古 靜,黨安坤,蘭鄒然

(1.山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心,山東 濟(jì)南 250022；2.華派生物工程集團(tuán)有限公司,四川 成都 641400)

鴿 I型副黏病毒(Pigeon Paramyxovirus I,PPMV-I),是由禽I型副黏病毒(Avian Paramyxovirus I,APMV-I)流行于鴿群,并突變?yōu)檫m應(yīng)鴿群的新城疫病毒,通過F基因分析,顯示出是APMVI的抗原變異株,因此命名為鴿 I型副黏病毒(PPMV-I)[1]。該病毒引起的鴿新城疫在鴿群傳播迅速、發(fā)病急,發(fā)病率和死亡率極高,發(fā)病鴿以拉稀和出現(xiàn)神經(jīng)癥狀為特征,對(duì)鴿危害大,對(duì)養(yǎng)鴿業(yè)影響嚴(yán)重。了解該病的致病機(jī)理、診斷技術(shù)和防治措施,為預(yù)防和控制該病具有一定的理論指導(dǎo)意義。

1 歷史概況

Hanson和Sinha于1952年在Poultry Science上報(bào)道過一種鴿傳染病,與雞新城疫的臨床特點(diǎn)類似[2]。該病直到1978年才被伊拉克的學(xué)者經(jīng)過一系列血清學(xué)及分子研究確認(rèn)為鴿I型副黏病毒感染[3],并為大多數(shù)學(xué)者所接受。后續(xù)調(diào)查發(fā)現(xiàn),雞新城疫的大流行與鴿新城疫存在一定關(guān)系,全球曾有過4次雞新城疫的大流行,其中2次與鴿新城疫有關(guān)。而鴿新城疫的流行高峰發(fā)生在19世紀(jì)80年代早期,鴿新城疫的流行也導(dǎo)致家禽大面積暴發(fā)新城疫,對(duì)養(yǎng)禽業(yè)造成持續(xù)性威脅[4]。

我國1985年首次報(bào)道鴿新城疫,鴿新城疫病毒傳入我國香港,導(dǎo)致57個(gè)鴿場(chǎng)暴發(fā)疫情[5]。由于該病傳播快、流行廣的特點(diǎn),此后該病不斷向廣東及周邊省份擴(kuò)散傳播。至今為止,我國華東、華北、華南等地區(qū)都有該病報(bào)道。隨著養(yǎng)鴿業(yè)的快速發(fā)展,集約化、規(guī)?；潭鹊奶岣?以及賽鴿業(yè)的時(shí)尚化,給鴿新城疫傳播提供了客觀條件,該病也已成為我國養(yǎng)鴿業(yè)的重點(diǎn)防控疫病之一。

2 病原學(xué)

鴿新城疫病毒與雞新城疫病毒同屬于I型副黏病毒,都能凝集雞、鴿的紅細(xì)胞,均導(dǎo)致雞胚全身性出血病變。但PPMV-I粒子與APMV-I有一定的區(qū)別,PPMV-I表面有纖突,有囊膜但未發(fā)現(xiàn)有囊膜顆粒。PPMV-I為單股、負(fù)鏈RNA分子,基因組全長約為15 Kb,PPMV-I從3′到5′編碼6種主要結(jié)構(gòu)蛋白：衣殼蛋白(NP)、磷蛋白(P)、基質(zhì)蛋白(M)、融合蛋白(F)、血凝素 -神經(jīng)氨酸酶(HN)、RNA依賴的RNA聚合酶(L)。

2.1 NP蛋白、P蛋白和L蛋白 NP蛋白、P蛋白和L蛋白參與RNA的轉(zhuǎn)錄和復(fù)制過程。Dortmans等人報(bào)道病毒復(fù)制復(fù)合體(NP、P和L)在決定NDV(PPMV-I)毒力方面發(fā)揮了顯著作用,上述研究人員將無毒PPMV-I株的NP、P、M蛋白和L蛋白與強(qiáng)毒NDV株的NP、P、M蛋白和L蛋白進(jìn)行交換,結(jié)果表明,同時(shí)更換NP、P蛋白和L蛋白對(duì)病毒具有很大的影響,交換后的PPMV-I株的ICPI值由0.10變?yōu)?.03,說明復(fù)合蛋白在決定嵌合病毒毒力方面,不管對(duì)弱毒株還是強(qiáng)毒株都具有重要作用[6]。另一個(gè)試驗(yàn)是利用PPMV-I在雞體內(nèi)傳代。將弱毒PPMV-I分離株在腦內(nèi)接種1日齡雞,進(jìn)行傳代試驗(yàn),隨著傳代次數(shù)的增加,ICPI值增加。病毒在傳到1、3、5代后,其全基因序列與原代病毒基因序列(ICPI值為0.44)相比較,傳代1代后,L蛋白的一個(gè)堿基突變,氨基酸由纈氨酸突變?yōu)楣劝彼?ICPI值為0.43,與原代病毒相比變化不大；傳代第3代后,L蛋白又一個(gè)堿基突變,氨基酸由天冬酰胺突變?yōu)榻z氨酸,ICPI值為0.60；傳代第5代后,除了L蛋白的兩個(gè)堿基突變,還包括P蛋白的一個(gè)單堿基突變,氨基酸由天冬酰胺突變?yōu)樘於彼?ICPI值為0.90,與母代病毒相比明顯增加。通過以上可以得出隨著病毒傳代次數(shù)的增加,L蛋白和P蛋白內(nèi)發(fā)生堿基突變,而病毒毒力也在明顯增強(qiáng)。其后又通過試驗(yàn)驗(yàn)證L蛋白和P蛋白內(nèi)堿基突變對(duì)病毒毒力具有較大的影響,其中三變異(PLL)毒株比雙變異(LL)毒株毒力更強(qiáng)。這些都充分說明復(fù)合蛋白與NDV(PPMV-I)的毒力聯(lián)系在一起,在決定NDV(PPMV-I)毒力方面有重要作用[7]。

