◎ 曹 雪，李厚標(biāo)，李少軍，莊澤龍，鄭梅珍，李昆朋

（福建省國鼎檢測(cè)技術(shù)有限公司，福建 泉州 362000）

氯蟲苯甲酰胺[1]是美國杜邦公司開發(fā)出來的一類高效低毒的鄰甲酰氨基苯甲酰胺類殺蟲劑，主要作用于昆蟲魚尼丁受體而表現(xiàn)出殺蟲活性。蟲酰肼是美國羅門哈斯公司生產(chǎn)的高效低毒的雙酰肼類昆蟲生長調(diào)節(jié)劑型殺蟲劑，能夠誘導(dǎo)鱗翅目昆蟲提前成熟，并在短時(shí)間內(nèi)停止進(jìn)食而饑餓死亡。這兩種農(nóng)藥在我國水果和蔬菜的生產(chǎn)中均得到了廣泛應(yīng)用，氯蟲苯甲酰胺和蟲酰肼在水果、蔬菜中的殘留量是人們關(guān)注的焦點(diǎn)，本文針對(duì)這兩種農(nóng)藥在水果蔬菜中的殘留問題建立了檢測(cè)分析方法。

1 材料與方法

1.1 試劑耗材

水為GB/T 6682-2008[2]規(guī)定的一級(jí)水，乙腈（德國SccBayer，色譜純），正己烷（德國SccBayer，色譜純），甲醇（德國SccBayer，色譜純），甲酸（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，優(yōu)級(jí)純），乙酸銨（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，優(yōu)級(jí)純），無水硫酸鎂（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，優(yōu)級(jí)純），氯化鈉（天津市福晨化學(xué)試劑廠，分析純），氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品（97.8%，0.1 g），蟲酰肼標(biāo)準(zhǔn)品（100 μg·mL-1，1 mL，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研檢測(cè)所），0.22 μm有機(jī)濾膜（津騰），PSA固相萃取柱（上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司）。

1.2 溶液的配制

①正己烷飽和的乙腈溶液。用巴氏吸管吸取一定量的正己烷滴加到乙腈中，直至出現(xiàn)明顯的分層為止。②5 mmoL·L-1乙酸銨（含0.1%的甲酸）。稱取0.385 g乙酸銨于小燒杯中，加水溶解并轉(zhuǎn)移至1 L容量瓶中，加1 mL甲酸，用水定容。③標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。分別稱取氯蟲苯甲酰胺、蟲酰肼各5～10 mg，于10 mL容量瓶中，以甲醇溶解并定容。-18 ℃避光保存，有效期12個(gè)月。④混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別移取上述標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液適量至10 mL容量瓶中，用甲醇定容，0～4 ℃避光保存，有效期3個(gè)月。⑤基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。用空白基質(zhì)提取液配制成1、2、5、10、20 μg·L-1和 50 μg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.3 儀器設(shè)備

Waters Acquity超高效液相色譜儀（美國Waters），TSQ Quantum ULtra三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀（美國賽默飛世爾科技公司，帶電噴霧離子源ESI），電子分析天平（上海越平科學(xué)儀器制造有限公司，感量為0.00 001 g和0.01 g），GTR16-2離心機(jī)（北京時(shí)代北利離心機(jī)有限公司），KQ-500 VDE型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），UMV-2多管渦旋混合器（北京優(yōu)晟），50 mL離心管（CORNING），EFAA-DC24型氮吹儀（上海安譜實(shí)驗(yàn)科技），XHF-DY型勻漿機(jī)（寧波新芝）。

1.4 實(shí)驗(yàn)部分

1.4.1 試樣的制備和保存

按GB/T 8855-2008[3]抽取水果蔬菜樣品取可食部分，粉碎混勻、密封作為試樣標(biāo)明標(biāo)記，并于0～4 ℃冷藏保存。

1.4.2 樣品的提取和凈化

稱取5 g試樣（精確到0.001 g）于50 mL離心管中，準(zhǔn)確加入10 mL正己烷飽和的乙腈[4]溶液，3.0 g無水硫酸鎂，2.0 g氯化鈉，勻漿提取2 min。6 000 r·min-1離心5 min，取上層有機(jī)相，5 mL轉(zhuǎn)移至裝有50 mg PSA，150 mg無水硫酸鎂粉末的離心管中，渦旋振蕩2 min，6 000 r·min-1離心 3 min，取 2 mL 于氮吹儀上吹至近干，用初始流動(dòng)相定容至1 mL，渦旋混勻，過0.22 μm有機(jī)系濾膜，上機(jī)測(cè)定。取空白樣品按上述的提取和凈化過程進(jìn)行處理，得到空白基質(zhì)提取液。

1.5 方法

1.5.1 色譜條件

色譜柱：CORTECS? UPLC? C18柱（1.6 μm 2.1×100 mm Column，美國Waters）；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：5 μL；流速：0.3 mL·min-1；流動(dòng)相梯度洗脫見表1，A為5 mmol·L-1乙酸銨（含0.1%的甲酸），B為乙腈。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫表

