譚紅霞，馬良，郭婷，陳露，劉微，謝盛莉

(西南大學(xué) 食品科學(xué)學(xué)院，重慶，400715)

玉米赤霉烯酮(zearalenone，ZEN，又稱ZEA，F(xiàn)-2毒素)，是由不同絲狀真菌如禾谷鐮刀菌、鐮刀菌和鐮孢鐮刀菌產(chǎn)生的一種非甾體霉菌毒素，是全球玉米、大米、小麥和其他谷物中最常見(jiàn)的真菌毒素之一[1]。ZEN是內(nèi)分泌干擾分子，對(duì)動(dòng)物和人類(lèi)有外源性雌激素作用，易導(dǎo)致不孕癥、流產(chǎn)以及青春期前女孩兒早熟[2]。此外，ZEN還具有血液毒性、肝毒性、遺傳毒性、免疫毒性、基因毒性以及致癌性，ZEN與子宮內(nèi)膜增生，子宮內(nèi)膜腫瘤以及宮頸癌有關(guān)，國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)已將其列為Ⅲ類(lèi)致癌物[3]。

ZEN主要污染谷物(例如玉米，大麥，黑麥，小麥和高粱中)，在食用油，香料，牛奶，啤酒，飲用水，早餐麥片，面包，意大利面等中也可以檢測(cè)到ZEN[4]。研究發(fā)現(xiàn)，巴西、歐洲、地中海、亞太地區(qū)以及地中海等地區(qū)，在大麥、啤酒、高粱、稻谷、食用油等中，ZEN的陽(yáng)性檢出率均高于60%[5-6]。在2012～2014年，中國(guó)中部地區(qū)的飼料樣品的污染水平為90.2%[7]。在2013～2015年間從中國(guó)各省收集的飼料原料和全飼料中，ZEN陽(yáng)性樣本的百分比為92.3%[8]。在另一項(xiàng)中國(guó)調(diào)查中，2016～2017年間不同省份飼料中ZEN的發(fā)生率為88%，平均濃度范圍為2.3～729.2 μg/kg，其中10.8%的樣品超過(guò)我國(guó)國(guó)標(biāo)規(guī)定的限量濃度(60 μg/kg)[9]。ZEN的污染范圍較廣，可以通過(guò)植物來(lái)源的食物直接進(jìn)入人類(lèi)食物鏈，間接通過(guò)動(dòng)物來(lái)源的食物進(jìn)入人類(lèi)食物鏈[10]。據(jù)報(bào)道，嬰兒和兒童比成年人更容易受到ZEN的影響[11]。為了保護(hù)消費(fèi)者的健康，歐盟限定了食品中ZEN的最高殘留量，未加工的玉米中為350 μg/kg，以玉米食物和谷物為基礎(chǔ)的嬰兒食品中為20 μg/kg[12]。中國(guó)的谷物及其制品的最高殘留限量為60 μg/kg[13]。為了食品安全和畜牧業(yè)的發(fā)展，迫切需要探索靈敏、快速和便捷的分析方法來(lái)監(jiān)測(cè)食品中威脅人體健康的ZEN。

