張 龍 陳 釗 汪 魯 陳世波 張 鵬 曲克明 李秋芬 朱建新①

(1.上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院 上海 201306；2.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部海洋漁業(yè)可持續(xù)發(fā)展重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所 青島 266071；3.青島卓越海洋集團(tuán)有限公司 青島 266400)

凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)生長(zhǎng)速度快、耐鹽范圍廣、抗病力強(qiáng)，其產(chǎn)量約占全球?qū)ξr產(chǎn)量的70%。自 1987年引入我國(guó)以來(lái)，凡納濱對(duì)蝦迅速成為我國(guó)主要的對(duì)蝦養(yǎng)殖品種之一，養(yǎng)殖產(chǎn)量占全球總產(chǎn)量的 21%(黃志堅(jiān)等, 2016)。目前，凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖模式主要有池塘養(yǎng)殖、高位池養(yǎng)殖和工廠化養(yǎng)殖(岑伯明, 2010； 王峰等, 2013； 高欣等, 2017； 沈明明等, 2017)。池塘和高位池養(yǎng)殖模式存在水資源浪費(fèi)嚴(yán)重、單位水體對(duì)蝦產(chǎn)量低、病毒性疾病頻發(fā)、污染周?chē)w等缺點(diǎn)(董雙林等, 2000； 曲克明等, 2000)；而工廠化養(yǎng)殖具有換水量少、養(yǎng)殖密度高、可避免病原微生物侵襲等優(yōu)點(diǎn)(吳晨等, 2011)。因此，我國(guó)對(duì)蝦工廠化養(yǎng)殖規(guī)模呈逐年增加的趨勢(shì)。

在工廠化養(yǎng)殖中，為提高對(duì)蝦飼料利用率和促進(jìn)對(duì)蝦快速生長(zhǎng)，通常需要對(duì)蝦苗種進(jìn)行中間培育，即對(duì)體長(zhǎng)為 0.3～0.5 cm的凡納濱對(duì)蝦蝦苗進(jìn)行集中飼養(yǎng)管理，使其快速生長(zhǎng)至1～2 cm仔蝦的養(yǎng)殖過(guò)程。在對(duì)蝦苗種中間培育期間，放養(yǎng)密度、水質(zhì)、水體細(xì)菌數(shù)量及菌落組成的控制通常是決定對(duì)蝦苗種中間培育成敗的關(guān)鍵。放養(yǎng)密度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致水質(zhì)惡化，加速細(xì)菌快速生長(zhǎng)繁殖，改變水體中微生物群落結(jié)構(gòu)，進(jìn)而影響?zhàn)B殖對(duì)蝦的患病概率和發(fā)病速度(丁美麗等,1997； 陳琛等, 2016； Apún-Molinaet al, 2017)。同時(shí)，放養(yǎng)密度還會(huì)對(duì)凡納濱對(duì)蝦的生理行為、免疫指標(biāo)和能量轉(zhuǎn)化等產(chǎn)生重要影響，進(jìn)而改變其生長(zhǎng)速度和養(yǎng)殖產(chǎn)量(李純厚等, 2006； 李玉全等, 2007； 張?zhí)鞎r(shí)等,2008； 衣萌萌等, 2012)。目前，關(guān)于放養(yǎng)密度對(duì)凡納濱對(duì)蝦苗種中間培育效果的研究較為有限。本研究通過(guò)凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖場(chǎng)實(shí)際苗種中間培育實(shí)驗(yàn)，探究了放養(yǎng)密度對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能、主要水質(zhì)指標(biāo)及微生物群落結(jié)構(gòu)的影響，以期為凡納濱對(duì)蝦工廠化養(yǎng)殖提供生產(chǎn)性技術(shù)指導(dǎo)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)施

