劉濟(jì)明 管睿婷 王 敏 陳敬忠 童炳麗 武夢瑤

(貴州大學(xué)林學(xué)院，貴陽 550025)

小蓬竹(AmpelocalamusluodianensisT.P.Yi & R.S.Wang)屬禾本科(Gramineae)竹亞科(Bambusoideae)懸竹屬(Ampelocalamus)；竹竿低部位較直且中心空隙很小，高部位藤狀垂掛，合軸叢生，主干粗壯而側(cè)枝極細(xì)，籜鞘較晚掉落，籜片披針形，沒有籜耳[1]；為中國特有、貴州省特有物種，現(xiàn)悉僅分布于貴州省羅甸縣、平塘縣、長順縣、紫云縣、貞豐縣、冊亨縣、望謨縣、安龍縣、惠水縣等喀斯特區(qū)域600～1 000 m海拔高度的石灰?guī)r出露山地，在《中國物種紅色名錄》、《IUCN紅色名錄》里均屬極危種[2]。在觀賞、經(jīng)濟(jì)與生態(tài)等方面的利用價(jià)值極高。

小生境(microhabitats)：又稱小棲息地，為特定環(huán)境條件生物的某種生境，小生境越專一，物種就越容易受到棲息地環(huán)境變化的影響。本研究選取生長在土面、石溝、石縫、石槽及石洞等5種不同喀斯特小生境中的小蓬竹隨機(jī)采樣。

隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA標(biāo)記(Random amplification polymorphic DNA，RAPD)：是Williams和Welsh幾乎在同一時(shí)期研究得出的通過隨機(jī)引物擴(kuò)增來找多態(tài)DNA片斷為標(biāo)記的遺傳多樣性研究法[3]。該研究法中，基因組DNA作模板，引物為隨機(jī)寡聚核苷酸單鏈，PCR克隆DNA片段經(jīng)電泳檢測分離之后，再用放射性自顯影技術(shù)或EB染色法檢測研究對象的多態(tài)性譜帶。RAPD標(biāo)記所需DNA用量少、操作簡單、檢測方便、敏感性高，引物隨機(jī)合成，無需參照基因組序列便能設(shè)定引物，一個(gè)引物幾乎可擴(kuò)增出整個(gè)基因組片段。其缺點(diǎn)是用于RAPD標(biāo)記的引物都很短，使得退火溫度較低，會(huì)引起引物和模板DNA配對出錯(cuò)[4～5]。

遺傳多樣性(Genetic diversity)：生物四大多樣性(遺傳、物種、生態(tài)系統(tǒng)和景觀多樣性)之一，是生物多樣性的根本和最關(guān)鍵的成分，很大程度上決定了物種和群落的多樣性，它與環(huán)境多樣性共同決定生物的形態(tài)多樣性[6]。遺傳多樣性由基因組控制，它的豐富與否直接關(guān)系到相應(yīng)種群能否適應(yīng)生境、能否順利發(fā)展進(jìn)化。生物遺傳多樣性研究為揭示其分子級微觀進(jìn)化和區(qū)域差異及物種的形成機(jī)制等提供了很好的方法證據(jù)，同時(shí)也是現(xiàn)代生物學(xué)上遺傳改良的基礎(chǔ)。

喀斯特(Karst)，通常被定義為地下水、地表水對可溶性巖石的溶蝕和改造及由此產(chǎn)生的地形地貌，貴州省內(nèi)喀斯特地貌發(fā)育強(qiáng)烈突出，分布極廣且面積非常之大，占到整個(gè)貴州省國土面積的73%[7]，喀斯特環(huán)境異質(zhì)性高，植物所處生境惡劣而且極其脆弱，喀斯特區(qū)域生態(tài)系統(tǒng)的物質(zhì)遷移能力極強(qiáng)，所以在受到外界人為干擾或自然干擾之后，生態(tài)系統(tǒng)很難實(shí)現(xiàn)自然恢復(fù)。