生物傳感器是指以生物成分(DNA，真菌毒素抗體，酶，微生物，細(xì)胞，組織等)為敏感元件，經(jīng)分子識(shí)別，發(fā)生生物學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生的信號(hào)繼而被相應(yīng)的物理或化學(xué)換能器轉(zhuǎn)變成可定量和可處理的電化學(xué)、光學(xué)、電磁學(xué)等信號(hào)，再經(jīng)二次儀表放大輸出，便可知道待測(cè)物的濃度。通常根據(jù)分子識(shí)別元件或信號(hào)轉(zhuǎn)換方式來(lái)對(duì)生物傳感器分類(lèi)或命名為：信號(hào)傳導(dǎo)型生物傳感器、分子識(shí)別型生物傳感器[14]。基于生物傳感器的檢測(cè)技術(shù)具有高專一性、高選擇性、高靈敏度、便攜性和實(shí)時(shí)分析的性能，在ZEN檢測(cè)方面具有很好的發(fā)展前景。目前，針對(duì)檢測(cè)真菌毒素的生物傳感器技術(shù)已有較多的研究，主要集中在黃曲霉毒素B1(aflatoxin B1, AFB1)[15]、赭曲霉毒素A(ochratoxin A, OTA)[16]、脫氧雪腐鐮刀烯醇(deoxynivalenol, DON)[17]、ZEN等毒素，其中ZEN的檢測(cè)是近幾年的研究熱點(diǎn)之一。本文總結(jié)了用于ZEN檢測(cè)的信號(hào)傳導(dǎo)型生物傳感器(電化學(xué)生物傳感器、表面增強(qiáng)拉曼散射傳感器、表面等離子體共振生物傳感器、熒光生物傳感器)、分子識(shí)別型生物傳感器(核酸適配體生物傳感器、細(xì)胞傳感器)，并分析了目前存在的問(wèn)題和未來(lái)研究的趨勢(shì)。

1 信號(hào)傳導(dǎo)型生物傳感器

1.1 電化學(xué)生物傳感器

電化學(xué)生物傳感器通常以電極作為轉(zhuǎn)化元件，ZEN抗體、ZEN適配體、酶等生物分子作為識(shí)別元件，將生物分子間特異性識(shí)別產(chǎn)生的各種物理、化學(xué)等信號(hào)轉(zhuǎn)換成電阻、電位、電流或電容等物理形式作為特征檢測(cè)信號(hào)輸出，從而實(shí)現(xiàn)小麥、飼料、玉米等樣品中ZEN的檢測(cè)[18]。納米材料放大技術(shù)、酶催化放大技術(shù)等信號(hào)放大策略運(yùn)用到傳感器中是提高ZEN檢測(cè)的靈敏度最常用的方法。

基于納米材料放大技術(shù)的電化學(xué)生物傳感器應(yīng)用的納米材料主要有碳納米材料、鈀納米材料、金納米材料、多壁碳納米材料等。LIU等[19]利用金銀鉑納米粒子的高電子轉(zhuǎn)移速率和介孔碳合適的孔排列和優(yōu)異的導(dǎo)電性，對(duì)玻碳電極進(jìn)行修飾，建立了電流型免疫傳感器，該傳感器表現(xiàn)出低檢測(cè)限(1.7 pg/mL)，寬線性范圍(從0.005～15 ng/mL)以及良好的穩(wěn)定性，重現(xiàn)性和選擇性。AFZALI等[20]采用鈀納米顆粒和導(dǎo)電聚合物離子液體組成的聚合物納米復(fù)合材料對(duì)玻碳電極進(jìn)行改性，提高了傳感器對(duì)ZEN的電催化活性。目前，納米材料放大技術(shù)中多壁碳納米管是研究較多的納米材料。AFZALI等[21]利用多壁碳納米管修飾改性后的碳糊電極，檢出限為0.58 ng/mL。RIBERI等[22]利用碳納米管/聚乙烯亞胺分散體修飾碳網(wǎng)印刷電極，開(kāi)發(fā)電化學(xué)免疫傳感器,對(duì)玉米樣品中的ZEN進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)范圍為1×10-4～1×10-1ng/mL，檢測(cè)限(0.15 pg/mL)和靈敏度(2 pg/mL)方面表現(xiàn)出非常好的分析性能。LIU等[23]采用多壁碳納米管和金-鉑納米粒子修飾的玻璃碳電極上，并且利用葡萄球菌蛋白A將抗體定向固定在電極上，研發(fā)了安培型電化學(xué)傳感器，該方法顯示從0.005～50 ng/mL的線性范圍，檢測(cè)限為1.5 pg/mL，為實(shí)際食品樣品中ZEN的監(jiān)測(cè)提供了一種可行，可靠的方法。SADRABADI等[24]首次利用聚二烯丙基二甲基氯化銨修飾的多壁碳納米管將石墨電極改性，同時(shí)引入DNA，利用ZEN與DNA在電極表面的相互作用通過(guò)腺嘌呤信號(hào)的變化來(lái)檢測(cè)牛奶和小麥樣品中的ZEN，該傳感器方法檢測(cè)限可以低至0.005 ng/mL。