本研究選取 12 個(gè)有效容積為 25 m3的水泥池(5 m × 5 m × 1 m)作為凡納濱對(duì)蝦苗種中間培育池，池底均勻布設(shè)100個(gè)氣石，采用空氣增氧；養(yǎng)殖用水為經(jīng)砂濾、消毒后的地下海水，鹽度為 31；每個(gè)池體上方棚頂設(shè)置 1 個(gè)采光口(3 m × 1 m)，光照控制在1000～1500 lx。實(shí)驗(yàn)所用凡納濱對(duì)蝦苗種由青島卓越海洋集團(tuán)有限公司培育，每尾平均體重為(6.0±0.5) mg。

1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

鑒于養(yǎng)殖場(chǎng)凡納濱對(duì)蝦苗種中間培育實(shí)際放養(yǎng)密度一般為1.50萬(wàn)尾/m3，本研究設(shè)置4個(gè)實(shí)驗(yàn)組，放養(yǎng)密度分別為1.5萬(wàn)尾/m3(P1組)、1.75萬(wàn)尾/m3(P2組)、2.0萬(wàn)尾/m3(P3組)和2.25萬(wàn)尾/m3(P4組)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組設(shè) 3個(gè)平行。實(shí)驗(yàn)共進(jìn)行 21 d。實(shí)驗(yàn)前期(1～7 d)，每天投喂 3 次鹵蟲(chóng)(Brine shrimp)無(wú)節(jié)幼體(粗蛋白含量為 57%)，投喂時(shí)間為 08：00、16：00 和 24：00；投喂蝦片(粗蛋白含量為 48%) 6次，投喂時(shí)間為06：00、09：00、12：00、15：00、18：00 和 21：00，鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體和蝦片日投喂總量為對(duì)蝦總重的10%；實(shí)驗(yàn)中期(8～13 d)，混合投喂蝦片和對(duì)蝦商品配合飼料(粗蛋白含量為 42%)，蝦片所占比例由 75%逐漸降到25%，日投喂總量為對(duì)蝦總重的 8%，投喂次數(shù)和時(shí)間與實(shí)驗(yàn)前期相同；實(shí)驗(yàn)后期(14～21 d)，投喂對(duì)蝦商品配合飼料，日投喂量由對(duì)蝦總重的 8% 逐漸降到6%，投喂次數(shù)和時(shí)間同實(shí)驗(yàn)前期。并每天向各個(gè)池體潑灑光合細(xì)菌和乳酸多肽，使養(yǎng)殖池內(nèi)二者濃度分別達(dá)到50、20 mg/L。

實(shí)驗(yàn)初始，養(yǎng)殖池水位為0.6 m，前3 d為蝦苗適應(yīng)期，不換水；從第3天開(kāi)始, 每天補(bǔ)水0.1 m，補(bǔ)至0.9 m，補(bǔ)水時(shí)間為08：30；從第7天開(kāi)始，每天換水1次，日換水量由養(yǎng)殖池內(nèi)高度增加0.05 m，逐漸遞增至0.30 m，換水時(shí)間與補(bǔ)水時(shí)間相同。在補(bǔ)、換水時(shí)，要保持較小的流量，以避免對(duì)蝦苗種產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，同時(shí)，各個(gè)養(yǎng)殖池內(nèi)補(bǔ)、換水量相同。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，各養(yǎng)殖池內(nèi)水體溫度、鹽度、溶解氧分別保持在 28～30℃、31～32、5.8～6.0 mg/L。每天 08：00 采集水樣，測(cè)定各個(gè)養(yǎng)殖池內(nèi)氨氮(-N)和亞硝酸氮(-N)濃度以及弧菌(Vibrio)濃度；每3 d測(cè)定1次水體的化學(xué)需氧量(COD)，與上述測(cè)定指標(biāo)采用同一批水樣。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，各池內(nèi)隨機(jī)抽取50尾對(duì)蝦，對(duì)其生物學(xué)體長(zhǎng)和體重進(jìn)行測(cè)量，并計(jì)算平均值；同時(shí), 檢測(cè)各個(gè)養(yǎng)殖池內(nèi)養(yǎng)殖水體的微生物群落。