大量研究證明，植物遺傳多樣性的豐富度同其所處生存環(huán)境的復(fù)雜性程度以及降雨、溫度、人為干擾、坡向、土壤等生態(tài)因子極為相關(guān)，不同生境中同種植物的種群遺傳多樣性高低不等[8,15]。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

該研究用材小蓬竹采樣于貴州省羅甸縣董架鄉(xiāng)董架村，106°53′53″～106°54′39″E，25°35′38″～25°37′17″N，海拔900～950 m的喀斯特石坡[17]。隨機(jī)選取生長在土面、石溝、石縫、石槽和石洞等不同喀斯特小生境的小蓬竹進(jìn)行采樣，各類喀斯特小生境的選取標(biāo)準(zhǔn)如表1。

每類小生境中各取3個(gè)樣方，采其植株長勢良好、健康的新鮮嫩葉10 g，放進(jìn)塑封袋里，加100 g變色硅膠并輕晃封袋讓嫩葉與之充分接觸。隨時(shí)觀注硅膠呈色，當(dāng)其由藍(lán)變?yōu)榉奂t時(shí)須立即換掉。

表1 5類喀斯特小生境的選取標(biāo)準(zhǔn)

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 小蓬竹基因組DNA的提取

竹子葉片所含蛋白質(zhì)和多糖較高，對DNA提取影響極大，因此本研究選擇在Doyle J J和Doyle J L的經(jīng)典CTAB法[18]基礎(chǔ)之上改良，得到合適于小蓬竹基因組DNA提取的方法，然后提取經(jīng)硅膠干燥的小蓬竹嫩葉中的基因組DNA。具體操作步驟如下：

(1)取0.05 g干燥葉片置于滅菌預(yù)冷的研缽中，加適量的液氮快速研磨至粉末，研磨過程中注意添加液氮，在完成研磨前不能讓研缽中的液氮完全揮發(fā)，以防止DNA褐化和降解。將研磨好的組織粉末迅速分裝至2.0 mL滅菌冷凍的離心管中。

(2)加入800 μL 65℃預(yù)熱的2×CTAB提取液，10 μL的β-巰基乙醇，劇烈震蕩以充分混勻，置于65℃水浴約1 h，每10 min顛倒搖勻1次。

(3)加800 μL的氯仿∶異戊醇(24∶1)，緩慢顛倒搖晃10 min。

(4)12 000 r·min-1，低溫離心10 min。

(5)取上清液到一支新的離心管，加入0.7體積預(yù)冷的異丙醇，150 μL醋酸鈉(pH5.2)，充分混勻，-20℃放置30 min。

(6)12 000 r·min-1，低溫離心10 min。

(7)棄上清，用70%酒精清洗沉淀1次。

(8)棄去酒精，在空氣中晾干沉淀，加入50 μL 65℃預(yù)熱的TE buffer溶解沉淀，-20℃放置備用。

1.2.2 RAPD-PCR克隆擴(kuò)增及產(chǎn)物檢測

使用小蓬竹RAPD-PCR優(yōu)化體系[7]和篩選出的擴(kuò)增條帶清晰、多態(tài)性高，穩(wěn)定性好的隨機(jī)引物，對來自不同小生境小蓬竹的基因組DNA進(jìn)行RAPD-PCR擴(kuò)增。

RAPD-PCR優(yōu)化體系如下：總體積20 μL，dNTPs為100 μmol·L-1；模板DNA量30 ng；Taq DNA聚合酶1.0 U；引物濃度0.2 μmol·L-1；Mg2+濃度1.5 mmol·L-1。PCR循環(huán)條件：94℃預(yù)變性5 min之后轉(zhuǎn)入35個(gè)循環(huán)，即94℃變性1 min，35℃退火30 s，72℃延伸90 s，結(jié)束循環(huán)之后在72℃溫度條件延伸7 min，最后于4℃條件下保存。