酶催化放大技術(shù)也是電化學(xué)信號(hào)放大技術(shù)中運(yùn)用較成熟的技術(shù)之一，通過(guò)催化底物發(fā)生氧化還原反應(yīng)產(chǎn)生的電子傳遞來(lái)增強(qiáng)電化學(xué)信號(hào)，能夠顯著提高電化學(xué)生物傳感器的靈敏度。常用的酶有葡萄糖氧化酶、辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶等。XU等[25]利用堿性磷酸酶放大技術(shù)，建立了電化學(xué)間接競(jìng)爭(zhēng)免疫傳感器，該傳感器的設(shè)計(jì)與檢測(cè)原理如圖1所示。首先，由羧基官能化的cMWCNTs/Chit修飾玻碳電極以擴(kuò)增免疫傳感器信號(hào)并降低檢測(cè)限，將ZEN-牛血清白蛋白(ZEN-BSA)與活化的cMWCNTs/Chit膜共價(jià)偶聯(lián)，在過(guò)量的ZEN抗體固定化過(guò)程中，ZEN-BSA與游離ZEN之間發(fā)生間接競(jìng)爭(zhēng)。與抗體-堿性磷酸酶一起孵育后，當(dāng)將α-磷酸萘酯底物加入作為氧化還原介體的二乙醇胺緩沖液中時(shí)，用差示脈沖伏安法進(jìn)行測(cè)量。用該傳感器對(duì)谷物和飼料樣品中ZEN進(jìn)行測(cè)定，具有較高的靈敏度，線性范圍為10～1 000 ng/mL，檢測(cè)限為4.7 pg/mL。

EDC+NHS-交聯(lián)劑；α-NP；α-磷酸萘酯；cMWCNTs/Chit-多壁碳納米管和殼聚糖組成的納米復(fù)合材料圖1 電化學(xué)免疫傳感器的傳感示意圖Fig.1 Sensing diagram of electrochemical immunosensor

將光電化學(xué)分析技術(shù)(photoelectrochemical, PEC) 和和電化學(xué)發(fā)光技術(shù)(electrochemiluminescence, ECL)應(yīng)用到電化學(xué)生物傳感器中進(jìn)行信號(hào)放大，提高檢測(cè)靈敏度也是目前研究熱點(diǎn)之一。PEC是指將光化學(xué)與電化學(xué)合并，利用光作為激發(fā)光源和光電流作為檢測(cè)信號(hào)的檢測(cè)方式[26]。在PEC檢測(cè)中，利用光來(lái)激發(fā)光敏物質(zhì)，并且電信號(hào)被轉(zhuǎn)換為檢測(cè)讀數(shù)，使用兩種不同形式的信號(hào)進(jìn)行激發(fā)和檢測(cè)，由于與其相關(guān)的背景減少，該技術(shù)具有潛在的高靈敏度。LIU等[27]采用光電化學(xué)分析技術(shù)，利用有序介孔氧化鈷的氧化還原催化特性及多巴胺修飾二氧化鈦微晶體形成自增強(qiáng)光電陰極矩陣，從而研發(fā)了靈敏的光電化學(xué)免疫傳感器，對(duì)糧食及飼料中的ZEN進(jìn)行測(cè)定。該傳感器的線性范圍為1×10-6～20 ng/mL，并且特異性，精密度和重復(fù)性好。ECL技術(shù)因其靈敏度高，儀器簡(jiǎn)單，ECL反應(yīng)可控性強(qiáng)，成本低等特點(diǎn)，在分析檢測(cè)中具有很好的發(fā)展前景[28]。ZHANG等[29]采用電化學(xué)發(fā)光技術(shù)，在四方金紅石型TiO2介晶的雙重作用下，建立了一種新型三明治型電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器，實(shí)現(xiàn)了ZEN的靈敏檢測(cè)，用于牛奶樣品中ZEN的檢測(cè)，回收率在94.2%～100.1%，重要的是，該方法可能為其他毒素檢測(cè)開(kāi)辟了一條新途徑。

