魏 杰 劉文菊 李根平 付 瑞 邢 進 王 洪 王 吉 李曉波 馮育芳王淑菁 王錫樂 鞏 薇 賀爭鳴 岳秉飛

（1.中國食品藥品檢定研究院，北京 100050）（2.北京市實驗動物管理辦公室，北京 100195）

實驗動物是生物醫(yī)學的基礎要素，對生命科學研究乃至生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展都有著至關重要的影響[1]。實驗動物應用需求的日益升高，對實驗動物的質(zhì)量也提出了更高要求；做好實驗動物的質(zhì)量監(jiān)測管理工作，對實驗動物的生產(chǎn)和應用就顯得尤為重要[2-3]。

我國對實驗動物的管理主要采用實驗動物許可證制度，配合《實驗動物管理條例》構(gòu)建了比較完備的實驗動物法規(guī)、標準、技術體系。這一制度體系的構(gòu)建實施，為實驗動物質(zhì)量保障提供了科學助力[4-5]。

依托國家實驗動物管理法規(guī)體系，北京市率先實現(xiàn)了地方立法，并通過組織實施一年兩次的實驗動物質(zhì)量監(jiān)督抽驗工作，加強對實驗動物質(zhì)量的監(jiān)測，規(guī)范實驗動物生產(chǎn)行政許可。本文對近3年來北京地區(qū)實驗動物質(zhì)量抽檢結(jié)果進行分析，探討影響動物質(zhì)量的因素，為動物生產(chǎn)和監(jiān)測質(zhì)量管理提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

動物樣本均來自于北京地區(qū)具有《實驗動物生產(chǎn)許可證》的30余家單位。每年上下半年各集中抽檢一次，3年共6次。歷次抽檢類目數(shù)量詳見表1。

表1 2014—2016年北京地區(qū)實驗動物質(zhì)量監(jiān)測數(shù)量Tab le 1 M onitoring num ber of laboratory anim als in Beijing area from 2014 to 2016

1.2 方法

由北京市實驗動物管理辦公室進行組織抽樣，動物品種、抽樣數(shù)量、檢測項目均參照國家及地方標準總則的規(guī)定[6-12]。檢測方法、檢測儀器和試劑均參照相應國家及地方標準具體要求選用。

1.3 結(jié)果判定

按照標準規(guī)定判定是否合格，出具檢驗報告。

依據(jù)各年度的檢驗報告，按照動物種類分別統(tǒng)計，比較不同單位動物質(zhì)量，計算批次合格率，分析問題所在。

2 結(jié)果

2.1 3年中小鼠微生物檢測結(jié)果

3年中共對7家單位進行了小鼠的遺傳質(zhì)量抽檢。僅生產(chǎn)SPF級（A1～A3）和清潔級（A5～A7）小鼠的各有3家，另有1家（A4）兩者皆有生產(chǎn)。抽檢批次最多的是 A1和 A7，均有12批，最少的是A5，僅4批。A6單位的SPF級小鼠在2016年上半年檢測出嗜肺巴斯德桿菌陽性，陽性率為4/10，該單位3年累計合格率為83.3%，2016年上半年的批次合格率為90.9%。其余各單位各年份批次小鼠均為100%（見表2）。

2.2 3年中大鼠微生物檢測結(jié)果

3年里共對4家單位的 SPF級（B1、B2）和清潔級（B3、B4）大鼠進行了質(zhì)量抽檢。B1單位9批，其余單位均為6批。所有批次檢測結(jié)果均為合格（詳見表 3）。

表2 2014—2016年小鼠的抽檢結(jié)果Tab le 2 Random testing Results of m ice from 2014 to 2016

表3 2014—2016年大鼠的抽檢結(jié)果Tab le 3 Random testing results of rats from 2014 to 2016

2.3 3年中豚鼠微生物檢測結(jié)果

3年中對11家單位的豚鼠進行了質(zhì)量抽檢。8家單位為普通級豚鼠（C1～C8），2家單位既有清潔級又有SPF級（C10～C11），1家單位為普通級和SPF級（C9）。C9單位抽檢了8批，其余單位均為6批。C8單位在2014年上半年檢出了沙門菌，陽性率為1/9，該單位抽檢合格率為83.3%，2014上半年年份合格率為90.9%。C9單位的SPF級豚鼠在2016年下半年檢出了呼腸孤病毒Ⅲ抗體，陽性率為8/10，該單位抽檢合格率為87.5%，2016下半年年份合格率為90.9%。其余批次均為合格（見表4）。

表4 2014—2016年豚鼠的抽檢結(jié)果Tab le 4 Random testing Results of guinea pigs from 2014 to 2016

2.4 3年中地鼠微生物檢測結(jié)果

3年里共對2家單位5批次清潔級地鼠進行了質(zhì)量抽檢，所有批次檢測結(jié)果均為合格（詳見表 5）。

表5 2014—2016年地鼠的抽檢結(jié)果Tab le 5 Random testing Results of shrew s from 2014 to 2016