RAPD-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物于2%瓊脂糖凝膠上電泳，電泳液1×TBE，電壓100 V，根據(jù)條帶長度，待溴酚藍(lán)移到距點(diǎn)樣孔2/3之處便不再電泳，然后于凝膠成像系統(tǒng)下察看結(jié)果，拍像記錄。

1.2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

根據(jù)RAPD-PCR擴(kuò)增帶的有無構(gòu)建1-0矩陣，使用POPGENE 32和NTSYSPC V2.10E軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

RAPD是顯性標(biāo)記，同一引物的擴(kuò)增產(chǎn)物中電泳遷移率相同的條帶被認(rèn)為具有同源性，屬于同一位點(diǎn)的產(chǎn)物，按照有帶為1，無帶為0來記錄電泳譜帶。將每個(gè)位點(diǎn)視為等位基因M和m，數(shù)據(jù)“1”代表基因型MM或Mm，數(shù)據(jù)“0”代表基因型mm，并且假定小蓬竹居群內(nèi)基因頻率處于Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)，用POPGENE32軟件計(jì)算下列遺傳參數(shù)：

(1)多態(tài)位點(diǎn)比例(percentage of polymorphic loci，PPL)

PPL=(具有多態(tài)的位點(diǎn)/檢測到的位點(diǎn)數(shù))×100%

(1)

(2)觀測等位基因數(shù)(observed number of alleles，Na)

(3)有效等位基因數(shù)(effective number of alleles，Ne)

Ne=∑ne/n，ne=1/∑Pi2

(2)

式中：ne為單個(gè)位點(diǎn)上的有效單位基因數(shù)；Pi為單個(gè)位點(diǎn)上第i個(gè)等位基因頻率；n為測定位點(diǎn)總數(shù)；Ne與基因的頻率大小聯(lián)系起來，更能反應(yīng)群體的真實(shí)情況。

(4)Shannon’s多樣性指數(shù)(Shannon’s Information index,I)

I=-∑Pilog2Pi

(3)

式中：Pi是一條擴(kuò)增產(chǎn)物存在的頻率；I為表型多樣性指數(shù)。

I可以計(jì)算兩種水平的多樣性：Hpop和Hsp。Hpop是群體內(nèi)遺傳多樣度，Hsp是種內(nèi)遺傳多樣性，Hpop/Hsp則是群體內(nèi)多樣性所占的比例，群體間多樣性所占比例則為：

(Hpop-Hsp)/Hsp

(4)

(5)Nei’s基因多樣性(Nei’s gene diversity,H)；

(6)群體總基因多樣性(Ht)和群體內(nèi)基因多樣性(Hs)；

(7)基因分化系數(shù)(coefficient of gene differentiation，Gst)

Gst=(Ht-Hs)/Ht

(5)

(8)基因流(gene flow，Nm)

Nm=(1-Gst)/2Gst

(6)

(9)遺傳相似性系數(shù)(genetic identity)

I=JXY/JXJY1/2，又表示兩群體間的遺傳相似程度，其中JX、JY和JXY分別是所有位點(diǎn)上JX、JY和JXY算術(shù)平均數(shù)。這里JX=∑Xi，JY=∑Yi，JXY=∑XiYi，Xi、Yi分別是X、Y群體中第i個(gè)等位基因。

(10)Nei’s遺傳距離(D)(genetic distance)

D=-lnI

(7)

通過NTSYSpc Version 2.10e軟件利用UPGMA(非加權(quán)算術(shù)平均法，unweighted pair group with arithmetic average)進(jìn)行聚類分析，作出聚類圖[19]。

2 結(jié)果與分析

2.1 RAPD-PCR擴(kuò)增結(jié)果分析

本試驗(yàn)從80個(gè)引物中篩選出8個(gè)RAPD隨機(jī)引物，對采自5種不同小生境中小蓬竹的15個(gè)DNA樣本進(jìn)行了PCR克隆擴(kuò)增。共克隆出87個(gè)條帶，分子量分布于200～3 000 bp，清晰度高且重復(fù)性好，包含68條多態(tài)帶，多態(tài)位所占比例PPL=78.16%。平均水平每個(gè)引物可以擴(kuò)增得多態(tài)帶8.5條，其中的引物S5擴(kuò)增的條帶數(shù)最多(16條)且其多態(tài)條帶占比(PPL)非常之高，達(dá)到100%。可見RAPD-PCR擴(kuò)增效果好，產(chǎn)生的條帶較多且多態(tài)條帶所占比率高，證明不同小生境中小蓬竹在分子水平上遺傳多樣性豐富度高(表2，圖1)。