1.2 表面增強(qiáng)拉曼散射傳感器(surface-enhaced raman scattering, SERS)

SERS是以生物成分為敏感元件或探測(cè)對(duì)象，研究生物分子間相互作用的重要工具之一，可以提供一個(gè)非破壞性和超靈敏的檢測(cè)甚至低至一個(gè)單一的分子水平。LIU等[30]利用競(jìng)爭(zhēng)性免疫反應(yīng)，研發(fā)了表面增強(qiáng)拉曼散射傳感器，并且成功應(yīng)用于ZEN污染的多種天然飼料樣品的分析，檢測(cè)范圍為1～1 000 pg/mL，檢測(cè)限為1 pg/mL，具有很大的實(shí)際樣品檢測(cè)潛力。該傳感器的設(shè)計(jì)與檢測(cè)原理如圖2所示。

圖2 表面增強(qiáng)拉曼散射傳感器的檢測(cè)原理示意圖Fig.2 Schematic diagram of detection principle of surface-enhanced Raman scattering sensor

第一步(圖2-A)，制備SERS納米探針。第二步(圖2-B)，進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性SERS免疫測(cè)定。相同體積的ZEN標(biāo)準(zhǔn)溶液和SERS納米針同時(shí)滴在捕獲基質(zhì)的凹面上，此時(shí)固定在捕獲底物上的玉米赤霉烯酮-牛血清白蛋白與懸浮在SERS納米探針上的ZEN抗體競(jìng)爭(zhēng)偶聯(lián)標(biāo)準(zhǔn)溶液中的ZEN抗原。如果納米探針在捕獲底物上結(jié)合，則顯微拉曼光譜儀可從底物獲得4,4’-聯(lián)吡啶拉曼信號(hào)，檢測(cè)樣品中的ZEN。

1.3 表面等離子體共振生物傳感器(surface plasmon resonance, SPR)

SPR促進(jìn)了在換能器表面上發(fā)生的表面受限分子相互作用的檢測(cè)，具有連續(xù)實(shí)時(shí)響應(yīng)，無(wú)標(biāo)記使用，高特異性和靈敏度等許多優(yōu)點(diǎn)。EDUPUGANTI等[31]通過(guò)噬菌體分離重組玉米赤霉烯酮的單鏈抗體，研發(fā)了表面等離子體共振生物傳感器，對(duì)高粱中的ZEN進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)限和定量限分別為(7.8±0.07) ng/mL和(13±0.03) ng/mL。HOSSAIN等[32]研發(fā)了多重表面等離子體共振生物傳感器，并用于檢測(cè)大麥中的嘔吐毒素，ZEN，T-2毒素，赭曲霉毒素A，煙曲霉毒素B1和黃曲霉毒素B1，回收率和檢測(cè)限均較為理想。

JOSHI等[33]通過(guò)金納米顆粒放大SPR的信號(hào)，利用競(jìng)爭(zhēng)性免疫反應(yīng)，建立成像表面等離子體共振生物傳感器。該傳感器對(duì)小麥樣品中的ZEN進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)限為24 μg/kg，平均回收率為87%～103%，與常見(jiàn)的真菌毒素及類(lèi)似物未見(jiàn)交叉反應(yīng)。此外，該傳感器方便、快捷，只需要17.5 min。