1.3 分析方法

1.3.1 對(duì)蝦生長(zhǎng)性能 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，排干養(yǎng)殖池水并收獲對(duì)蝦。分別使用游標(biāo)卡尺和電子天平測(cè)量各養(yǎng)殖池內(nèi)凡納濱對(duì)蝦的生物學(xué)體長(zhǎng)和體重，并分別計(jì)算對(duì)蝦的產(chǎn)率、特定增長(zhǎng)率、存活率以及餌料轉(zhuǎn)化率，公式如下：

產(chǎn)率(Yield rate,YR) = (收獲對(duì)蝦總重量-放苗對(duì)蝦總重量)/放苗對(duì)蝦總重量

特定生長(zhǎng)率(Specific growth rate, SGR, %/d) =[ln(對(duì)蝦收獲體重)-ln(對(duì)蝦初始體重)] × 100/(實(shí)驗(yàn)天數(shù))

存活率(Survival rate, SR, %) = 對(duì)蝦收獲數(shù)量/對(duì)蝦放苗數(shù)量 × 100

餌料轉(zhuǎn)化率(Feed conversion rate, FCR, %) = 飼料利用干重/對(duì)蝦收獲增重 × 100

1.3.2 常規(guī)水質(zhì)指標(biāo) 利用水質(zhì) YSI 556 檢測(cè)儀(美國(guó))監(jiān)測(cè)水體溫度、溶解氧、pH和鹽度。-N、-N和COD濃度分別采用采用靛酚藍(lán)分光光度法、鹽酸萘乙二胺分光光度法和堿性高錳酸鉀法測(cè)定?；【鷿舛炔捎猛坎计桨宓姆椒y(cè)定，將0.1 ml水樣使用涂物棒均勻涂布在TCBS培養(yǎng)基上，24 h后觀測(cè)和記錄培養(yǎng)基上菌落數(shù)量。

1.3.3 微生物群落 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用1 L的滅菌聚乙烯瓶采集水樣，將水樣放置搖床，于 300 r/min搖晃10 min后，用0.22 μm孔徑無(wú)菌濾膜抽濾。抽濾膜使用細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒提取水樣DNA，利用帶有 Barcode的特異性引物(515F和 806R)對(duì)提取的水樣基因組DNA的16S V4區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。在 PCR產(chǎn)物通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后，使用TruSeq? DNA PCR-Free Sample Preparation Kit建庫(kù)試劑盒進(jìn)行文庫(kù)構(gòu)建。若文庫(kù)合格，使用HiSeq 2500 PE250進(jìn)行上機(jī)測(cè)序。

下機(jī)數(shù)據(jù)在截取 Barcode和引物序列后，使用FLASH 1.2.7軟件對(duì)樣品Reads進(jìn)行拼接，得到原始數(shù)據(jù)(Raw Tags)(Mago?et al, 2011)；利用 Qiime 1.9.1軟件對(duì)Raw Tags進(jìn)行過(guò)濾處理，得到高質(zhì)量 Tags 數(shù)據(jù)(Clean Tags)(Caporasoet al, 2010； Bokulichet al,2013)；Clean Tags序列通過(guò)(UCHIME Algorithm)與數(shù)據(jù)庫(kù)(Gold database)進(jìn)行比對(duì)(Edgaret al, 2011)，去除其中的嵌合體序列(Hasset al, 2011)，得到有效數(shù)據(jù)(Effective Tags)。使用 Uparse v7.0.1001軟件將所有 Effective Tags 聚類(lèi)(97%)成為操作分類(lèi)單元(Operational Taxonomic Units，OTUs) (Edgar, 2013)；通過(guò) Mothur方法與 SILVA的 SSUrRNA數(shù)據(jù)庫(kù) OTUs 對(duì)比進(jìn)行物種注釋(Wanget al, 2007； Quastet al, 2013)。通過(guò)香農(nóng)指數(shù)(Shannon index)確定水樣細(xì)菌生物多樣性。使用Origin.8軟件對(duì)水樣細(xì)菌相對(duì)豐度(門(mén)和屬)進(jìn)行制圖。

