趙 麗，陳曉英

（西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，西藏 拉薩 850009）

西藏農(nóng)區(qū)黃牛、奶牛、犏牛、牦牛飼養(yǎng)管理較為粗放，且種植結(jié)構(gòu)較為單一[1]，農(nóng)牧民一般以補(bǔ)充青稞作為母牛產(chǎn)奶期的補(bǔ)充日糧，缺乏專用精料補(bǔ)充料的飼喂。此外，因農(nóng)牧民過度擠奶制作酥油而導(dǎo)致犢牛整日處于饑餓狀態(tài)。犢牛基本生長營養(yǎng)需求得不到滿足，導(dǎo)致犢牛營養(yǎng)不良和不平衡，機(jī)體代謝機(jī)能紊亂和免疫力嚴(yán)重下降[2]，使病原菌侵入并迅速擴(kuò)繁，加之基層獸醫(yī)力量薄弱，最終導(dǎo)致犢牛死亡。筆者就西藏農(nóng)區(qū)2015年至今的黃牛、奶牛、犏牛、牦牛死亡的犢牛展開調(diào)查，并加以診斷分析，以期為防治西藏農(nóng)區(qū)黃牛、奶牛、犏牛、牦牛犢牛的死亡提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗試劑：營養(yǎng)瓊脂粉、酵母浸粉均購自北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司；胰蛋白胨購自洛陽宏觀生物科技有限公司；腸桿菌科細(xì)菌生化編碼鑒定管、非發(fā)酵細(xì)菌生化編碼鑒定管均購自杭州微生物試劑有限公司。

1.1.2 調(diào)查對象：在2015年5月—2018年8月，西藏拉薩市、山南市、日喀則市、昌都市、林芝市農(nóng)區(qū)死亡的黃牛、奶牛、犏牛、牦牛的犢牛。

1.1.3 待檢病料：現(xiàn)場解剖瀕死犢?；蚱蕶z死亡時間不長的犢牛，無菌采集其心、肝、脾、肺、腎、血液、糞便等樣本539頭份（冷凍箱保存），并取死亡犢牛糞便539頭份快速送至西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所進(jìn)行病原學(xué)檢測與球蟲蟲卵檢查。

1.1.4 待檢血清：隨機(jī)采集身體虛弱犢牛、發(fā)病犢牛、瀕死犢牛血液樣本539頭份。室溫下傾斜放置30 min，3 500 r/min離心 20 min，分離血清，于-20℃保存，送至西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所進(jìn)行血清學(xué)檢測。

表1 西藏農(nóng)區(qū)犢牛發(fā)病與死亡情況調(diào)查結(jié)果

表2 西藏農(nóng)區(qū)犢牛血液、組織病原分離結(jié)果

表3 西藏農(nóng)區(qū)犢牛糞便球蟲蟲卵檢測結(jié)果

1.2 試驗方法

1.2.1 流行病學(xué)調(diào)查：設(shè)計編制統(tǒng)一的犢牛死亡情況流行病學(xué)調(diào)查表格，由各縣農(nóng)牧局或獸防站專業(yè)技術(shù)人員到各村跟蹤調(diào)查，對鄉(xiāng)鎮(zhèn)獸醫(yī)技術(shù)人員和牧戶進(jìn)行詢問，填寫調(diào)查表，并找各村駐村工作隊或到鄉(xiāng)鎮(zhèn)獸防站查閱近期犢牛死亡情況登記資料。調(diào)查內(nèi)容包括統(tǒng)計死亡時間、犢牛死亡地點、疫苗及免疫時間、飼養(yǎng)管理和下派技術(shù)人員等信息[3]。

1.2.2 病原學(xué)檢測：取死亡犢牛組織病料心、肝、脾、肺、腎、血液等樣本，分別接種到普通培養(yǎng)基（肉湯培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基）、鑒別培養(yǎng)基（沙門、志賀菌屬瓊脂培養(yǎng)基，麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基）、生化鑒別培養(yǎng)基（糖發(fā)酵管、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水、尿素瓊脂、醋酸鉛瓊脂）分別進(jìn)行培養(yǎng)，再取優(yōu)勢菌落進(jìn)行純化培養(yǎng)，取純培養(yǎng)物進(jìn)行分離菌的生化鑒定，確定導(dǎo)致犢牛死亡的主要細(xì)菌病[3-4]。