1.4 熒光生物傳感器

熒光生物傳感器是以光學(xué)信號(hào)作為最終檢測(cè)信號(hào)的一類(lèi)傳感器，當(dāng)目標(biāo)分析物加入后，可引起傳感器中的熒光納米感知識(shí)別元件(敏感元件)或熒光納米傳導(dǎo)元件(換能量)的熒光性質(zhì)或參數(shù)發(fā)生改變，根據(jù)發(fā)生的

改變與目標(biāo)分析物的結(jié)構(gòu)或濃度所反映出的定量關(guān)系來(lái)檢測(cè)目的分析物。WANG等[34]結(jié)合熒光偏振免疫分析，建立了熒光生物傳感器，對(duì)玉米種霉菌毒素進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)限及回收率均較為理想。ZHANG等[35]研發(fā)了基于新型單克隆抗體的熒光生物傳感器，用于玉米中ZEN的檢測(cè)。該傳感器檢測(cè)限為12 μg/kg，回收率范圍為84.6%～113.8%，加標(biāo)樣品的變異系數(shù)在15.3%以下。LIU等[36]利用生物素-鏈酶抗生物素系統(tǒng)提高靈敏度，建立了熒光生物傳感器，對(duì)玉米粉和以玉米基礎(chǔ)的嬰兒食品中的ZEN及其衍生物進(jìn)行檢測(cè)，ZEN的半數(shù)抑制濃度為0.18 ng/mL，α-玉米赤霉烯醇(α-zearalenol, α-ZOL) 為0.39 ng/mL，β-玉米赤霉烯醇(β-zearalenol, β-ZOL)為0.46 ng/mL，玉米赤霉酮(zearalanone, ZAN) 0.30 ng/mL，α-玉米赤霉醇(α-zearalanol, α-ZAL) 0.30 ng/mL，β-玉米赤霉醇(β-zearalanol, β-ZAL) 0.73 ng/mL。將該傳感器應(yīng)用于篩選天然污染的玉米樣品，檢測(cè)結(jié)果與高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)結(jié)果相關(guān)性良好。

ZHAO等[37]采用生物素-親和素系統(tǒng)，利用鏈霉抗生物素蛋白-辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記ZEN-牛血清白蛋白偶聯(lián)物作為競(jìng)爭(zhēng)者，結(jié)合磁納米顆粒的磁分離效應(yīng)，建立了納米熒光生物傳感器，并用于玉米樣品中ZEN的檢測(cè)，檢測(cè)限低至0.13 ng/mL。為了進(jìn)一步提高熒光傳感器的靈敏度，HENDRICKISON等[38]利用高靈敏度的化學(xué)發(fā)光底物替代過(guò)氧化物酶標(biāo)記的傳統(tǒng)比色底物,檢測(cè)限低至4 pg/mL，總檢測(cè)時(shí)間為25min，對(duì)紅葡萄酒和白葡萄酒中的ZEN進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)限分別為0.03和0.05 ng/g，該方法具有普遍性，是快速控制各種污染物的有效工具。ZHAN等[39]利用量子點(diǎn)無(wú)與倫比的光學(xué)特性，結(jié)合過(guò)氧化氫酶對(duì)H2O2的高催化活性和量子點(diǎn)對(duì)H2O2的敏感性，建立了量子點(diǎn)生物傳感器檢測(cè)玉米中的ZEN。該傳感器在2.4～1.25 ng/mL線性良好，檢出限為4.1 pg/mL。ZHANG等[40]結(jié)合生物素-鏈霉抗生物素蛋白系統(tǒng)的特異性結(jié)合能力和磁性納米粒子的分離特性，建立了納米熒光生物傳感器，用于谷物和飼料樣品中ZEN的檢測(cè)。該傳感器線性范圍為0.07～2.41 ng/mL，檢測(cè)限為0.04 ng/mL，適用于在相關(guān)實(shí)驗(yàn)室中快速檢測(cè)谷類(lèi)和飼料樣品中的ZEN。

