曾裕 李偉松 楊立峰 田勝慧 廣東省醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所 （廣東 廣州 510663）

內(nèi)容提要： 目的：研究一次性使用血液灌流器不同樣品制備方法所獲得的供試液對(duì)其熱原質(zhì)檢測(cè)的影響。方法：參照GB/T14233.2-2005和GB/T16886.12-2005的試驗(yàn)原則，對(duì)一次性使用血液灌流器不同生產(chǎn)企業(yè)的不同批次不同規(guī)格，運(yùn)用不同的樣品制備方法進(jìn)行了熱原檢測(cè)。結(jié)果與結(jié)論：模擬臨床使用的樣品制備方法適合灌流器的生物相容性試驗(yàn)。

不同樣品制備方法所獲得的供試液對(duì)其熱原檢測(cè)有一定的影響[1]。一般制樣的方法是參照GB/T14233.2-2005和GB/T16886.12-2005的試驗(yàn)原則，但是對(duì)于特殊性狀的醫(yī)療器械產(chǎn)品的制樣需要結(jié)合各自的產(chǎn)品特性以及臨床使用來進(jìn)行制樣[2-4]。結(jié)合實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行研究。

血液灌流器，是開展血液灌流必不可少的醫(yī)療器械。灌流器外殼為塑料，內(nèi)容物為已處理包膜吸附劑，屬于三類高風(fēng)險(xiǎn)醫(yī)療器械，主要用于血液凈化治療。YY 0464-2009《一次性使用血液灌流器》[5]行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中，要求要做熱原試驗(yàn)，但并未有具體的樣品制備方法，本文主要討論制樣方法對(duì)熱原試驗(yàn)的影響。

1.材料與方法

1.1 一般材料

試驗(yàn)樣品：一次性使用血液灌流器；浸提介質(zhì)：生理鹽水；試驗(yàn)動(dòng)物：新西蘭大白兔，健康無孕，體重不低于2.0kg（廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心）。

1.2 方法

自兔耳緣靜脈緩緩注入規(guī)定劑量并溫?zé)嶂良s38°C的樣品浸提液。注射完畢，每隔30min測(cè)量體溫1次，共6次。以6次體溫中最高的1次減去正常體溫，即為該兔體溫的升高溫度[2]。

1.3 結(jié)果評(píng)價(jià)

3只兔子體溫升高均低于0.6°C，且體溫升高總和低于1.3°C。在該試驗(yàn)條件下，試驗(yàn)樣品浸提液熱原檢查合格。

2.不同的制樣方法

①參照GB16886.12-2005，不規(guī)則產(chǎn)品浸提比例0.2g/mL，對(duì)外殼進(jìn)行切割后（型號(hào)規(guī)格HA130、HA330），取20g產(chǎn)品的各部件，加入100mL的生理鹽水，在37°C下浸提72h。②取滅菌后的灌流器（型號(hào)規(guī)格：HA130、HA150、HA330），按產(chǎn)品說明書規(guī)定的鹽水量（3000mL）預(yù)沖，再用生理鹽水充滿灌流器，37°C下浸提72h，取浸提液備用。③3000mL生理鹽水沖洗灌流器后收集100mL作為檢驗(yàn)液。④直接取填充液作為供試液。

3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果

按照制樣方法①，熱原實(shí)驗(yàn)結(jié)果不合格，所有兔子的反應(yīng)異常，三只兔子體溫升高均高于0.6°C，三只兔子體溫升高總和高于1.3°C。

用方法②制樣后實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)過程兔子反應(yīng)正常，兔子體溫升高也正常。但是也有方法②做不合格的產(chǎn)品（型號(hào)規(guī)格：WG130）。整改的方法是制樣方法③，整改后實(shí)驗(yàn)結(jié)果是三只兔體溫升高均低于0.6°C。

有很多產(chǎn)品（型號(hào)規(guī)格如下表1），按方法④進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，按家兔體重每公斤注射10mL，注射完畢，新西蘭兔反應(yīng)正常，三只兔子體溫升高均低于0.6°C，且體溫升高總和低于1.3°C。反應(yīng)出他們的填充液是沒有熱原反應(yīng)的。見表1。

4.討論

按照GB16886.12-2005，不規(guī)則產(chǎn)品浸提比例0.2g/mL的制樣方案，顯然對(duì)于一次性使用灌流器來說是不合適的，以至于現(xiàn)在所有的灌流器產(chǎn)品基本上都不會(huì)采用這種方法來制備樣品試驗(yàn)液。因?yàn)楣嗔髌鲀?nèi)裝的吸附劑大都是具有輕小、易黏附的特性，切割取出后容易污染，再加上被破壞的外殼，稱取的比例不易把握。在稱取樣品時(shí)，也很容易使樣品污染，導(dǎo)致熱原的發(fā)生。

那么灌流器的樣品制備方法就要參照GB/T16886.12-2005《醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià) 第12部分：樣品制備與參照樣品》[3]3.14，模擬使用浸提：符合GB/T16886本部分要求的浸提，通過評(píng)價(jià)在常規(guī)使用某一器械過程中，患者或者使用者接受可瀝物質(zhì)水平而使用的一種模擬產(chǎn)品使用的浸提。取填充液作為供試液和預(yù)沖洗后灌滿浸提得出浸提液，實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明，這兩種的樣品制備方法可取。這是企業(yè)根據(jù)自己的灌流器的特性制定的制樣方案。填充液是已經(jīng)對(duì)灌流器內(nèi)吸附劑（樹脂）進(jìn)行過沖洗排污后密封包裝進(jìn)血室內(nèi)的無菌液體（符合《中華人民共和國(guó)藥典》[6]2015年版要求的注射用水），保證了無菌狀態(tài)下保存，不受污染的情況下，直接用填充液進(jìn)行試驗(yàn)。而選取預(yù)沖后灌滿浸提的操作，是參照一次性使用灌流器的使用說明書中[安裝和使用說明]“治療前的準(zhǔn)備”和“預(yù)沖”[7]。實(shí)際使用中也有血漿灌流的方法：“連接灌流管路，用3000mL生理鹽水沖洗管路[8]。自患者肘正中靜脈插管雙腔管，動(dòng)脈血經(jīng)血漿分離器后，形成血循環(huán)和血漿循環(huán)，血漿經(jīng)過灌流器。”模擬臨床使用的沖洗方法，預(yù)沖后灌滿取浸提液備用，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)正常。

樣品制備的方法，都是要在保證樣品不受污染，并且在制樣過程中，沒有使樣品及浸提液受污染的情況下進(jìn)行。由于它組成成分的特殊性，以及在制樣過程中不易污染的操作，在熱原實(shí)驗(yàn)的樣品制備時(shí)，可以參照樣品的使用說明書上的操作進(jìn)行制樣，對(duì)它的“治療前準(zhǔn)備”與“預(yù)沖”均要參考，使樣品的制備盡可能與實(shí)際臨床應(yīng)用相契合。若是有實(shí)驗(yàn)過程的異常，應(yīng)采取復(fù)試來進(jìn)行驗(yàn)證。

表1. 產(chǎn)品型號(hào)規(guī)格(mL)