多粘類芽孢桿菌(PaenibacilluspolymyxaAsh,Priest & Collins)是一種產(chǎn)芽孢,具有固氮能力的革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌,多粘類芽孢桿菌及其代謝產(chǎn)物廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、醫(yī)學(xué),工礦業(yè)及廢水處理等方面,美國(guó)環(huán)境保護(hù)署(EPA)已將其列為可商業(yè)上應(yīng)用的微生物種類之一,此外我國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部也將其列為免做安全鑒定的一級(jí)菌種。
作用機(jī)理:1. 營(yíng)養(yǎng)和空間位點(diǎn)的競(jìng)爭(zhēng):多粘類芽孢桿菌的芽孢利用植物葉面和根部的營(yíng)養(yǎng)和水分繁殖,與植物病原菌爭(zhēng)奪同一環(huán)境內(nèi)的空間、營(yíng)養(yǎng)、氧氣等,其芽孢優(yōu)勢(shì)在于營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)能力強(qiáng)、抗菌物質(zhì)產(chǎn)生量高、生長(zhǎng)速度快及適應(yīng)性強(qiáng)等特性,快速生長(zhǎng)成為優(yōu)勢(shì)菌群,占據(jù)生態(tài)優(yōu)勢(shì),在植物表面形成保護(hù)膜,阻止病菌侵染,使病菌沒(méi)有生存空間,表現(xiàn)其持效期長(zhǎng)。2. 產(chǎn)生抗菌活性物質(zhì):①作用于細(xì)菌細(xì)胞膜,產(chǎn)生肽類抗菌物質(zhì),如多粘菌素,粘菌素,環(huán)桿菌素等,其作用位點(diǎn)為細(xì)菌的細(xì)胞膜,如多粘菌素分子中的環(huán)狀結(jié)構(gòu)能插入細(xì)菌細(xì)胞膜從而改變細(xì)菌細(xì)胞膜的滲透性,造成細(xì)菌內(nèi)含物的流失,最終導(dǎo)致細(xì)菌死亡。②作用于真菌細(xì)胞壁,多粘芽孢桿菌產(chǎn)生的拮抗蛋白質(zhì)大多數(shù)為細(xì)胞壁降解酶類,如β-1,3-葡聚糖酶、幾丁質(zhì)酶等。β-1,3-葡聚糖酶可水解β-1,3-葡聚糖中的β-1,3-糖苷鍵,從而抑制植物病原真菌的生長(zhǎng)與增殖。同時(shí)分泌的核苷類抗菌素多氧霉素作用于病原真菌細(xì)胞壁,能引起真菌生長(zhǎng)時(shí)的菌絲尖端形成膨脹泡而破裂。③活菌體直接抑制,多粘類芽孢桿菌活菌體能抑制鐮刀菌的生長(zhǎng),而無(wú)菌濾液對(duì)鐮刀菌無(wú)作用。這說(shuō)明這株多粘類芽孢桿菌對(duì)鐮刀菌的抑制是活菌體直接起抑制作用。④保護(hù)作用,多粘類芽孢桿菌可以產(chǎn)生胞外多糖,保護(hù)植物免受病原體侵害;該菌和植物根系的相互作用也會(huì)導(dǎo)致根毛發(fā)生物理變化。3.誘導(dǎo)作用:多粘類芽孢桿菌不僅能直接殺死病原菌,還能通過(guò)與植物之間的互作來(lái)起到抗病效果。誘導(dǎo)植物系統(tǒng)抗性是植物被環(huán)境中的非生物或生物因子激活產(chǎn)生的對(duì)隨后的病原菌侵染具有抵抗性的特征。4 .提供營(yíng)養(yǎng):多粘類芽孢桿菌能夠通過(guò)固氮和溶磷為植物提供植物自身難以吸收的氮源和磷肥養(yǎng)料。多粘類芽孢桿菌能在植物根尖定植并形成生物膜,并且在根部維管柱外的細(xì)胞內(nèi)空間積累,產(chǎn)生的生物膜能夠大大加速植物吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的過(guò)程。
