樊丹君，李晨怡，陳 進(jìn)，葉子青

浙江醫(yī)院干部保健科，杭州 310013

腦梗死是一種受遺傳因素和環(huán)境因素共同影響的具有高發(fā)病率、高致殘率、高醫(yī)療費(fèi)的常見(jiàn)老年病之一。人類(lèi)一些基因多態(tài)性與腦梗死的遺傳易感性相關(guān)[1-4]。已有研究顯示花生四烯酸細(xì)胞色素P450(cytochrome P450 proteins，CYP)代謝基因如EPHX2 G806A可能與腦梗死的發(fā)生相關(guān)[2]，而關(guān)于另一重要參與花生四烯酸代謝的CYP2C19基因與腦梗死研究較少。本研究采用基因芯片技術(shù)對(duì)本院收集的老年人 CYP2C19 基因rs4244285、rs4986893兩個(gè)單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)進(jìn)行基因分型，以探討CYP2C19基因多態(tài)性與老年人腦梗死的相關(guān)性，并為臨床提供個(gè)體化用藥。

對(duì)象和方法

對(duì)象腦梗死組入組標(biāo)準(zhǔn)：選取2012年1月至2016年1月入住浙江醫(yī)院符合中華醫(yī)學(xué)神經(jīng)病學(xué)分會(huì)腦血管學(xué)組制定新發(fā)的急性缺血性腦卒中患者，病因?qū)W為動(dòng)脈粥樣硬化血栓型和小動(dòng)脈病變型，其中男50例、女22例，年齡76～96歲，平均(84.48±4.02)歲。對(duì)照組入組標(biāo)準(zhǔn)：選取同期年齡大于65歲，與病例組年齡、性別匹配的，經(jīng)病史、體格檢查、頭顱CT和/或頭顱核磁共振均無(wú)腦梗死、冠心病的住院體檢者，其中男56例、女21例，年齡65～92歲，平均(83.96±5.09)歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：既往有心房顫動(dòng)、腫瘤、嚴(yán)重肝腎疾病、嚴(yán)重感染等病史。

臨床資料評(píng)估所有研究對(duì)象傳統(tǒng)腦血管危險(xiǎn)因素：性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)(body mass index，BMI)、吸煙史、空腹血糖、總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、三酰甘油、C反應(yīng)蛋白、同型半胱氨酸、血壓(24 h動(dòng)態(tài)血壓中平均收縮壓、平均舒張壓)。

CYP2C19基因檢測(cè)采集空腹外周靜脈血2 ml，EDTA抗凝，分離血漿，按照上海百傲科技有限公司生產(chǎn)的試劑盒使用說(shuō)明，提取樣本DNA、PCR擴(kuò)增、雜交顯色，應(yīng)用Baio生物芯片識(shí)讀儀進(jìn)行圖像掃描、數(shù)據(jù)分析，輸出檢測(cè)結(jié)果。

結(jié) 果

臨床資料兩組人群年齡、性別、BMI、吸煙率、收縮壓、舒張壓、血糖、總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、三酰甘油、同型半胱氨酸、C反應(yīng)蛋白等差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表1)。

CYP2C19基因多態(tài)性采用擬合優(yōu)度檢驗(yàn)?zāi)X梗死組(χ2=6.138，P=0.189)和對(duì)照組(χ2=4.684，P=0.321)均符合Hardy-Weinberg平衡，即入組研究對(duì)象有群體代表性。兩組rs4244285 GG型(χ2=4.766，P=0.029)、A等位基因分布(χ2=4.695，P=0.030)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但兩組GA型、AA型頻率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。而rs4986893 不同基因型和等位基因分布差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表2)。

CYP2C19基因多態(tài)性與腦梗死的相關(guān)性腦梗死作為因變量，Logistics回歸分析調(diào)整性別、年齡、BMI、吸煙史、收縮壓、舒張壓、血糖等，分析患病風(fēng)險(xiǎn)：rs4244285多態(tài)位點(diǎn)加性模型(AA比GG：OR=2.564，95%CI=1.181～5.566，P=0.017)、顯性模型(AA/AG比GG：OR=2.763，95%CI=1.343～5.685，P=0.006)、隱性模型(AA比AG/GG：OR=2.331，95%CI=0.788～6.889，P=0.126)提示攜帶rs424485 A等位基因的人群在多態(tài)位點(diǎn)加性模型及顯性模型中患腦梗死風(fēng)險(xiǎn)增加(P<0.05)，隱性模型下患病風(fēng)險(xiǎn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。rs4986893多態(tài)位點(diǎn)顯性模型(AA/AG比GG：OR=1.773，95%CI=0.765～4.108，P=0.182)，因兩組中均未檢測(cè)到rs4986893 AA，無(wú)法分析加性模型、隱性模型的患病風(fēng)險(xiǎn)。

