孟憲科，金煥貴，陳億兵，鄭 楊，李 巖

(黑龍江省農(nóng)藥管理檢定站，黑龍江 哈爾濱 150090)

乙酰甲胺磷，化學(xué)名稱為O，S-二甲基乙?；虼柞０孵ィ菑V譜、高效、低毒有機(jī)磷殺蟲劑，具有胃毒、觸殺、內(nèi)吸作用，并有一賓熏蒸作用。因其毒性低，曾被作為高毒有機(jī)磷農(nóng)藥甲胺磷的替代產(chǎn)廣泛用于蔬菜、茶樹、煙草、果樹、棉花、甘藍(lán)、小麥、水稻、油菜等作物，防治多種咀嚼式、刺吸式口器害蟲和害螨。但殘留檢測發(fā)現(xiàn)，其制劑中有少量甲胺磷存在，同時穩(wěn)定性差，無論是制劑產(chǎn)品還是在作物體內(nèi)的降解能代謝出甲胺磷，會導(dǎo)致農(nóng)產(chǎn)品出現(xiàn)甲胺磷殘留情況。已有如歐盟、新西蘭、巴西等國家地區(qū)對其采取禁用或限用措施。我國對此也已采取措施，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部于2017公告，自2017年8月1日起，撤銷乙酰甲胺磷(包括單劑、復(fù)配制劑)用于蔬菜、瓜果、茶葉、菌類和中草藥材作物的農(nóng)藥登記，自2019年8月1日起，禁止乙酰甲胺磷在蔬菜、瓜果、茶葉、菌類和中草藥材作物上使用。目前登記主要為水稻、玉米、小麥、棉花、煙草等大田作物和衛(wèi)生用藥。

本文就乙酰甲胺磷在東北粳稻上使用不同間隔期的母體及其代謝產(chǎn)物甲胺磷殘留進(jìn)行研究，對乙酰甲胺磷在東北粳稻上的殘留風(fēng)險進(jìn)行評估，為相關(guān)部分制定合理使用準(zhǔn)則提供數(shù)據(jù)參考。

1 田間試驗(yàn)

1.1 試驗(yàn)地點(diǎn) 哈爾濱和長春(長春點(diǎn)田間部分試驗(yàn)由吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)施)

1.2 試驗(yàn)農(nóng)藥 30%乙酰甲胺磷乳油

1.3 試驗(yàn)作物 水稻(粳稻)

1.4 田間試驗(yàn)設(shè)計 30%乳油設(shè)置25個處理(包括各1個空白對照)、3次重復(fù)，75個小區(qū)，每小區(qū)30m2。各處理區(qū)以隔離帶隔離，間隔1.5m以上，保證處理區(qū)內(nèi)外的田水不會串流，水流方向應(yīng)由低劑量流向高劑量方向，單排單灌。施藥劑量設(shè)高、低2檔施藥劑量。低劑量1 012.5g a.i./hm2，高劑量1 518.8g a.i./hm2(約為登記推薦劑量的1.5倍)。用水量均為750kg/hm2(40～50L/667m2)施藥次數(shù)分2、3、4次3檔，用手動噴霧器均勻噴霧，2次施藥間隔期為7～8d(表1)。

表1 乙酰甲胺磷水稻殘留田間試驗(yàn)設(shè)計表

續(xù)表

1.5 田間樣品采集與處理 在收獲期采用隨機(jī)方式采集各小區(qū)樣品，每小區(qū)采集稻穗2～3kg脫?；靹蚩s分后分兩袋中包扎，8h內(nèi)運(yùn)送實(shí)驗(yàn)室-20℃低溫冰柜中。

1.6 實(shí)驗(yàn)室樣品制備 將稻谷的1份在自然條件下陰干至能脫殼為止(陰干室內(nèi)溫度20±3℃，統(tǒng)一確定為14d)，另1份用鼓風(fēng)干燥箱干燥(45±1℃)，使稻谷水分≤14.5%(用LDS-1H電腦水份測定儀測定，統(tǒng)一烘干時間確定為72h)。經(jīng)出糙機(jī)脫殼，分取糙米200g裝入封口容器，放入-20℃低溫冰柜中儲存。