1.3.4 數(shù)據(jù)處理 采用 SPPS 軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析、差異顯著性檢驗(yàn)分析，用t檢驗(yàn)計(jì)算P值，P＜0.05時(shí)，為差異顯著，P＜0.01時(shí)，為差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 密度對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能的影響

不同放養(yǎng)密度對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能的影響見(jiàn)表1。從表1可以看出，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，各養(yǎng)殖池蝦苗的平均體重增加了9.3～10.5倍。在放養(yǎng)密度為1.50～2.25萬(wàn)尾/m3條件下，凡納濱對(duì)蝦YR、SGR、SR以及FCR均隨著放養(yǎng)密度的增加而逐漸升高。

表1 不同放養(yǎng)密度養(yǎng)殖池內(nèi)凡納濱對(duì)蝦的生長(zhǎng)性能Tab.1 Performance parameters of L.vannamei in ponds with different stocking densities

2.2 放養(yǎng)密度對(duì)水質(zhì)的影響

圖1 不同放養(yǎng)密度養(yǎng)殖池內(nèi)水體pH變化Fig.1 pH variations of aquaculture water in ponds with different stocking densities

2.2.1 pH 不同放養(yǎng)密度養(yǎng)殖池中水體 pH隨實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行整體呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)(圖 1)。實(shí)驗(yàn)期內(nèi)，各組pH由8.00分別降低至7.72、7.66、7.67和7.59，而實(shí)驗(yàn)后期，換水量的增加能有效抑制pH的下降。P1、P2、P4組間水體的pH存在顯著差異(P＜0.05)，而P2、P4組水體pH較為接近?？傮w而言，水體pH隨著放養(yǎng)密度的增加而降低。

2.2.2 氨氮和亞硝酸氮濃度 隨著凡納濱對(duì)蝦苗種中間培育實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行，各實(shí)驗(yàn)組水體-N濃度均呈逐漸上升趨勢(shì)(圖 2)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各密度組水體-N濃度分別達(dá)到3.53、4.23、4.88和5.55 mg/L。水體-N濃度隨著對(duì)蝦放養(yǎng)密度的增加而升高，且不同放養(yǎng)密度組間差異顯著(P＜0.05)。-N濃度在實(shí)驗(yàn)前期(1～7 d)變化緩慢，在實(shí)驗(yàn)中后期(8～21 d)快速上升。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各密度組水體-N濃度分別達(dá)到 0.20、0.24、0.21和0.02 mg/L，但不同放養(yǎng)密度組間-N濃度差異并不顯著(P＞0.05)。

2.2.3 COD 濃度 實(shí)驗(yàn)前、中期(1～13 d)，水體COD濃度呈上升趨勢(shì)；實(shí)驗(yàn)后期(14～21 d)，隨著換水量的增加，水體COD濃度呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)(圖3)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各密度組水體COD濃度分別達(dá)到6.4、7.2、7.6和7.8 mg/L。COD濃度隨放養(yǎng)密度的增加而有所增加，且不同密度組間差異顯著(P＜0.05)。

圖2 不同放養(yǎng)密度養(yǎng)殖池內(nèi)水體氨氮和亞硝酸氮濃度變化Fig.2 Variations of ammonia and nitrite concentrations of aquaculture water in ponds with different stocking densities

圖3 不同放養(yǎng)密度養(yǎng)殖池內(nèi)水體COD濃度的變化Fig.3 Variations of COD concentrations of aquaculture water in ponds with different stocking densities

2.2.4 水體弧菌濃度 實(shí)驗(yàn)前、中期，水體中弧菌濃度保持相對(duì)穩(wěn)定，為(0.3～3.0)×104CFU/ml；實(shí)驗(yàn)后期，受日換水量增加的影響，各實(shí)驗(yàn)組水體弧菌濃度存在一定程度的波動(dòng)，其中，P4組波動(dòng)最大(圖4)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各實(shí)驗(yàn)組水體弧菌濃度分別為2.3×104、1.8× 104、3.8×104和 4.3×104CFU/ml，弧菌濃度與養(yǎng)殖密度不存在相關(guān)性。