表1 兩組一般資料比較Table 1 General data of two groups

1 mmHg=0.133 kPa

表2 兩組CYP2C19等位基因及基因型頻數(shù)比較[n(%)]Table 2 Frequencies of CYP2C19 polymorphisms in two groups[n(%)]

-：表示未檢測(cè)到該基因型

-：rs4986893 AA genotype was not detected

討 論

CYP2C19是細(xì)胞色素P450家族里CYP2亞家族中的重要藥物代謝基因之一，定位于10號(hào)染色體q24區(qū)，包含9個(gè)外顯子和5個(gè)內(nèi)含子，編碼490個(gè)氨基酸。rs4244285、rs4986893兩個(gè)單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)是東亞人群最常見(jiàn)的突變點(diǎn)，這兩個(gè)單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)堿基發(fā)生G→A突變產(chǎn)生的終止密碼子使蛋白合成提前終止，從而降低了該酶活性。

本研究腦梗死組與對(duì)照組rs4244285等位基因頻率A、G分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與Gu等[5]研究結(jié)果一致。腦梗死組GG型頻率顯著低于對(duì)照組，與Gu等[5]研究結(jié)果一致。腦梗死組rs4244285 GA、AA型頻率與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而Gu等[5]研究報(bào)道腦梗死rs4244285 GA、AA基因型顯著高于對(duì)照組，可能不同地區(qū)CYP2C19基因分布不同。兩組rs4986893基因型、等位基因差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與Gu等[5]研究不一致，可增加樣本量進(jìn)一步研究。本研究Logistic回歸分析調(diào)整年齡、性別、BMI、吸煙、血壓等危險(xiǎn)因素后，rs4244285位點(diǎn)攜帶A等位基因患腦梗死風(fēng)險(xiǎn)增加，提示CYP2C19基因多態(tài)性可增加老年人患腦梗死的風(fēng)險(xiǎn)，均與Gu等[5]研究相似。目前CYP2C19基因多態(tài)性影響老年腦梗死的具體機(jī)制尚不清楚，可能與花生四烯酸代謝相關(guān)?；ㄉ南┧峤?jīng)細(xì)胞色素P450(如CYP2C19)途徑代謝后的主要產(chǎn)物為表氧二十碳三烯酸(epoxyeicosatrienoic acid，EET)。EET是一種內(nèi)皮源性超極化因子，通過(guò)激活鉀離子、鈣離子通道，使內(nèi)皮下的平滑肌細(xì)胞產(chǎn)生超極化而產(chǎn)生擴(kuò)血管作用，同時(shí)EET還通過(guò)轉(zhuǎn)錄因子、核因子-κB和κB激酶抑制白細(xì)胞黏附到血管壁，因此EET具有抗高血壓、抗炎、抗凝、抗動(dòng)脈粥樣硬化作用，而CYP2C19功能缺失基因型使其編碼的酶活性下降，經(jīng)其代謝的EET水平隨之下降，導(dǎo)致炎癥增加、微循環(huán)障礙等，從而增加心腦血管病的發(fā)生率[6-7]。

氯吡格雷是老年人腦梗死常用的二級(jí)預(yù)防用藥，而CYP2C19是將其轉(zhuǎn)化為有活性物質(zhì)的關(guān)鍵藥物代謝酶。已有研究表明攜帶CYP2C19*2(rs4244285 681A>G)和/或CYP2C19*3(rs4986893 636A>G)的患者因基因突變導(dǎo)致功能下降，從而降低有效藥物濃度，以致發(fā)生氯吡格雷抵抗不能達(dá)到滿(mǎn)意的抗血小板聚集[8-9]。因此對(duì)于需氯吡格雷治療的腦梗死或服用氯吡格雷期間仍發(fā)生腦梗死者，如果有條件建議行基因檢測(cè)。2010年美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局黑框警告對(duì)于攜帶CYP2C19*2和/或CYP2C19*3并經(jīng)證實(shí)氯吡格雷代謝不良的患者，建議加大氯吡格雷的劑量或改用其他抗血小板藥物。

綜上，本研究發(fā)現(xiàn)CYP2C19基因多態(tài)性與老年人腦梗死患病風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)，有待今后進(jìn)行大樣本、多中心和前瞻性研究進(jìn)一步驗(yàn)證。