2.2 F蛋白 研究發(fā)現(xiàn),PPMV-I的裂解位點(diǎn)發(fā)生了較大變異,19世紀(jì)80年代分離的PPMV-I毒株的裂解位點(diǎn)是112GRQKRF117,而從1991年后F蛋白的裂解位點(diǎn)開始進(jìn)化為112RRQKRF117。1999年,Werner等人測(cè)出毒株裂解位點(diǎn)表現(xiàn)為112RRKKRF117和112RRQKRF117[8]。2002年,Meulenmans測(cè)出的少部分毒株裂解位點(diǎn)開始表現(xiàn)為112RRKKRF117和112RRRKRF117[9]。

盡管多數(shù)PPMV-I毒株均具有新城疫強(qiáng)毒的F基因裂解位點(diǎn),但是其ICPI值和MDT值表現(xiàn)為中毒力和弱毒力。Dortmans等將弱毒力PPMV-I毒株的F基因與1株強(qiáng)毒NDV毒株的F基因交換后,嵌合病毒的毒力相對(duì)于其親代病毒并未發(fā)生顯著變化[7]。Collins等將PPMV-I毒株傳代雞胚數(shù)代后,其毒力增強(qiáng),但其F蛋白的結(jié)構(gòu)并未改變[1]。因此,僅僅通過F裂解位點(diǎn)來判定病毒毒力是不完善的,還應(yīng)該考慮其他因素(如復(fù)合蛋白)對(duì)病毒毒力的影響。

2.3 HN蛋白 HN蛋白是一種多功能的血凝素-神經(jīng)氨酸酶糖蛋白,具有受體識(shí)別、神經(jīng)氨酸酶和融合促進(jìn)活性。HN蛋白長度的不同與基因型有關(guān)：長度為571 aa的基因型有Ⅳ,Ⅴ,Ⅵ型和Ⅶ型；長度為577 aa的基因型有Ⅱ型。有研究發(fā)現(xiàn),HN蛋白長度與NDV毒力有關(guān),長度為616 aa的HN蛋白主要以無活性的前體形式存在,只在弱毒株中發(fā)現(xiàn)；長度為577 aa的HN蛋白,在強(qiáng)、弱毒毒株中都有發(fā)現(xiàn)；長度為571 aa的HN蛋白只在強(qiáng)毒毒株中發(fā)現(xiàn)。PPMV-Ⅰ毒株的HN蛋白長度為571 aa,但是其毒力與基因型為Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ的毒株不一致。因此,用HN蛋白的長度來確定PPMV-I的毒力不準(zhǔn)確[10]。

3 流行病學(xué)

鴿對(duì)PPMV-I極為敏感,不同品種、不同年齡的鴿均會(huì)發(fā)病,母鴿比公鴿易感,乳鴿比種鴿易感。鴿新城疫的流行無明顯季節(jié)性,一年四季均可發(fā)病,但在冬春季節(jié)多發(fā)。目前,世界范圍內(nèi)流行的新城疫的基因型包括Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ型和Ⅷ型,其中Ⅵ型又進(jìn)一步分為VIa-VIg 7個(gè)亞型,而VIb亞型毒株多為鴿源毒株[11]。近年來,在中國出現(xiàn)VIk亞型毒株。2011年,VIk亞型毒株僅出現(xiàn)在中國少數(shù)地區(qū),但是到2012-2014年期間,VIk亞型毒株流行范圍擴(kuò)大。薛聰?shù)仍跂|北地區(qū)分離到兩株VIk亞型毒株,測(cè)其ICPI值和MDT值,顯示兩株VIk亞型毒株的毒力為低毒力,但動(dòng)物試驗(yàn)表明,該毒株對(duì)鴿致病[12]。根據(jù)Dimitrov等研究發(fā)現(xiàn),除了 Rosella/Belgium/4940/08株,其余 VIk亞型毒株均從鴿群中分離[13]。VIk亞型毒株的出現(xiàn)和傳播表明VIb亞型毒株正在進(jìn)化,因此對(duì)鴿群實(shí)施流行病學(xué)監(jiān)測(cè),及時(shí)掌握病毒變異情況和趨勢(shì)是很重要的。