2.3 放養(yǎng)密度對(duì)水體微生物群落結(jié)構(gòu)的影響

2.3.1 細(xì)菌生物多樣性 香農(nóng)指數(shù)在一定程度上可以反映水體中細(xì)菌的生物多樣性，通常香農(nóng)指數(shù)越大，說(shuō)明其生物多樣性越高(Cardonaet al, 2016)。從圖5可以看出，各實(shí)驗(yàn)組間香農(nóng)指數(shù)存在顯著性差異(P＜0.05)，其中，P1、P2組存在極顯著差異(P＜0.01)，P2組香農(nóng)指數(shù)明顯高于其他各組?？傮w而言，香農(nóng)指數(shù)隨養(yǎng)殖密度的升高呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)。

圖4 不同放養(yǎng)密度養(yǎng)殖池內(nèi)水體弧菌濃度變化Fig.4 Variations of Vibrio concentration of aquaculture water in ponds with different stocking densities

圖5 不同放養(yǎng)密度養(yǎng)殖池內(nèi)水體細(xì)菌香農(nóng)指數(shù)Fig.5 Bacteria Shannon diversity index of aquaculture water in ponds with different stocking densities

2.3.2 水體中細(xì)菌優(yōu)勢(shì)種群 不同放養(yǎng)密度養(yǎng)殖池內(nèi)細(xì)菌群落的主要組成見(jiàn)表2。從表2可以看出，變形菌門(mén)(Proteobacteria)和擬桿菌門(mén)(Bacteroidetes)為各組水體的主要細(xì)菌門(mén)類(lèi)。α-變形菌綱(Alphaproteobacteria)紅桿菌科(Rhodobacteraceae)和γ-變形菌綱(Gammaproteobacteria)弧菌科(Vibrio)在變形菌門(mén)中分別占 46%～81%和 2%～23%。黃桿菌綱(Flavobacteriales)黃桿菌科(Flavobacteriales)、 鞘氨醇桿菌綱(Sphingobacteriales)腐螺旋菌科(Saprospiraceae)和噬纖維菌綱(Cytophagales)Algorriphogus菌科分別占擬桿菌門(mén)的3%～13%、21%～44%和8%～62%。

表2 不同放養(yǎng)密度養(yǎng)殖池內(nèi)細(xì)菌群落的主要成分(門(mén)水平)Tab.2 Major component of the bacterial community in ponds with different stocking densities (Phyla)

實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各實(shí)驗(yàn)組水體主要菌屬的相對(duì)豐度見(jiàn)圖6。從圖6可以看出，P1組Algorriphogus的相對(duì)豐度最高(13.5%)，弧菌屬次之(5.1%)；P2和P4組弧菌屬的相對(duì)豐度最高(9.4%、8.1%)，棲東海菌屬(Donghicola)次之(5.3%、8.0%)；P3組弧菌屬相對(duì)豐度最高(2.3%)，海命菌屬(Marivita)次之(1.8%)。弧菌屬在不同放養(yǎng)密度養(yǎng)殖池水體中均為優(yōu)勢(shì)菌屬。

圖6 不同放養(yǎng)密度養(yǎng)殖池內(nèi)主要細(xì)菌菌屬的相對(duì)豐度Fig.6 Relative abundance of major bacterial genus in ponds with different stocking densities