表2不同小生境小蓬竹RAPD-PCR擴(kuò)增結(jié)果

Table2RAPD-PCRamplificationresultsofA.luodianensisindifferentmicrohabitats

引物編號(hào)Serial number of primers序列Sequence(5'—3')總條帶數(shù)Total number of polypeptide bands多態(tài)條帶數(shù)Number of polymorphic bands多態(tài)條帶比例Percentage of polymorphic bands(%)S5TGCGCCCTTC1515100.00S43GTCGCCGTCA131184.62S60ACCCGGTCAC7342.86S94GGATGAGACC10770.00S101GGTCGGAGAA121083.33S123CCTGATCACC8675.00S130GGAAGCTTGG12758.33S431TCGCCGCAAA10990.00合計(jì)Total876878.16

2.2 不同小生境小蓬竹的遺傳變異分析

5類小生境小蓬竹遺傳多樣性分析表(表3)顯示，在各類不同的小生境中：

土面(TM)小生境小蓬竹的多態(tài)位點(diǎn)百分率最高，PPL=47.13%，而石縫(SF)多態(tài)位點(diǎn)所占比例最小，PPL=39.08%，多態(tài)百分率均值PPL=44.37%。按多態(tài)位點(diǎn)比率(PPL)排序，5類小生境遺傳多樣性由高到低的排序?yàn)椋和撩?TM)>石洞(SD)>石槽(SC)>石溝(SG)>石縫(SF)。

Shannon’s指數(shù)最大的是土面(TM)I=0.283 4，最低的是石縫(SF)I=0.219 2，平均值為0.255 2。5類小生境按Shannon’s指數(shù)排序?yàn)椋和撩?TM)>石洞(SD)>石溝(SG)>石槽(SC)>石縫(SF)。

土面(TM)的Nei’s遺傳多樣性(H)最高，為0.195 3，最低的是石縫(SF)為0.147 4，平均值0.173 2。以Nei’s多樣性指數(shù)(H)為指標(biāo)，5類小生境遺傳多樣性排序?yàn)椋和撩?TM)>石洞(SD)>石溝(SG)>石槽(SC)>石縫(SF)。

另外，在物種水平上小蓬竹的Shannon’s指數(shù)I=0.432 0，說明小蓬竹居群內(nèi)部的遺傳多樣性較高。

圖1 不同小生境小蓬竹的RAPD指紋圖譜Fig.1 The RAPD fingerprintings of A.luodianensisin five different microhabitats

小生境Microhabitats樣本量Number of samples多態(tài)位點(diǎn)百分比Percentage of polymorphic loci(PPL)(%)等位基因數(shù)觀察值NaObserved number of alleles等位基因數(shù)有效值NeEffective number of allelesNei’s多樣性Nei’sgene diversity(H)Shannon’s指數(shù)Shannon in for mation index(I)土面(TM)347.131.47131.35260.19530.2834石溝(SG)342.531.42531.30880.17290.2521石縫(SF)339.081.39081.25180.14740.2192石槽(SC)344.831.44831.27030.16250.2442石洞(SD)345.981.45981.30540.17670.2615均值(AV)343.911.43911.29780.17100.2521物種水平Species level1578.161.79311.50860.29230.4320

圖2 5類小生境小蓬竹的遺傳變異指數(shù)統(tǒng)計(jì)Fig.2 The genetic variation indices of A.luodianensis in five microhabitats

