◎ 蘇佩冰，陳亞波，梁梅娟

（中山市食品藥品檢驗(yàn)所，廣東 中山 528437）

全自動(dòng)免疫熒光分析儀（Mini VIDAS）是用酶熒光化析技術(shù)（ELFA）通過固相吸附器，用已知抗體來捕捉目標(biāo)生物體，然后以帶熒光的酶聯(lián)抗體再次結(jié)合，經(jīng)充分沖洗后，通過激發(fā)光源檢測(cè)，即能自動(dòng)讀出發(fā)光的陽性標(biāo)本，其優(yōu)點(diǎn)是檢測(cè)速度快，靈敏度高，無風(fēng)險(xiǎn)[1]。

Mini VIDAS能對(duì)食品及環(huán)境中的沙門氏菌屬、葡萄球菌腸毒素檢測(cè)、大腸桿菌O157、單核增生李斯特菌、李斯特菌屬、彎曲菌屬等常見致病性細(xì)菌進(jìn)行快速篩檢，特別是對(duì)食品中李斯特菌和沙門氏菌的檢測(cè)和鑒定結(jié)果比較成熟，已先后被美國FDA、AOAC、USDA等部門認(rèn)可[2]。

隨著消費(fèi)者對(duì)食品衛(wèi)生質(zhì)量要求的日趨重視，傳統(tǒng)的檢測(cè)方法由于手續(xù)繁瑣、時(shí)間過長(zhǎng)，跟不上形勢(shì)發(fā)展的要求[3]。本實(shí)驗(yàn)室對(duì)Mini VIDAS檢測(cè)食品中沙門氏菌與傳統(tǒng)國家標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行了比較，結(jié)果表明Mini VIDAS法檢測(cè)食品沙門菌較常規(guī)法敏感性、特異性較高，用其檢測(cè)為陰性的樣品能很快做出非沙門菌的判斷，比常規(guī)法可提前2～3 d，其檢測(cè)為陽性的樣品均得到常規(guī)方法的證實(shí)，未發(fā)現(xiàn)假陽性結(jié)果。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品

熟肉制品80份，河粉、豆腐、蛋制品各50份，共230份樣品。

1.1.2 培養(yǎng)基

緩沖蛋白胨水（BPW）、四硫磺酸鈉煌綠（TTB）增菌液、亞硒酸鹽胱氨酸（SC）增菌液、亞硫酸鉍（BS）瓊脂、三糖鐵（TSI）瓊脂、賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基等均（北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司）；沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基（法國科瑪嘉公司）。

1.1.3 試劑

API20E生化鑒定試劑盒及配套試劑（法國生物梅里埃公司）、沙門菌診斷血清（寧波天潤生物藥業(yè)有限公司）、 Mini VIDAS相關(guān)試劑（法國生物梅里埃公司）。

1.1.4 儀器

Mini VIDAS，購于法國生物梅里埃公司；生化培養(yǎng)箱，購于賓得亞太（香港）有限公司；高壓滅菌器，購于日本Hirayama公司。

1.1.5 對(duì)照菌種

鼠傷寒沙門氏菌（ATCC14028）、大腸埃希氏菌（ATCC8099）、枸椽酸桿菌（ATCC 8090），均購于美國Microbiologics ATCC；銅綠假單胞菌[CMCC（B）10104]購于環(huán)凱（廣州微生物保藏中心）。

1.2 方法

1.2.1 Mini VIDAS

①取25 g樣品接種到225 mL緩沖蛋白胨水中，（36±1）℃培養(yǎng)16～20 h。②取0.1 mL培養(yǎng)物接種至10 mL SX2肉湯中，（41.5±1）℃培養(yǎng)22～26 h。③取1 mL增菌液沸水浴加熱15 min滅活，用VIDAS SLM試劑盒上機(jī)檢測(cè)。④陰性結(jié)果直接報(bào)告，陽性結(jié)果按常規(guī)方法確證。

1.2.2 常規(guī)培養(yǎng)法

監(jiān)控系統(tǒng)的主從站通訊即為S7-200 PLC與各變頻器之間的通訊，主從站的通訊是本系統(tǒng)設(shè)計(jì)的核心工作。該部分在通訊上采用RS-485兩線制主從通訊連接方式。單一的RS-485通訊鏈路最多可掛接32個(gè)節(jié)點(diǎn)，除去作為通訊主機(jī)用的S7-200 PLC，從站所接入的變頻器理論上最多可達(dá)31臺(tái)之多[3]。但用戶可根據(jù)變頻器的工作狀態(tài)實(shí)時(shí)性需求，自行選擇監(jiān)控對(duì)象的數(shù)量，變頻器臺(tái)數(shù)越少，輪詢所用時(shí)間越短，系統(tǒng)實(shí)時(shí)性越高；反之亦然[4]。