3 討論

3.1 放養(yǎng)密度對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能的影響

SR及SGR是影響凡納濱對(duì)蝦YR的直接因素。因此，本研究以對(duì)蝦YR來(lái)衡量凡納濱對(duì)蝦苗種中間培育效果。結(jié)果顯示，在放養(yǎng)密度為1.5～2.25萬(wàn)尾/m3條件下，隨著放養(yǎng)密度的增加，凡納濱對(duì)蝦SR、SGR及YR均逐漸升高。這與李純厚等(2006)、李玉全等(2007)、衣萌萌等(2012)研究結(jié)果相悖，這主要是由于對(duì)蝦苗種中間培育階段對(duì)蝦規(guī)格小、密度低，同時(shí)，因密度脅迫所產(chǎn)生的空間擁擠效應(yīng)并不明顯(Ngaet al, 2005)。本研究結(jié)果顯示，當(dāng)放養(yǎng)密度為1.5～2.25萬(wàn)尾/m3時(shí)，適當(dāng)提高養(yǎng)殖密度有利于提升凡納濱對(duì)蝦苗種中間培育效果。其主要原因在于本研究設(shè)定的放養(yǎng)密度范圍內(nèi)，當(dāng)放養(yǎng)密度較高時(shí)，單位水體餌料投喂量較大，有利于對(duì)蝦對(duì)餌料的攝取。因此，在凡納濱對(duì)蝦苗種中間培育實(shí)際工廠化養(yǎng)殖中，也可以將對(duì)蝦苗種中間培育實(shí)際放養(yǎng)密度由 1.5萬(wàn)尾/m3增加至 2.25萬(wàn)尾/m3，以提高養(yǎng)殖對(duì)蝦產(chǎn)量和增加養(yǎng)殖效益。

3.2 放養(yǎng)密度對(duì)養(yǎng)殖水體水質(zhì)的影響

養(yǎng)殖水體水質(zhì)受餌料投喂、凡納濱對(duì)蝦生理活動(dòng)(攝食、排泄、呼吸代謝等)以及水體微生物代謝的影響(劉嬌等, 2008)。在對(duì)蝦苗種中間培育過(guò)程中，對(duì)蝦及微生物呼吸代謝產(chǎn)生的CO2積累，導(dǎo)致水體pH逐漸下降。放養(yǎng)密度和微生物豐度越高，水體pH下降越快。餌料是水體有機(jī)物負(fù)荷的主要來(lái)源，隨著對(duì)蝦養(yǎng)殖個(gè)體的增大和養(yǎng)殖密度的加大，飼喂量逐步提高，從而導(dǎo)致水體COD濃度的上升。餌料中蛋白質(zhì)含量較高則是導(dǎo)致水體中-N和-N濃度升高的主要原因。在對(duì)蝦苗種中間培育期間，隨著對(duì)蝦養(yǎng)殖個(gè)體的增大和養(yǎng)殖密度的加大，餌料投喂量進(jìn)一步加大，從而導(dǎo)致水體-N和-N濃度的上升。本研究表明，放養(yǎng)密度較大的養(yǎng)殖池內(nèi)水體pH較低，而-N和COD濃度較高，與丁美麗等(1997)研究的結(jié)果相吻合。

為避免水質(zhì)惡化，換水是調(diào)節(jié)水質(zhì)指標(biāo)的有效措施，也是養(yǎng)殖企業(yè)最常用的方法。實(shí)驗(yàn)期間，隨著凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖個(gè)體的增大和養(yǎng)殖密度的加大而逐步提升換水量，最大換水量占總水體的33%，在一定程度上抑制水體pH的下降和COD濃度的升高，但對(duì)調(diào)節(jié)-N和-N濃度作用有限。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，-N 濃度達(dá)到 3.53～5.80 mg/L，超出了姚慶禎等(2002)研究的對(duì)蝦養(yǎng)殖安全濃度(0.79 mg/L)，但是，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，尚未發(fā)現(xiàn)該濃度對(duì)凡納濱對(duì)蝦苗種生長(zhǎng)和SR構(gòu)成影響。結(jié)果顯示，在本研究條件下，換水對(duì)養(yǎng)殖水體水質(zhì)的調(diào)節(jié)能力有限。然而，增大換水量在增加生產(chǎn)成本的同時(shí)，也可能造成凡納濱對(duì)蝦產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，對(duì)其生長(zhǎng)存活產(chǎn)生負(fù)面影響，因此，需要引入更加高效的對(duì)蝦養(yǎng)殖模式(如生物絮團(tuán)養(yǎng)殖、循環(huán)水養(yǎng)殖)為凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖提供穩(wěn)定的水質(zhì)保證(張?jiān)S光等, 2013)。