5類小生境中小蓬竹的遺傳變異指數(shù)統(tǒng)計(jì)圖(圖2)表明，Shannon’s指數(shù)(I)與Nei’s基因的多樣性指數(shù)(H)顯示的各種小生境的遺傳多樣性變異一致，與多態(tài)百分比(PPL)表示略有差別，但趨勢相似。

根據(jù)Nei’s基因多樣性指數(shù)估算得5類不同小生境中小蓬竹的基因分化系數(shù)(Gst)為0.405 4(表4)，即各種小生境間的遺傳變異是總變異的40.54%，居群內(nèi)變異占比為59.46%。Gst顯示的遺傳分化狀況表明，小蓬竹遺傳變異仍然是以居群內(nèi)的變異為主。但不同小生境之間的遺傳變異比例(40.54%)較大，說明不同小生境差異在較大程度上促進(jìn)了小蓬竹的遺傳變異，增加了小蓬竹的遺傳多樣性，從而提高小蓬竹對特殊喀斯特生境的適應(yīng)能力。

由Gst計(jì)算得基因流Nm=0.704 5<1，表明各個(gè)小生境之間并無基因流動(dòng)。

表4不同小生境小蓬竹的遺傳分化

Table4GeneticdifferentiationofA.luodianensisindifferentmicrohabitats

指數(shù)Indexes居群內(nèi)基因多樣性Gene diversity of species(Ht)居群總的基因多樣性Gene diversity within populations(Hs)遺傳分化系數(shù)Coefficientof gene differentiation(Gst)基因流Estimate of gene flow(Nm)平均數(shù)Mean number0.29230.17100.41510.7045標(biāo)準(zhǔn)差Standarddeviation0.03590.0206

GmorGcs,Nm=0.5(1-Gst)/Gst

2.3 遺傳相似性與聚類分析

根據(jù)5類小生境間的Nei’s遺傳相似性系數(shù)和Nei’s遺傳距離，對各小生境間小蓬竹的遺傳相似性程度定量地進(jìn)行分析，結(jié)果表明：

各類小生境間遺傳相似性系數(shù)(I)在0.777 3～0.999 4，平均為0.865 6，遺傳距離(D)在0.000 6～0.251 9，平均為0.148 3。由于是小生境，其遺傳相似性系數(shù)都較大，遺傳距離均較小，應(yīng)分別大于和小于不同天然地理大居群的對應(yīng)值，這有待進(jìn)一步研究證明。其中，石溝(SG)和土面(TM)兩類小生境間小蓬竹的遺傳相似性系數(shù)(I)最大，為0.999 4，遺傳距離最小，D=0.000 6，說明這兩類小生境間小蓬竹的遺傳相似度最高，變異分化程度最低。遺傳距離(D)最大的是石洞(SD)和石縫(SF)生境，其遺傳距離D=0.251 9，說明在5類小生境中，石洞(SD)和石縫(SF)生境間小蓬竹的遺傳變異度最高，相似度最低，遺傳分化程度最大(表5)。

表5不同小生境中小蓬竹的Nei’s遺傳相似性系數(shù)和遺傳距離

Table5Nei’sunbiasedmeasuresofgenticidentityanddistanceofA.luodianensisindifferentmicrohabitats

小生境MicrohabitatsTMSGSFSCSDTM****0.99940.83120.84760.8429SG0.0006****0.79210.82550.8297SF0.18490.2331****0.81080.7773SC0.16540.19170.2097****0.9722SD0.17090.18670.25190.0282****

根據(jù)Nei’s遺傳相似性和遺傳距離，使用NTSYSpc V2.10e軟件通過UPGMA法構(gòu)建了5類小生境中小蓬竹的遺傳關(guān)系聚類圖。聚為同一類者，相應(yīng)的遺傳特性較一致，遺傳關(guān)系最接近，遺傳相似性最高，根據(jù)生物遺傳多樣性與生境之間存在的互作關(guān)系，可猜測對應(yīng)小生境之間生態(tài)因子的差異性亦為最小。