2 分子識(shí)別型生物傳感器

2.1 核酸適配體生物傳感器

核酸適配體生物傳感器是以ZEN適配體分子識(shí)別物質(zhì)，以與ZEN的特異性作用引起的直接或間接信號(hào)變化對(duì)小麥、玉米、飼料等樣品中ZEN進(jìn)行檢測(cè)的傳感器。

WANG等[41]成功篩選出ZEN的單鏈DNA,建立核酸適配體生物傳感器，對(duì)玉米樣品中的ZEN進(jìn)行檢測(cè)，檢出限和半抑制濃度分別為0.01和0.2 ng/mL。WU等[42]利用上轉(zhuǎn)換納米粒子的低自發(fā)熒光背景、良好的光化學(xué)穩(wěn)定性，磁性納米顆粒的磁分離效應(yīng)及核酸適配體的高特異性，研發(fā)了基于納米粒子的適配體傳感器，對(duì)玉米及啤酒中的ZEN進(jìn)行檢測(cè)，具有良好的回收率和檢測(cè)限。NIAZ等[43]提出了基于ZEN適配體標(biāo)記的胺官能化磁性納米粒子作為捕獲探針和時(shí)間分辨熒光納米粒子標(biāo)記互補(bǔ)DNA作為信號(hào)探針，建立核酸適配體生物傳感器，用于檢測(cè)農(nóng)產(chǎn)品和食品中的ZEN，線性范圍為0.001～10 ng/mL，檢測(cè)限為0.21 pg/mL。TAGHDISI等[44]結(jié)合金納米顆粒與核酸外切酶III的信號(hào)放大功能，建立了比色核酸適配體傳感器，能夠在寬線性動(dòng)態(tài)范圍(20～80 000 ng/L)內(nèi)檢測(cè)到ZEN，檢測(cè)限為10 ng/L。

GOUD等[45]將氧化石墨烯(FGO)作為羧基熒光素(FAM)的熒光猝滅劑，修飾有FAM的ZEN適配體(FAM-aptamer)與FGO形成基態(tài)復(fù)合物導(dǎo)致熒光猝滅，而目標(biāo)分析物ZEN出現(xiàn)后，由于目標(biāo)物ZEN與適配體特異性結(jié)合，熒光強(qiáng)度恢復(fù)值與ZEN濃度呈正比，據(jù)此原理(圖3)建立了適配體傳感器用于啤酒及葡萄酒樣品中ZEN的檢測(cè)，檢測(cè)范圍為0.5～64 ng/mL，檢測(cè)限為0.5 ng/mL。

FAM-Aaptamer-羧基熒光素標(biāo)記的適配體；FGO-羧基官能化的氧化石墨烯圖3 核酸適配體傳感器示意圖Fig.3 Schematic diagram of aptamer sensor

2.2 細(xì)胞傳感器

細(xì)胞傳感器是由固定或未固定的活細(xì)胞與電極或其他轉(zhuǎn)換器組合而成的一類(lèi)生物傳感器。當(dāng)活細(xì)胞與分子識(shí)別元件特異性結(jié)合后，產(chǎn)生的信息通過(guò)換能器轉(zhuǎn)換為可定量和可處理的信號(hào)，從而達(dá)到分析檢測(cè)的目的。細(xì)胞傳感器已成為生物傳感器研究領(lǐng)域的一大熱點(diǎn)。JI等[46]首次研發(fā)了人胚腎293細(xì)胞(HEK-293)熒光傳感器并用于檢測(cè)和評(píng)估由鐮刀菌產(chǎn)生的常見(jiàn)食物污染物ZEN，回收率和檢測(cè)限均較為理想，檢測(cè)限為3.2 ng/mL。細(xì)胞傳感器也常用于評(píng)價(jià)ZEN等其他真菌毒素的毒性，DU等[47]研發(fā)了一種基于細(xì)胞的電化學(xué)生物傳感器來(lái)評(píng)估DON和ZEN對(duì)BEL-7402細(xì)胞的個(gè)體和組合毒性。SUN等[48]為了更加靈敏的評(píng)估ZEN的毒性，在DU等[47]的基礎(chǔ)上，開(kāi)發(fā)了基于細(xì)胞的電化學(xué)生物傳感器來(lái)評(píng)估DON，ZEN和AFB11在Hep G2細(xì)胞上的個(gè)體和組合毒性，與傳統(tǒng)的細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)方法相比，該方法簡(jiǎn)單，方便，靈敏，反應(yīng)速度快。