2 分析方法

2.1 主要儀器設(shè)備與試劑 氣相色譜儀：Trace GC Ultra(具FPD檢測器)，美國菲尼根公司；高速萬能粉碎機(jī)：FW100，天津泰斯特公司；高速勻漿機(jī)：T18德國IKA(廣州)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：IKA RV05 basic-B，德國IKA(廣州)；多功能氮吹儀：TTL-DC型，北京同泰聯(lián)公司；電子天平XS205D、PL303/01，德國梅特勒-托利多(上海)。

乙酰甲胺磷標(biāo)準(zhǔn)品純度97.5%，甲胺磷標(biāo)準(zhǔn)品純度98.5%，均由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥檢定所提供；乙腈、丙酮、氯化鈉均為分析純。

2.2 儀器工作條件 HP+50毛細(xì)管柱30m×0.53mm分離。載氣：氮?dú)?，流?0mL/min；Air:105mL/min；H2：90mL/min；程序升溫：50℃，1min；15℃/min，240℃，2min；進(jìn)樣量2.0μL；外標(biāo)法定量(基質(zhì)標(biāo))。PTV進(jìn)樣口，50℃，1min；14.5℃/min，200℃，cleaning，100mL/min。

2.3 樣品前處理 稱取粉碎的糙米樣品10.0g，加5mL水、70.0mL乙腈勻漿2 min，提取液經(jīng)濾紙過濾至100mL具塞量筒，加入2cm高氯化鈉，充分搖勻1min，靜置10min，取上清液35mL到250mL平底燒瓶中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮近干，再氮吹干，用丙酮轉(zhuǎn)移至刻度管，定容至5mL，待測。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線制作 在空白糙米樣品基質(zhì)提取液中分別添加0.01、0.1、0.5、1.0、5.0mg/L的乙酰甲胺磷和甲胺磷，按2.2色譜條件測定并以濃度-峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.5 添加回收率測定 空白樣品添加乙酰甲胺磷標(biāo)準(zhǔn)溶液0.01、0.1、1.0、5.0mg/L，甲胺磷標(biāo)準(zhǔn)溶液0.01、0.05、0.5、5.0mg/L后，依2.3節(jié)方法進(jìn)行處理，按2.2色譜條件進(jìn)行檢測，測定回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

3 結(jié)果與討論

3.1 樣品前處理方法選取 經(jīng)采用多個前處理方法驗(yàn)證，樣品用乙腈勻漿提取，提取液經(jīng)濃縮后用丙酮轉(zhuǎn)移直接檢測，無需采取凈化，在FPD檢測器下無雜質(zhì)干擾，方法快速便捷(圖1、2、3)。

圖3 低劑量4次施藥，間隔期45d樣品色譜圖

3.2 基質(zhì)效應(yīng)影響 分別用丙酮、空白糙米樣品基質(zhì)提取液配置成0.01、0.1、0.5、1.0、5.0mg/L的乙酰甲胺磷和甲胺磷標(biāo)準(zhǔn)液，依次進(jìn)樣。分別以乙酰甲胺磷和甲胺磷的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，定量色譜峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性方程與相關(guān)系數(shù)(表2)。參照Cosetti等以基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線和純?nèi)軇?biāo)準(zhǔn)曲線的斜率比值作為評價基質(zhì)效應(yīng)參數(shù)的方法，(以Rs計。Rs=1，無基質(zhì)效應(yīng)；Rs<1，存在基質(zhì)抑制效應(yīng)；Rs>1，存在機(jī)制增強(qiáng)效應(yīng))，從表2計算可知，糙米空白基質(zhì)中對乙酰甲胺磷存在明顯的增強(qiáng)效應(yīng)，對甲胺磷無基質(zhì)效應(yīng)。因此，本實(shí)驗(yàn)對乙酰甲胺磷和甲胺磷混合標(biāo)準(zhǔn)液采取基質(zhì)配制。