生物學(xué)特征:多粘類芽孢桿菌KN-03為厚壁菌門-芽孢桿菌綱-芽孢桿菌目-類芽孢桿菌科-類芽孢桿菌屬,微生物類殺菌劑。接種于LB固體培養(yǎng)基上,28℃培養(yǎng)24h后觀察:菌落呈乳脂色,濕潤(rùn)光滑;菌體為直或近直的桿狀,長(zhǎng)2~5μm,寬0.6~0.8μm,有莢膜,周生鞭毛;橢圓形芽孢使孢囊膨大,芽孢中生到端生。在PDA平板上,菌落較小,白色或淡黃色,圓形,菌面稍凸起或不凸起,邊緣整齊,表面有光澤,光滑濕潤(rùn),半透明到不透明;在牛肉汁瓊脂培養(yǎng)基上,菌落較薄,呈灰白色,濕潤(rùn)光滑,無(wú)菌膜,液體澄清;在斜面培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好,菌苔線狀、扁平,表面光滑、半透明。兼性厭氧,分解葡萄糖和其他糖類產(chǎn)酸。紫外線可殺滅。pH4~7時(shí)穩(wěn)定,產(chǎn)品在5℃,常溫2年內(nèi)貯存均穩(wěn)定。
理化性質(zhì):產(chǎn)品外觀為可流動(dòng)、易測(cè)量體積的棕黃色至褐色懸浮液體,密度(20℃)1.009 7g/cm3,多粘類芽孢桿菌KN-03含量CFU/g≥5.0×108,雜菌率≤3.0%,pH值范圍為4.5~6.5,濕篩試驗(yàn)(通過(guò)150μm試驗(yàn)篩)>98%;懸浮率≥80%;持久起泡性≤50mL。不易燃,對(duì)包裝無(wú)腐蝕,無(wú)熱爆炸性。
毒性:5億CFU/g多粘類芽孢桿菌KN-03懸浮劑對(duì)大鼠急性經(jīng)口經(jīng)皮LD50>5 000mg/kg、經(jīng)皮LD50>2 000mg/kg,急性吸入LC50>2 100mg/m3;對(duì)兔皮膚無(wú)刺激性,眼睛無(wú)激性;豚鼠皮膚變態(tài)反應(yīng)(致敏性)試驗(yàn)結(jié)果為弱致敏性;5億CFU/g多粘類芽胞桿菌KN-03懸浮劑為低毒殺蟲劑。
環(huán)境生物安全性評(píng)價(jià):5億CFU/g多粘類芽孢桿菌KN-03懸浮劑對(duì)斑馬魚急性毒性LC50(96h)>100mg a.i./L;日本鵪鶉LD50(168h)>1 000mg a.i./kg·bw;對(duì)意大利蜜蜂急性攝入毒性LC50(48h)>2 000mg a.i./L,接觸毒性LD50(48h)>100μg a.i./蜂;對(duì)家蠶LC50(96h)>2 000mg a.i./L;對(duì)魚,鳥,蜜蜂,家蠶低毒。
專利及登記信息:
農(nóng)藥登記證號(hào):PD20184026
武漢科諾生物科技股份有限公司已獲得“1千億活芽孢每克多粘類芽孢桿菌原粉的制備方法”(ZL 201010147899.1)
武漢科諾生物科技股份有限公司已獲得“多粘類芽孢桿菌KN-03及其培養(yǎng)方法和用途”(ZL 201410777999.0)
武漢科諾生物科技股份有限公司已申請(qǐng)“一種多粘類芽孢桿菌發(fā)酵廢液的回收利用方法”(申請(qǐng)?zhí)?201711454635.9)
登記對(duì)象:
黃瓜細(xì)菌性角斑病,160~200mL/667m2,在角斑病發(fā)病初期噴霧,每隔7~10d,連用2~3次;
小麥赤霉病,400~600mL/667m2,在小麥抽穗揚(yáng)花初期噴霧,施藥2次,每7d 1次;
番茄青枯病,2~3 L/667m2,在發(fā)病初期灌根,用水量根系大小以澆透為原則;
西瓜枯萎病,3~4 L/667m2,在發(fā)病初期灌根,用水量根系大小以澆透為原則。