3 討論與展望

生物傳感器檢測(cè)技術(shù)由于快速、靈敏、簡(jiǎn)單經(jīng)濟(jì)的優(yōu)點(diǎn)，在ZEN污染檢測(cè)控制方面發(fā)揮重要的作用，但是根據(jù)目前的研究發(fā)現(xiàn)多方面需要進(jìn)一步研究。

(1)信號(hào)放大技術(shù)中納米放大技術(shù)是發(fā)展較快的放大技術(shù)，依托新材料領(lǐng)域的高速發(fā)展，可以探索更多的納米材料應(yīng)用于食品檢測(cè)領(lǐng)域如介孔二氧化硅納米材料，上轉(zhuǎn)換納米粒子等。

(2)酶放大技術(shù)中目前發(fā)現(xiàn)具有易變性、不穩(wěn)定、易被破壞等特點(diǎn)，只應(yīng)用酶放大技術(shù)存在一定局限性，而核酸適配體具有特異性強(qiáng)、在非生理?xiàng)l件下的高穩(wěn)定性、低成本、易修飾等特點(diǎn)成為近年來(lái)研究的熱點(diǎn)。在酶作為放大識(shí)別過(guò)程的催化探針時(shí)，與易修飾的核酸適配體相結(jié)合，將有效提高檢測(cè)方法的靈敏度與穩(wěn)定性。

(3)ZEN的代謝產(chǎn)物α-ZOL、β-ZOL、α-ZAL、β-ZAL及ZAN通過(guò)強(qiáng)烈的雌激素活性而產(chǎn)生有害的健康效應(yīng)，很多還屬于隱蔽型毒素，其結(jié)構(gòu)、極性、溶解度和分子質(zhì)量較母體分子發(fā)生變化，通過(guò)傳統(tǒng)的前處理和檢測(cè)方法常常漏檢，多通道的、可同時(shí)檢測(cè)ZEN、α-ZOL、β-ZOL、α-ZAL、β-ZAL及ZAN等衍生物的生物傳感器檢測(cè)技術(shù)是未來(lái)還需進(jìn)一步研究的方向。

(4)目前，用于檢測(cè)食品原料及飼料中ZEN的傳統(tǒng)方法主要是以色譜為主的精準(zhǔn)檢測(cè)技術(shù)(高效液相色譜法、氣象色譜法等)和基于免疫技術(shù)的快檢方法(ELISA、膠體金快速測(cè)試卡法等)。傳統(tǒng)的依托大型精密儀器的精準(zhǔn)檢測(cè)技術(shù)可以準(zhǔn)確定量目標(biāo)物的含量，但需設(shè)備昂貴，樣品前處理時(shí)間長(zhǎng)及繁瑣，費(fèi)用高，需要專業(yè)的操作人員，不易推廣，不適用于現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)樣品。而目前的快速檢測(cè)方法能夠達(dá)到現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)樣品的要求，但是靈敏度和準(zhǔn)確度低，假陽(yáng)性率高，不能達(dá)到準(zhǔn)確分析檢測(cè)的目的。因此，仍然需要靈敏度及準(zhǔn)確性高，簡(jiǎn)便快捷，經(jīng)濟(jì)，能夠達(dá)到實(shí)時(shí)分析和經(jīng)濟(jì)要求的檢測(cè)方法。生物傳感器技術(shù)作為ZEN檢測(cè)的前景替代方法，具有高專一性、高選擇性、便攜性和實(shí)時(shí)分析的性能，具有可觀的發(fā)展前景。