聚類結(jié)果(圖3)顯示，首先5類小生境的小蓬竹聚為兩大類：石縫(SF)單獨(dú)為一類，土面(TM)與石溝(SG)、石槽(SC)和石洞(SD)聚為一類。說明石縫(SF)小生境小蓬竹的遺傳多樣性與其他4類小生境中的遺傳多樣性之間存在較大差異。其次，土面(TM)與石溝(SG)相聚，石槽(SC)與石洞(SD)相聚，然后四者共同相聚為一類，與石縫(SF)對應(yīng)，說明土面(TM)小生境與石溝(SG)小生境中小蓬竹的遺傳多樣性相似，石槽(SC)與石洞(SD)小生境中小蓬竹的遺傳多樣性相似。聚類結(jié)果與遺傳相似度計(jì)算結(jié)果相符。

圖3 基于RAPD標(biāo)記的5類小生境中小蓬竹的UPGMA聚類圖Fig.3 UPGMA dendrogram for 5 different microhabitatsof A.luodianensisbased on RAPD markers

3 討論

3.1 喀斯特生境對小蓬竹遺傳多樣性的影響

喀斯特生境系統(tǒng)是由各類不同小生境共同組建而成的復(fù)合整體，該類生境的生態(tài)有效性取決于各類小生境之間的組建情形，小生境差異及其復(fù)合整體的多樣性又直接決定了喀斯特生境的高度異質(zhì)性。而極危物種小蓬竹則專一分布于這類生境破碎化、高度異質(zhì)且土壤尤為稀薄的喀斯特山地。

本研究對5類小生境中的小蓬竹進(jìn)行了遺傳分析，結(jié)果表明，不同小生境間的遺傳分化系數(shù)Gst=0.415 1，基因流Nm=0.704 5，即不同小生境間小蓬竹的遺傳變異度較高。不同小生境間遺傳相似系數(shù)變化范圍為0.777 3～0.999 4，平均為0.865 6；遺傳距離D從0.000 6～0.251 9不等，平均為0.148 3。5類小生境的小蓬竹聚為兩大類：石縫(SF)單獨(dú)為一支；首先土面(TM)與石溝(SG)相聚，石槽(SC)與石洞(SD)相聚，然后四者相聚為一支，與石縫(SF)對應(yīng)，聚為一類的親緣關(guān)系較近。進(jìn)一步說明，不同小生境之間具較高遺傳多樣性。本文作者也曾在小蓬竹所生長的不同小生境條件土壤的理化性質(zhì)方面有所研究，發(fā)現(xiàn)不同小生境的土壤，其含水率、有機(jī)質(zhì)、水解性氮、速效鉀、有效磷等都存在較大差距，其中屬含水量差異最大[21]。因此，不同小生境的環(huán)境因子差異可能是造成小蓬竹遺傳多樣性差異的原因，小生境生態(tài)因子差異與小蓬竹遺傳多樣性之間的關(guān)系有待進(jìn)一步探究。

3.2 小蓬竹瀕危機(jī)制分析

小蓬竹是編入《IUCN紅色名錄》和《中國物種紅色名錄》的極危竹種，馬乃訓(xùn)和陳光才[22]在其“竹類植物瀕危等級標(biāo)準(zhǔn)”中亦將小蓬竹歸為Ⅰ級保護(hù)物種即瀕危物種。

根據(jù)本研究的RAPD分析結(jié)果，目前為止小蓬竹尚且保存較高的遺傳多樣性，其遺傳變異也仍然主要存在居群內(nèi)部。該結(jié)論證明，小蓬竹種群自身的遺傳變異不是致使其瀕危的主要原因。由此證明遺傳基礎(chǔ)并非致使小蓬竹瀕危的關(guān)鍵因素，人為活動(dòng)等外界干擾才是造成小蓬竹瀕危的主要原因。根據(jù)本研究組的調(diào)研，在二十世紀(jì)末期，小蓬竹原生地的造紙廠對其進(jìn)行過度利用，影響極其嚴(yán)重的是新生竹幼苗被大量砍伐，直接導(dǎo)致了其無性系種群的迅速衰退，成竹不斷衰老、死亡，種群規(guī)模劇烈下降；另外，小蓬竹分布地居民有意或無意地?zé)叫袨橐矊π∨钪窬尤涸斐闪藲缧缘膲钠啤?/p>