4 診斷與免疫防治

診斷方法分臨床診斷和實(shí)驗(yàn)室診斷,臨床診斷主要通過臨床癥狀和剖檢病變進(jìn)行初步判斷,實(shí)驗(yàn)室診斷如血清學(xué)、病原學(xué)和分子生物學(xué)能進(jìn)一步確診。血清學(xué)診斷如血凝抑制試驗(yàn)和ELISA試劑盒適合基層人員快速診斷。如吳長新等采取病死鴿的泄殖腔拭子用新城疫單抗酶聯(lián)免疫試劑盒能快速、準(zhǔn)確地診斷出鴿新城疫[14]。分子生物學(xué)技術(shù)如PCR方法準(zhǔn)確性好,靈敏度高。如劉小銀等建立的RT-PCR方法可以檢測(cè)中、強(qiáng)毒力新城疫病毒,用此法對(duì)5株鴿I型副黏病毒進(jìn)行檢測(cè),均擴(kuò)增出特異性條帶,證明這5株病毒均屬于中、強(qiáng)毒力[15]。

關(guān)于鴿新城疫的防治,最有效的方法是免疫接種。但至今為止,中國還沒有商品化的鴿新城疫疫苗,大部分鴿場(chǎng)采用雞新城疫疫苗來預(yù)防該病,但由于引起鴿新城疫的病原除了雞源新城疫病毒外,更主要是還有鴿源新城疫病毒,這兩種病毒抗原性有一定差異,致病性也有一定區(qū)別,因此使用雞新城疫疫苗免疫鴿群,雖然具有一定的效果,但是保護(hù)率并不理想。葉賀佳等將研制的鴿新城疫滅活疫苗和自行制備的雞新城疫滅活疫苗分別免疫鴿,用鴿新城疫強(qiáng)毒和雞新城疫強(qiáng)毒交叉攻毒,結(jié)果表明,鴿新城疫滅活疫苗的免疫效果要明顯優(yōu)于雞新城疫滅活疫苗[16]。近幾年,國內(nèi)許多學(xué)者研究鴿新城疫疫苗取得比較好的效果。賀奮義等研制的蜂膠佐劑滅活疫苗注射鴿后180 d仍維持較高抗體水平,在免疫后30、90、180 d用強(qiáng)毒株攻擊,其保護(hù)指數(shù)均為100%[17]。趙振振等研制出專用于預(yù)防鴿新城疫的滅活疫苗VIb-I4免疫鴿,免疫鴿的抗體平均效價(jià)可以達(dá)到7 log2以上,與傳統(tǒng)滅活疫苗相比,用VIb-I4研制的滅活疫苗免疫鴿群后產(chǎn)生的抗體效價(jià)更高,免疫保護(hù)效力更強(qiáng)[18]。

5 展望

目前,鴿新城疫已成為養(yǎng)鴿業(yè)的一種最主要傳染病,在各種鴿群(肉鴿、賽鴿和信鴿)中普遍存在,一旦該病傳入非免疫鴿群,或者免疫效果不好的鴿群,其發(fā)病率和死亡率都比較高。由于目前還沒有有效治療藥物,使用有效疫苗預(yù)防該病是關(guān)鍵。診斷該病的方法較多,關(guān)于快速鑒別診斷鴿新城疫強(qiáng)弱毒株的報(bào)道也不少,但是,當(dāng)鴿場(chǎng)存在雞新城疫病毒和鴿新城疫病毒混合感染時(shí)[19],卻沒有鑒別診斷鴿新城疫病毒和雞新城疫病毒的方法,鑒別診斷方法應(yīng)受到行業(yè)的關(guān)注,加大研究力度,早日為社會(huì)提供鑒別診斷方法。關(guān)于疫苗使用,基于沒有商品化鴿新城疫疫苗,許多鴿場(chǎng)只能使用雞新城疫疫苗來預(yù)防鴿新城疫,然而其免疫效果受到質(zhì)疑,研制出具有良好免疫原性的鴿新城疫疫苗已迫在眉睫,同時(shí)專業(yè)人員已開始關(guān)注,相信不久的將來國內(nèi)會(huì)出現(xiàn)優(yōu)質(zhì)的鴿新城疫專用疫苗。