周建棟 許慧 方旻 謝新藝 廣東省醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗所包裝材料容器檢驗中心 （廣東 廣州 510663）

內(nèi)容提要： 借助高效液相色譜儀對注射用布比卡因凝膠中抗氧劑1010和抗氧劑1076的含量進行測定。結果表明，新方法檢測抗氧劑1010和抗氧劑1076分別在1.00～40.0μg/mL和2.04～81.6μg/mL范圍內(nèi)線性關系良好，相關系數(shù)都為0.9999，抗氧劑1010和抗氧劑1076在注射用布比卡因凝膠中平均加標回收率為90.4%（RSD=4.76%）和86.4%（RSD=3.95%），該方法靈敏快速，操作簡便，重復性好，可用于檢測包裝材料中抗氧劑1010和抗氧劑1076在注射用布比卡因凝膠中的遷移情況。

隨著經(jīng)濟的快速發(fā)展，藥品包裝材料與藥物相容性研究越來越受到關注，國家對藥品包裝材料與藥物相容性研究也越來越重視。丁基膠塞是藥品包裝中瓶裝密封材料的重要組成部分，特別適于用作藥品密封，為藥物質(zhì)量提供了更為可靠的保證[1]。但在使用過程中，仍然存在與藥物的相互作用，甚至影響藥物的物化性質(zhì)和藥理作用，主要存在藥物吸附、膠塞浸出物和膠塞穿刺落屑等問題[2]。其中多酚抗氧劑1010和1076是當今國內(nèi)外塑料抗氧劑的主導產(chǎn)品，能有效地防止聚合物材料在長期老化過程中的熱氧化降解，同時也是一種高效的加工穩(wěn)定劑，能改善聚合物材料的性能。不過抗氧劑的結構復雜且性質(zhì)不穩(wěn)定，可能會與藥物相互作用，導致藥物性質(zhì)發(fā)生改變，另一方面，抗氧劑也有可能從包裝材料中遷移到藥液中危害人體[3,4]。歐洲藥典對抗氧劑的含量進行了嚴格的限定[5]。本文借鑒歐洲藥典的方法，建立一種測定注射用布比卡因凝膠中抗氧劑1010、抗氧劑1076的含量的方法。

1.材料與方法

1.1 一般材料

儀器：①高效液相色譜儀（日本島津公司LC-20A）；②萬分之一電子天平；③恒溫水浴鍋；④臺式低速離心機；⑤旋轉蒸發(fā)器（配恒溫水浴鍋）；⑥循環(huán)水真空泵；⑦色譜柱（Inertsil?ODS-SP，4.6mm×250mm，5μm）。

試劑：①抗氧劑1010標準品：四[β-（3，5-二叔丁基-4-羥基苯基）丙酸]季戊四醇酯，C73H108O12，CAS：6683-19-8，SIGMA-ALDRICH，批號：MKBV3769V；②抗氧劑1076標準品：β-（3，5-二叔丁基-4-羥基苯基）丙酸正十八碳醇酯，C35H62O3，CAS：2082-79-3，SIGMA-ALDRICH，批號：MKBT6389V；③甲醇、乙腈、四氫呋喃均為色譜純；④水為超純水。

表1. 梯度洗脫程序

1.2 方法

標準液制備。①標準儲備液：準確稱取抗氧劑1010標準品100.0mg和抗氧劑1076標準品204.0mg于10mL容量瓶中，用混合液（乙腈：四氫呋喃=1：1）溶解稀釋定容至刻度，搖勻。從中準確移取1.00mL于10mL容量瓶，用混合液（乙腈：四氫呋喃=1：1）稀釋定容至刻度，搖勻，即得標準儲備液。②系列標準溶液：用混合液（乙腈：四氫呋喃=1：1）將標準儲備液逐級稀釋至抗氧劑1010濃度為1.00、2.00、4.00、10.0、20.0、40.0μg/mL和抗氧劑1076濃度為2.04、4.08、8.16、20.4、40.8、81.6μg/mL的系列標準溶液。

