輔酶在抗氧化系統(tǒng)中起著重要作用[54-55]。本試驗結(jié)果表明，VC和VB2聯(lián)用可以顯著提高黃顙魚體內(nèi)部分組織的SOD、CAT、GSH-Px活力以及GSH含量，降低MDA含量，這與部分VC和VB2在畜禽以及水產(chǎn)動物中的報道一致[16，26，56-59]。有研究表明，VC 和 VB2聯(lián)用可協(xié)同提高小鼠肝臟中GSH-Px的活力，促進(jìn)小鼠的抗氧化能力[60]，據(jù)此可初步推測VC和VB2聯(lián)用對提高黃顙魚的抗氧化能力也可能具有一定協(xié)同增效作用，具體作用機(jī)制還有待進(jìn)一步探討。本試驗中，配伍組（T5、T6、T7組）抗氧化酶活力要高于其余試驗組，配伍組T6組的抗氧化酶活力最高，可見四種添加劑在提高黃顙魚體內(nèi)抗氧化酶活力方面具有協(xié)同效果，而在提高抗氧化性能方面并未隨著劑量的增大而持續(xù)增強(qiáng)，這可能是由于高劑量殼聚糖的螯合作用干擾了其他成分的吸收利用，從而降低了其他添加劑抗氧化活性的作用效果，其具體原因還有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

① 添加姜黃素、殼聚糖、VC、VB2四種添加劑，養(yǎng)殖黃顙魚60 d后，發(fā)現(xiàn)殼聚糖在促生長方面的效果優(yōu)于姜黃素以及VC和VB2聯(lián)用。而四者聯(lián)用具有一定協(xié)同效果，且T6組效果最為顯著。

②從消化能力分析四者配伍效果較好，且配伍組T6組效果最佳，這與促生長方面的效果基本一致，這一點(diǎn)也充分說明了消化能力的強(qiáng)弱與生長性能密切相關(guān)。

③從抗氧化方面分析，VC和VB2聯(lián)用效果優(yōu)于姜黃素和殼聚糖，配伍組T6組的效果最為顯著。

綜上所述，從生長、消化和抗氧化三個方面分析，本試驗中配伍組T6組[飼料中添加姜黃素150 mg/kg，殼聚糖4 500 mg/kg，VC 709 mg/kg（總量1 409 mg/kg）、VB240 mg/kg（總量72 mg/kg）]效果最佳。