1.5.2 質(zhì)譜條件

ESI電噴霧電離源，掃描方式：正離子多重反應(yīng)檢測(cè)模式，離子源溫度：350 ℃，電力電壓：3.5 kV，鞘氣壓力：45 arb，輔助氣壓力：15 arb，離子傳輸毛細(xì)管溫度：325 ℃，見表2。

表2 氯蟲苯甲酰胺和蟲酰肼的質(zhì)譜參數(shù)表

1.6 定性測(cè)定

在相同實(shí)驗(yàn)條件下，測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液，如樣品溶液中檢出色譜峰[5]的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液中組分色譜峰的保留時(shí)間一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，所選擇的離子均出現(xiàn)，切所選擇的離子豐度比一致（相對(duì)豐度＞50%,允許20%的偏差；相對(duì)豐度為20%～50%，允許25%的偏差；相對(duì)豐度為10%～20%，允許30%的偏差；相對(duì)豐度＜10%，允許50%的偏差），則可判斷樣品中存在該組分。

1.7 定量測(cè)定

采用外標(biāo)法定量。在儀器最佳條件下，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品進(jìn)樣，以峰面積為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)樣品進(jìn)行定量，其中樣品中待測(cè)物質(zhì)的濃度應(yīng)在線性范圍內(nèi)。

樣品中各組分含量按式（1）計(jì)算

式（1）中，X為試樣中被測(cè)組分殘留量，單位為μg·kg-1；C為從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得到的被測(cè)組分溶液濃度，單位為ng·mL-1；V為試樣溶液定容體積，單位為mL；m為試樣稱量質(zhì)量，單位為g；F為稀釋倍數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取試劑的選擇

采用甲醇、乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯等對(duì)蘋果陰性樣品進(jìn)行提取，以回收率的結(jié)果看，用正己烷飽和過的乙腈作為提取試劑，回收率氯蟲苯甲酰胺為85.7%～95.3%，蟲酰肼為87.9%～99.8%，利于鹽析分層，提高氯蟲苯甲酰胺和蟲酰肼在乙腈層中的分配比例。因此，本實(shí)驗(yàn)最終選用正己烷飽和過的乙腈溶液作為提取試劑。

2.2 凈化條件的確定

實(shí)驗(yàn)中分別考察了Sep-Pak Vac氨基固相萃取柱、C18固相萃取柱、石墨化炭黑固相萃取柱和PSA固相萃取柱，結(jié)果表明，PSA固相萃取柱凈化柱簡單、快捷。

2.3 儀器條件的優(yōu)化

分別嘗試了甲醇∶5 mmo L·L-1乙酸銨，乙腈∶5 mmoL·L-1乙酸銨，和乙腈∶5 mmoL·L-1乙酸銨（含0.1%甲酸）為流動(dòng)相，以10∶90的初始比例進(jìn)行梯度洗脫，最后發(fā)現(xiàn)選擇乙腈-5 mmoL·L-1乙酸銨（含0.1%甲酸）為初始流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫時(shí)峰型尖銳、靈敏度高，峰保留時(shí)間適中。

2.4 方法線性范圍，相關(guān)性及檢出限

準(zhǔn)確配制 1、2、5、10、20μg·L-1和 50 μg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，按1.5.1和1.5.2條件進(jìn)樣10 μL，縱坐標(biāo)為待測(cè)組分峰面積，橫坐標(biāo)為質(zhì)量濃度。氯蟲苯甲酰胺和蟲酰肼在1～50 μg·L-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程分別為：y=145 195+197 072x，r2=0.9993；y=24505.8+8 414.36x，r2=0.9952，檢出限均為 1 μg·kg-1，定量限均為5 μg·kg-1。相關(guān)譜圖見圖 1 ～ 6。

圖1 氯蟲苯甲酰胺工作曲線圖

圖2 蟲酰肼工作曲線圖

圖3 小蔥中氯蟲苯甲酰胺加標(biāo)（1 μg·kg-1）提取離子和質(zhì)譜圖

圖4 蘋果中蟲酰肼加標(biāo)（1 μg·kg-1）提取離子和質(zhì)譜圖

圖5 葡萄中氯蟲苯甲酰胺空白基質(zhì)提取圖

圖6 白菜中蟲酰肼空白基質(zhì)提取圖

2.5 方法準(zhǔn)確度和精密度

在陰性結(jié)果的蘋果、葡萄、小蔥、白菜中添加1、5、20 μg·kg-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述方法進(jìn)行提取，做加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)，每個(gè)濃度檢測(cè)6次，結(jié)果見表2。由表2可知，氯蟲苯甲酰胺和蟲酰肼在蘋果、葡萄、小蔥和白菜中的加標(biāo)回收率在80%～120%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1%～10%。見表3。

表3 水果蔬菜中氯蟲苯甲酰胺和蟲酰肼的加標(biāo)回收率表（n=6）

3 結(jié)論

本文建立了一種簡單快捷的檢測(cè)蔬菜水果中氯蟲苯甲酰胺和蟲酰肼水平的方法，即液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜/質(zhì)譜[6]，該法靈敏度高、準(zhǔn)確性好、分析時(shí)間短，可滿足日常分析的需要。