色譜條件。色譜柱：Inertsil?ODS-SP，4.6mm×250mm，5μm；流動相：四氫呋喃：乙腈：水（初始比例：30：50：20），梯度洗脫（程序見表1）；流速：1.5mL/min；檢測波長：280nm；柱溫：40°C；進樣量：20μL。

樣品前處理。準確稱量0.50g注射用布比卡因凝膠于離心管，于70°C水浴鍋中加熱為液體狀，加入4.0mL甲醇，充分震蕩萃取，于冰水浴中冷卻2min，置于離心機4000r/min離心3min，取上清液于燒瓶，重復萃取一次，合并萃取液于旋轉蒸發(fā)器45°C水浴負壓旋轉蒸干，用5.0mL混合液（乙腈：四氫呋喃=1：1）溶解樣品，用0.45μm濾膜過濾后為待測樣品。

2.結果與討論

2.1 專屬性試驗

分別取標準溶液、待測樣品進樣20μL，進行HPLC測定，記錄色譜圖，由圖可見抗氧劑1010的保留時間為13.4min，抗氧劑1076的保留時間為18.0min，空白無干擾。

2.2 注射用布比卡因凝膠中抗氧劑精密度試驗

重復性：平行制備6份注射用布比卡因凝膠加標低濃度樣品（參照注射用布比卡因凝膠回收率試驗制備），供試液經(jīng)0.45μm濾膜過濾后進樣20μL，進行HPLC測定。

中間精密度：在不同天由不同分析人員平行制備6份注射用布比卡因凝膠加標低濃度樣品（參照注射用布比卡因凝膠回收率試驗制備），供試液經(jīng)0.45μm濾膜過濾后進樣20μL，進行HPLC測定。

圖1. 標準溶液色譜圖(已扣除空白背景)

表2. 注射用布比卡因凝膠中抗氧劑精密度試驗結果

2.3 線性試驗

分別取系列標準溶液進樣20μL，進行HPLC測定，每個濃度測定2次，抗氧劑1010的線性方程為：C=2.5387×10-4A+2.6240×10-2，相關系數(shù)R2=0.9999，表明抗氧劑1010在1.00～40.0μg/mL范圍內(nèi)線性良好；抗氧劑1076的線性方程為：C=4.2303×10-4A–1.1029×10-1，相關系數(shù)R2=0.9999，表明抗氧劑1076在2.04～81.6μg/mL范圍內(nèi)線性良好。

2.4 檢出限與定量限

取標準溶液用混合液（乙腈：四氫呋喃=1：1）稀釋測定，記錄色譜圖，當信噪比S/N為3時為儀器檢出限，抗氧劑1010和抗氧劑1076的儀器檢出限分別為0.200μg/mL和0.408μg/mL。當信噪比S/N為10時為儀器定量限，抗氧劑1010和抗氧劑1076的儀器定量限分別為0.600μg/mL和1.63μg/mL。

2.5 注射用布比卡因凝膠回收率試驗

準確稱量0.50g注射用布比卡因凝膠于離心管，共制備9份，分別加入標準溶液（抗氧劑1010：100μg/mL和抗氧劑1076：204μg/mL）50μL、100μL、200μL，每種濃度3份，照1.2.3樣品前處理方法制備注射用布比卡因凝膠加標低、中、高濃度樣品，抗氧劑1010三個加標水平回收率為84.2%～95.8%（平均90.4%，RSD=4.76%），抗氧劑1076為83.3%～94.3%（平均86.4%，RSD=3.95%），介于80%～120%，滿足準確度要求。

2.6 樣品測定

利用本方法對某企業(yè)生產(chǎn)的注射用布比卡因凝膠（0個月樣品、加速試驗3個月樣品和長期試驗3個月樣品）進行測定。樣品中均未檢出抗氧劑1010和抗氧劑1076。

3.結論

方法學驗證試驗表明，采用HPLC法測定注射用布比卡因凝膠中抗氧劑1010和抗氧劑1076的含量，方法操作較為簡便，重復性好，準確可靠，能夠比較好地監(jiān)控包裝材料中抗氧劑1010和抗氧劑1076在注射用布比卡因凝膠中的遷移情況。為注射用布比卡因凝膠中抗氧劑的檢測提供了技術支持。?