在對(duì)蝦養(yǎng)殖過(guò)程中，弧菌往往作為致病菌或者條件致病菌存在，因而成為養(yǎng)殖水體檢測(cè)的重要微生物指標(biāo)(張彬等, 2015； 黃志堅(jiān)等, 2016)。本研究表明，對(duì)蝦放養(yǎng)密度與水體弧菌濃度無(wú)顯著相關(guān)，這與Cao等(2013)的研究結(jié)果較吻合。實(shí)驗(yàn)后期，各實(shí)驗(yàn)組水體的弧菌濃度波動(dòng)較大，這可能是由實(shí)驗(yàn)后期換水量較大所致。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，各養(yǎng)殖池水體弧菌濃度始終處在安全濃度以?xún)?nèi)(1.0×107CFU/ml) (Gullianet al, 2004)。但是，弧菌濃度超標(biāo)依然是工廠化養(yǎng)殖中對(duì)蝦死亡的重要原因之一，其致病機(jī)理和安全濃度值得進(jìn)一步研究。

3.3 放養(yǎng)密度對(duì)水體細(xì)菌多樣性和群落結(jié)構(gòu)的影響

養(yǎng)殖水體細(xì)菌生物多樣性和菌落結(jié)構(gòu)受養(yǎng)殖生物種類(lèi)、數(shù)量以及水體、水質(zhì)等因素的影響。本研究結(jié)果表明，隨放養(yǎng)密度的增大，養(yǎng)殖水體中細(xì)菌生物多樣性總體上呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。這是因?yàn)榉硼B(yǎng)密度較高時(shí)，水體中COD、-N和-N濃度較高，為多種類(lèi)型細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖提供了較豐富的C源和N源(王以堯等, 2011； 陳琛等, 2016)。對(duì)蝦放養(yǎng)密度不僅會(huì)影響?zhàn)B殖水體中細(xì)菌生物多樣性，還會(huì)改變細(xì)菌的群落結(jié)構(gòu)。本研究結(jié)果顯示，在水體細(xì)菌屬水平上，P1組內(nèi)相對(duì)豐度最大的菌屬為Algorriphogus屬，而P2、P3、P4組為弧菌屬；P1～P4組內(nèi)相對(duì)豐度處在第2位的菌屬分別為弧菌屬、棲東海菌屬、海命菌屬和棲東海菌屬。

養(yǎng)殖水體中，細(xì)菌生物多樣性和菌落結(jié)構(gòu)對(duì)凡納濱對(duì)蝦內(nèi)部細(xì)菌的生長(zhǎng)具有重要影響，并在對(duì)蝦的營(yíng)養(yǎng)利用、提高免疫力等方面發(fā)揮著重要作用(Luoet al,2006； 李玉宏等, 2014)。在放養(yǎng)密度較高的養(yǎng)殖池水體中，細(xì)菌生物多樣性也較高，這可以提高養(yǎng)殖系統(tǒng)的穩(wěn)定性，降低致病菌或條件致病菌成為優(yōu)勢(shì)菌群的可能性，從而可能在一定程度上降低凡納濱對(duì)蝦的發(fā)病率。而且，良好的菌落組成可以降低水體有機(jī)物負(fù)荷，改善對(duì)蝦腸道環(huán)境，從而提高對(duì)蝦的免疫力和抗病力(Apún-Molinaet al, 2017)。

4 結(jié)論

在凡納濱對(duì)蝦苗種中間培育期間，放養(yǎng)密度(1.5～2.25 萬(wàn)尾/m3)的增加提高了凡納濱對(duì)蝦的生長(zhǎng)性能(產(chǎn)率、特定生長(zhǎng)率、存活率及餌料轉(zhuǎn)化率)。

在凡納濱對(duì)蝦苗種中間培育期間，放養(yǎng)密度提高能有效提升養(yǎng)殖池內(nèi)的細(xì)菌生物多樣性；養(yǎng)殖池內(nèi)主要的細(xì)菌門(mén)類(lèi)為變形菌門(mén)和擬桿菌門(mén)，弧菌為養(yǎng)殖水體中的優(yōu)勢(shì)菌屬。