按照GB 4789.4-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)》執(zhí)行。取25 g樣品接種到225 ml緩沖蛋白胨水中，（36±1）℃培養(yǎng)8～18 h。取1 mL培養(yǎng)物接種10 mL TTB和10 mL SC中，TTB在（42±1） ℃ 培 養(yǎng)18～24 h，SC在（36±1） ℃ 培 養(yǎng)18～24 h。然后按標(biāo)準(zhǔn)在選擇性平板上劃板，挑取可疑菌在NA平板上劃線純化，進(jìn)一步做生化鑒定和血清鑒定[4]。

1.2.3 結(jié)果評(píng)價(jià)

常規(guī)培養(yǎng)法為對(duì)照，評(píng)價(jià)Mini VIDAS檢測(cè)結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 Mini VIDAS法與常規(guī)培養(yǎng)法沙門氏菌的陽性檢出數(shù)

采用Mini VIDAS法和常規(guī)培養(yǎng)法對(duì)230份樣品進(jìn)行平行檢測(cè)，兩種方法均檢出沙門氏菌陽性樣品11份，且兩者檢出的樣品一致。Mini VIDAS法檢測(cè)的230份樣品中，無假陽性樣品，見表1。

表1 Mini VIDAS法與常規(guī)培養(yǎng)法檢出沙門氏菌陽性數(shù)表

2.2 Mini VIDAS法與常規(guī)培養(yǎng)法檢測(cè)結(jié)果比較

表2 Mini VIDAS法與常規(guī)培養(yǎng)法檢測(cè)結(jié)果比較表

2.3 Mini VIDAS法檢測(cè)沙門氏菌及其他非沙門氏菌的交叉反應(yīng)檢測(cè)試驗(yàn)

用Mini VIDAS法和常規(guī)培養(yǎng)法對(duì)鼠傷寒沙門氏菌（ATCC14028）、沙門氏菌陽性分離株①、沙門氏菌陽性分離株②、沙門氏菌陽性分離株③、大腸埃希氏菌（ATCC 8099）、銅綠假單胞菌[CMCC（B）10104]、枸椽酸桿菌（ATCC 8090）進(jìn)行交叉反應(yīng)檢測(cè)試驗(yàn)所獲結(jié)果完全一致，未見異常。

2.4 部分Mini VIDAS法檢測(cè)沙門氏菌陽性樣品的證實(shí)

對(duì)Mini VIDAS法檢測(cè)結(jié)果的部分陽性樣品的SX2肉湯增菌液進(jìn)行劃線分離，按常規(guī)方法重新鑒定，結(jié)果證實(shí)其檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，未發(fā)現(xiàn)假陽性，見表3。

表3 部分Mini VIDAS法檢測(cè)沙門氏菌陽性樣品的證實(shí)表

3 討論

本研究采用Mini VIDAS法和常規(guī)培養(yǎng)法檢測(cè)同時(shí)檢測(cè)230份不同來源的樣品。結(jié)果顯示，Mini VIDAS法沒有假陽性及假陰性。表明Mini VIDAS法檢測(cè)出來的陰性結(jié)果完全可靠，可直接報(bào)告為檢測(cè)結(jié)果陰性。Mini VIDAS法可在48 h左右獲得陰性結(jié)果，比常規(guī)培養(yǎng)法法節(jié)省至少48 h，大大地提高了檢測(cè)效率。另外，本試驗(yàn)由于樣品量有限，雖然這230份樣品中沒有出現(xiàn)假陽性結(jié)果，但不能排除出現(xiàn)假陽性的情況。因此，要報(bào)告檢測(cè)結(jié)果陽性需經(jīng)常規(guī)方法證實(shí)。

沙門氏菌在世界各國食源性細(xì)菌感染食物中毒中占據(jù)著重要位置[5]。因此，世界衛(wèi)生組織明確規(guī)定沙門氏菌為食品衛(wèi)生必檢項(xiàng)目之一，但國家標(biāo)準(zhǔn)方法采用的常規(guī)培養(yǎng)法雖結(jié)果準(zhǔn)確可靠，卻存在操作繁瑣、工作量大、耗時(shí)長(zhǎng)（一般需要5～6 d）等缺點(diǎn)[6]。

法國生物梅里埃公司生產(chǎn)的Mini VIDAS功能強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單、結(jié)果可靠，且均有獨(dú)特創(chuàng)新的全自動(dòng)系統(tǒng)，參數(shù)可不斷更新，目前已被美國公職分析化學(xué)家協(xié)會(huì)AOAC及FDA、USDA等官方機(jī)構(gòu)所認(rèn)可。通過本次試驗(yàn)所獲230個(gè)數(shù)據(jù)，我們認(rèn)為其作為一種常規(guī)的快速檢測(cè)手段是可以被接受的。另外，除了檢測(cè)食品中沙門氏菌外，該儀器目前已具備了檢測(cè)食品中單核細(xì)胞增生李斯特氏菌、埃希氏大腸桿菌0157：H7、空腸彎曲菌、葡萄球菌腸毒素等功能，隨著其功能范圍的不斷擴(kuò)大，認(rèn)為其應(yīng)用價(jià)值必將有進(jìn)一步的提高。