1.2.3 病死犢牛糞便球蟲蟲卵檢查：取死亡犢牛糞便，采用飽和食鹽漂浮法做球蟲蟲卵檢查[3，5]。

1.2.4 血清學(xué)檢測：取收集的瀕死犢牛的血清，按照檢測試劑或試劑盒說明書，采用ELISA、凝集試驗等方法檢測口蹄疫、牛弓形體病等血清抗體水平。

2 結(jié)果

2.1 發(fā)病與死亡情況調(diào)查結(jié)果

犢牛發(fā)病與死亡情況調(diào)查結(jié)果見表1。調(diào)研的農(nóng)區(qū)犢牛病死率為9.34%，其中以昌都市犢牛死亡率為最高（10.10%）、拉薩市的犢牛死亡率為最低（8.50%）。

2.2 大腸埃希菌和沙門菌分離鑒定結(jié)果

對死亡犢牛的血液、組織病源進(jìn)行大腸埃希菌和沙門菌分離鑒定，結(jié)果如表2所示，西藏農(nóng)區(qū)犢牛血液、組織樣本大腸埃希菌平均陽性率為48.05%，沙門菌平均陽性率為31.54%。

2.3 糞便球蟲蟲卵檢測結(jié)果

對死亡犢牛的糞便球蟲蟲卵進(jìn)行檢測，顯微鏡視野下觀察到球蟲蟲卵視為陽性。如表3所示，犢牛糞便球蟲蟲卵檢測表明，農(nóng)區(qū)球蟲蟲卵平均陽性率為5.75%（31/539），且以林芝市球蟲蟲卵陽性率8.65%（9/104）為最高，山南市球蟲蟲卵陽性率3.77%（4/106）為最低。

2.4 血清抗體的檢測結(jié)果

瀕死犢牛的血清經(jīng)ELISA、凝集試驗等方法檢測口蹄疫、牛弓形體病等血清抗體水平均衡，且均在98%及以上。

3 討論

該調(diào)查研究初步發(fā)現(xiàn)，引起犢牛死亡的主要原因是農(nóng)牧民以追求酥油產(chǎn)量為目標(biāo)，而無限制地擠奶制作酥油，導(dǎo)致犢牛整日處于饑餓狀態(tài)，不能滿足犢牛基本生長需要。此外，因牧民沒有給家畜補(bǔ)飼的習(xí)慣，母牛懷孕后期，胎牛的迅速生長和妊娠母牛的基本營養(yǎng)需要，致使妊娠母牛無法補(bǔ)充充足的營養(yǎng)，最終導(dǎo)致犢牛初生重偏低、免疫力低下，以及生產(chǎn)母牛奶水不足。犢牛營養(yǎng)不良和不平衡導(dǎo)致其機(jī)體代謝機(jī)能紊亂和免疫力下降，病原菌侵入并迅速擴(kuò)繁，最終導(dǎo)致犢牛死亡。此外，鑒于研究經(jīng)費(fèi)和基層技術(shù)力量有限，該調(diào)查研究沒有進(jìn)一步涉及母源性抗體的檢測，即犢牛是否獲得有效的母源抗體，這些需進(jìn)一步進(jìn)行調(diào)查研究[6-9]。

建議在大型牛場，為有效的預(yù)防和控制犢牛的死亡，主要從以下幾方面著手解決：①加強(qiáng)母牛和犢牛的飼養(yǎng)管理。在母牛懷孕的后期，白天自由放牧，晚上給予一定量的全價的精料補(bǔ)飼，并在圈舍內(nèi)掛舔磚補(bǔ)充礦物質(zhì)元素和微量元素，盡可能滿足妊娠母牛更多更豐富的基本的營養(yǎng)需要，以期獲得初生重更大、發(fā)育良好和免疫能力更強(qiáng)的犢牛；②給新生犢牛提供舍溫暖干燥的小環(huán)境牛舍、保證圈舍的光線充足、墊草的充分，并且保持其生存環(huán)境的通風(fēng)換氣良好，盡可能地做到專人護(hù)理等；③加強(qiáng)疫病控制，做好免疫、驅(qū)蟲和凈化工作，保證母牛健康無病，防止傳染病、寄生蟲病等造成母牛產(chǎn)弱犢、死犢等；④及時發(fā)現(xiàn)和治療母牛非傳染性疾病如無乳癥、少乳癥、乳腺炎、子宮內(nèi)膜炎等，減少擠奶量，防止?fàn)倥ｐI死或營養(yǎng)缺乏；⑤一旦發(fā)現(xiàn)犢牛發(fā)病，及時進(jìn)行診斷，要對癥治療，減少和控制犢牛死亡。而對于普通農(nóng)牧民養(yǎng)殖戶，要給予妊娠母牛更豐富的飼草料，以滿足胎牛發(fā)育和母?；緺I養(yǎng)需求；對產(chǎn)后母牛，減少擠奶量，盡可能多地給犢牛哺乳提高其免疫力而減少犢牛的發(fā)病率和死亡率。