2.5 3年中兔的微生物檢測結(jié)果

3年中對15家單位的普通級（E1～E14）和SPF級（E15）兔進行了質(zhì)量抽檢。E14單位僅在2014年上半年抽檢1批，后未參加質(zhì)量抽檢；5家單位抽檢了 9 批次（E2、E5、E7、E8、E11），1 家單位抽檢 4批（E15），其余均為6批。

不合格的原因單一表現(xiàn)為兔出血癥病毒抗體不達標。單位 E5、E8、E10分別于 2014和 2015上半年出現(xiàn)了兔出血癥病毒抗體不達標，而單位E6除2014年下半年合格其余5次抽檢均不達標。單位和年份合格率數(shù)據(jù)參見表6。

2.6 3年中犬的微生物檢測結(jié)果

3年中對8家單位的普通級犬進行了質(zhì)量抽檢。1家單位為4批次（F8），其余均為6批次。僅單位F3合格率為100%，在6次抽檢中均得到了合格結(jié)果；單位F7合格率最低，為16.7%，僅在2015年上半年得到了合格結(jié)果。

不合格的問題主要表現(xiàn)在細菌感染和不同程度的免疫抗體不達標。共檢出不合格批次20批：沙門菌陽性1批（F1），傳染性犬肝炎病毒抗體不達標2批（F2、F6），犬瘟熱病毒抗體不達標9批，狂犬病病毒抗體不達標15批，分別占不合格批次比例數(shù)為5%、10%、45%和75%。具體數(shù)據(jù)詳見表7。

2.7 3年中猴的微生物檢測結(jié)果

3年中共對3家單位15批的普通級猴進行了質(zhì)量抽檢，G1、G2、G3單位分別為 6批、5批、4批。所得結(jié)果均為合格，見表8。

2.8 3年中小型豬的微生物檢測結(jié)果

3年中共對7家單位的普通級小型豬進行了質(zhì)量抽檢：2014年上半年沒有抽檢，下半年為4家；2015年上半年為6家，其余各年份為7家。各年份各單位均沒有全部合格的結(jié)果，2015年下半年7家單位均不合格。從單位而言，2家單位（H2、H3）的合格率為60%，1家單位（H4）合格率為20%，4家（H1、H5 ～H7）單位合格率為 0。

表6 2014—2016年兔的抽檢結(jié)果Tab le 6 Random testing Results of rabbits from 2014 to 2016

表7 2014—2016年犬的抽檢結(jié)果Table 7 Random testing results of dogs from 2014 to 2016

表8 2014—2016年猴的抽檢結(jié)果Tab le 8 Random testing Results of m onkeys from 2014 to 2016

不合格的問題集中體現(xiàn)在不同程度的免疫抗體不達標。共檢出不合格批次24批：口蹄疫病毒抗體、乙型腦炎病毒抗體、豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體和豬瘟病毒抗體不達標批次分別為14批、24批、12批和23批，分別占不合格批次比例數(shù)為58.3%、100%、50%和95.8%。具體數(shù)據(jù)詳見表9。

表9 2014—2016年小型豬的抽檢結(jié)果Tab le 9 Random testing Results of m inipigs from 2014 to 2016

2.9 3年中近交系大小鼠的遺傳質(zhì)量檢測結(jié)果

3年中對6家單位抽檢了26批次的近交系小鼠和1批次近交系大鼠（詳見表10）。其中，2015年下半年抽檢的LEW大鼠質(zhì)量合格。近交系小鼠的H-2單倍型檢測均為合格，遺傳生化標記位點檢測有3批次出現(xiàn)了遺傳變異，分別是：I2單位的C57BL/6小鼠在2014年下半年出現(xiàn)的磷酸葡萄糖變位酶（PGM）變異，表現(xiàn)為2/6b和4/6ab型；以及2016年下半年出現(xiàn)的2位點變異，表現(xiàn)為堿性磷酸酶（AKP）5/6a和 1/6b型，蘋果酸酶（MOD）5/6b和1/6a型。I3單位的BALB/c小鼠2016年下半年出現(xiàn)的2位點變異，表現(xiàn)為蘋果酸酶（MOD）5/6a和1/6b型，堿性磷酸酶（AKP）5/6b和1/6a型。

表10 2014—2016年近交系大小鼠遺傳質(zhì)量檢測結(jié)果Tab le 10 Genetic m onitoring Results of inb red strain m ice and rats（2014—2016）

2.10 三個年度的抽檢數(shù)量及批次

從表11中可見，2014—2016年3個年度的抽檢批次分別為120、133、130批，年度總的批次合格率分別為86.7%、87.2%、82.3%。各年中均有病原感染和免疫不達標情況。其中免疫不達標在不合格批次中數(shù)量最多。遺傳變異在2014和2016年有檢出。

表11 2014—2016年北京地區(qū)實驗動物抽檢數(shù)量及批次合格率Tab le 11 Random testing quantity and qualified batches of laboratory anim als in Beijing area（2014—2016）

3 討論

3.1 近3年與前3年實驗動物質(zhì)量的比較分析[13]