在空白糙米粉碎樣品中添加不同濃度乙酰甲胺磷和甲胺磷溶液，按照2.2色譜條件進(jìn)行測定，得到乙酰甲胺磷和甲胺磷最低檢出濃度均為0.01mg/kg。

表2 乙酰甲胺磷和甲胺磷在溶劑和糙米空白中的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程

3.3 回收率與精密度 空白樣品添加乙酰甲胺磷標(biāo)準(zhǔn)溶液0.01、0.1、1.0、5.0mg/L，甲胺磷標(biāo)準(zhǔn)溶液0.01、0.05、0.5、5.0mg/L后，依樣品分析步驟測定，得本方法的添加回收率：乙酰甲胺磷為82.4%～89.1%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為6.61%～9.76%；甲胺磷為78.7%～91.8%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.72%～14.1%。滿足乙酰甲胺磷和代謝物甲胺磷的殘留檢測要求。

3.4 乙酰甲胺磷與代謝物甲胺磷在不同間隔期糙米中的殘留 哈爾濱和長春兩個試驗(yàn)點(diǎn)間隔期60d，2～4次施藥的，無論是低劑量和高劑量處理(包括陰干樣品、烘干樣品)糙米中乙酰甲胺磷和甲胺磷殘留量均<0.01mg/kg。45d間隔期，高劑量2～4次不同施藥次數(shù)處理：陰干樣品乙酰甲胺磷殘留量為0.069～0.185mg/kg，甲胺磷殘留量為0.034 5～0.082 5mg/kg；烘干樣品乙酰甲胺磷殘留量為0.040 2～0.145mg/kg，甲胺磷殘留量為0.013 7～0.062 3mg/kg。30d間隔期，高劑量不同施藥次數(shù)施藥處理：陰干樣品乙酰甲胺磷殘留量為0.131～0.816mg/kg，甲胺磷殘留量為0.078 9～0.264mg/kg；烘干樣品乙酰甲胺磷殘留量為0.134～1.02mg/kg，甲胺磷殘留量為0.049 5～0.251mg/kg。15d間隔期，高劑量不同施藥次數(shù)高劑量處理：陰干樣品乙酰甲胺磷殘留量為0.211～1.00mg/kg，甲胺磷殘留量為0.069 2～0.250mg/kg。烘干樣品乙酰甲胺磷殘留量為0.082 3～0.436mg/kg，甲胺磷殘留量為0.020 5～0.129mg/kg。(表4)。

表3 乙酰甲胺磷與甲胺磷添加回收率和精密度

表4 乙酰甲胺磷及代謝物甲胺磷在不同間隔期水稻上的殘留檢測結(jié)果表

續(xù)表

4 結(jié)論與討論

本實(shí)驗(yàn)研究建立了采用氣相色譜測定水稻糙米中乙酰甲胺磷與甲胺磷殘留量的分析方法。乙酰甲胺磷與甲胺磷最低檢出濃度0.01mg/kg。乙酰甲胺磷糙米回收率在82.4%～89.1%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為6.61%～9.76%；甲胺磷糙米回收率在78.7%～91.8%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.72%～14.1%。方法快捷、重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確度高，精密度和檢出限均可滿足該殘留分析需要。

根據(jù)乙酰甲胺磷在水稻上獲得登記的GAP數(shù)據(jù)，即推薦施藥量30%乳油登記的1.5倍，施藥2～4次的殘留試驗(yàn)，結(jié)果表明：東北粳稻間隔期30d以上的，乙酰甲胺磷及其代謝物甲胺磷在水稻上的殘留量均低于目前我國乙酰甲胺磷和甲胺磷在水稻上的殘留限量1.0mg/kg和0.5mg/kg的標(biāo)準(zhǔn)，能夠滿足水稻生產(chǎn)的質(zhì)量安全。

特別鳴謝：本試驗(yàn)得到農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥檢定所朱光艷、龔永研究員的技術(shù)指導(dǎo)及吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)資環(huán)學(xué)院逯忠斌教授的協(xié)助，在此一并表示感謝！