小蓬竹生境質(zhì)量持續(xù)下降是促使其種群瀕危的直接原因。野外調(diào)研發(fā)現(xiàn)，小蓬竹特殊的生境選擇也對自身造成了威脅。在同經(jīng)緯度地區(qū)，小蓬竹只在喀斯特石山分布，泥土山坡則完全不生長，但它對生境的水分含量又有一定要求，所以，分布區(qū)干旱也會(huì)造成成片小蓬竹森林消失。惡劣生境條件下，小蓬竹會(huì)采取開花結(jié)籽的方式保存物種，然而遭遇連續(xù)干旱氣候，產(chǎn)生的種子也無法及時(shí)發(fā)芽繁衍以恢復(fù)種群。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，不少曾經(jīng)繁茂的居群，歷經(jīng)連續(xù)干旱、冰凍后便只剩斑點(diǎn)分布甚至蕩然無存。另外，小蓬竹瀕危的原因與自身繁殖能力和特殊的繁殖方式差亦有很大關(guān)系。小蓬竹是一次性開花竹種，主要以分蔸方式繁殖，一旦開花就立即死亡，種群更新與恢復(fù)極其困難。

雖然小蓬竹的瀕危機(jī)制主要是人為干擾、生境破壞，遺傳多樣性居于次要地位，但生物體本身與其生存環(huán)境之間是相互作用、相互影響的，小蓬竹生長立地條件的破壞和生境退化等也會(huì)造成種群數(shù)量下降和種群隔離，最終導(dǎo)致物種遺傳多樣性降低甚至整個(gè)物種的滅絕。

3.3 小蓬竹種群保護(hù)策略

保護(hù)珍稀瀕危物種的關(guān)鍵，在于保護(hù)它們的遺傳多樣性和進(jìn)化潛能。物種遺傳變異度愈高，多樣性越豐富，越能適應(yīng)環(huán)境，其進(jìn)化潛能也更高。

科學(xué)制定珍稀瀕危物種保護(hù)策略，前提需要大量、深入地研究和充分了解該物種的遺傳多樣性與遺傳結(jié)構(gòu)，而兩個(gè)遺傳變異主要發(fā)生在居群之間和居群之內(nèi)的物種，在對其開展保護(hù)性研究時(shí)所采取的取樣與保護(hù)方針應(yīng)是完全不相同的。葛頌的研究表明，基因流弱，遺傳分化度較高，Gst=0.60的物種，實(shí)際研究中最低需取6個(gè)居群，方可獲得該物種95%的遺傳多樣性，但若是基因流較強(qiáng)，遺傳分化度較低，Gst=0.20的物種，則做2個(gè)居群的取樣即可得到相同的效果[23]。

小蓬竹種的Gst值為0.323 1，種內(nèi)具有豐富的遺傳多樣性，故在取樣時(shí)須取3或4個(gè)居群，取樣的數(shù)目固定時(shí)，居群內(nèi)的取樣數(shù)量可適當(dāng)減少。在制定保護(hù)措施時(shí)，要保護(hù)盡可能多的居群，須高度重視就地保護(hù)。由于小蓬竹原分布區(qū)生境惡劣，亦可考慮科學(xué)合理地實(shí)行遷地保護(hù)，并不斷加強(qiáng)和深化小蓬竹遺傳學(xué)、生殖生態(tài)學(xué)、植物生理學(xué)、種苗育林等方面的研究，實(shí)行扦插繁育、組織培養(yǎng)和遺傳育種等。建立小蓬竹快速繁殖體系是對其進(jìn)行切實(shí)保護(hù)與合理開發(fā)利用急需開展的研究。