與 2011—2013 年相比（表 11、表 12[13]），北京地區(qū)抽檢動物的數(shù)量和批次均有增長，總的增長率分別為32.8%和18.9%，批次合格率卻明顯高于上一個3年。這從一個側(cè)面反映出首都地區(qū)實驗動物生產(chǎn)能力和質(zhì)量的提升。總體趨勢是病原感染降幅明顯，微生物感染控制水平有所提升；免疫不達標仍是不合格的主因，遺傳變異時有發(fā)生。

表12 2011—2013年北京地區(qū)實驗動物抽檢數(shù)量及批次合格率Table 12 Random testing quantity and qualified batches of laboratory anim als in Beijing area（2011—2013）

以3年為一個階段，我們還發(fā)現(xiàn)一個有趣的現(xiàn)象，每3年的批次合格率均有下降趨勢：2011—2013年是 74%、74.5%、68.8%，2014—2016 年 為86.7%、87.2%和82.3%。原因可能來自于抽檢動物基數(shù)、項目和品種的逐年增加，但也不排除生產(chǎn)單位在質(zhì)量控制上存在時緊時松的狀態(tài)?？上驳淖兓谟?，病原感染不合格的絕對數(shù)有了明顯的下降。前3年病原感染在小鼠、大鼠、豚鼠、猴中檢出了11種病原，近3年僅在小鼠、豚鼠、犬中檢測出了3種病原。但就免疫不達標狀況而言，前3年以兔和犬為主，僅2013年抽檢了小型豬2批次；近3年則以小型豬為主，犬和兔的免疫不達標絕對批次數(shù)有所下降。

6年來遺傳檢測的主要檢測品種仍然集中在C57BL/6和BALB/c小鼠，大鼠、小型豬等多年沒有列入質(zhì)量監(jiān)督抽檢。2015年對LEW大鼠進行的遺傳質(zhì)量檢測為監(jiān)督抽驗工作中首次完成的近交系大鼠的遺傳質(zhì)量評價。前3年雖也有送檢近交系大鼠，卻沒有申請遺傳檢測。遺傳變異導致的不合格批次數(shù)目變化不大，但通過近交系小鼠的遺傳監(jiān)測結(jié)果，仍不能對變異的影響掉以輕心。

3.2 近3年動物品種與生產(chǎn)單位的質(zhì)量分析

地鼠為近3年新增抽檢品種，生產(chǎn)單位和數(shù)量有限，但質(zhì)量良好總體穩(wěn)定。小型豬是2013年納入抽檢，是上一個3年的新增抽檢品種，起初一年抽檢1次；自2015年生產(chǎn)廠家和批次迅速增加，質(zhì)量上總體免疫情況有待加強。

3年中抽檢小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠、兔、犬、猴、小型豬 8個品種的生產(chǎn)單位分別為 7、4、11、2、15、8、3、7家，大鼠、地鼠、猴這 3個品種各年度各單位均為合格結(jié)果，小型豬品種各年度個單位均沒有100%的合格結(jié)果，其余品種在各年度各單位為部分100%合格結(jié)果。

4家小鼠生產(chǎn)單位在3年抽檢中均合格，不合格批次在SPF和清潔級小鼠中均有出現(xiàn)。9家豚鼠生產(chǎn)單位在3年抽檢中均合格，不合格批次在普通級和SPF級中各出現(xiàn)1批。11家兔生產(chǎn)單位在3年抽檢中均合格，4家單位8批次不合格兔均為普通級。犬則僅有1家生產(chǎn)單位在3年抽檢中質(zhì)量均合格。不合格的主要因素為免疫不達標。

動物免疫抗體水平不達標與疫苗質(zhì)量、免疫操作、動物狀態(tài)、飼養(yǎng)管理等多方面因素有關[14]，也可能與動物品種品系有關。從3年的結(jié)果來看，不同單位的質(zhì)量水平差異很大。兔的免疫狀況總體較好，但不達標單位中有1家6次抽檢5次不達標。犬和小型豬的總體免疫狀況欠佳，但仍有1家犬生產(chǎn)單位6次抽檢均合格，2家小型豬生產(chǎn)單位各有3次合格結(jié)果。要提升實驗動物的免疫水平，需要各單位加強管理意識，從多方面總結(jié)經(jīng)驗，尋找方法。

隨著生物醫(yī)學的發(fā)展需求的增長與實驗動物生產(chǎn)許可制度的不斷深化，完善實驗動物的監(jiān)督抽驗工作的意義日益凸顯。實驗動物質(zhì)量監(jiān)測不僅是保障實驗動物質(zhì)量的必要手段，也是實驗動物科學的重要內(nèi)容。長期而科學監(jiān)測，不僅能夠為實驗動物的生產(chǎn)、應用提供科學依據(jù)，通過發(fā)現(xiàn)與排除特定病原菌，對生產(chǎn)和使用人員也是有益的保護[15]。但這不僅需要監(jiān)管部門和檢測單位的努力，更需要生產(chǎn)企業(yè)的重視與配合，需要強化生產(chǎn)管理意識，才能從根本提升實驗動物質(zhì)量。