朱 倩，朱麗麗，余 芳，余 歡

(安徽醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥 230032)

藥物分析是藥學(xué)專(zhuān)業(yè)知識(shí)教學(xué)體系中的一門(mén)主要專(zhuān)業(yè)課程，目前在我校是臨床藥學(xué)、藥學(xué)專(zhuān)業(yè)本科生的專(zhuān)業(yè)必修課程。藥物分析利用分析手段對(duì)藥品進(jìn)行檢驗(yàn)，判斷其是否符合藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求，同時(shí)應(yīng)用在體內(nèi)的分析技術(shù)和方法，保證藥物在臨床使用的安全性及有效性[1]。

藥物分析課程具有很強(qiáng)的實(shí)踐性及應(yīng)用性，因此藥物分析實(shí)驗(yàn)課是培養(yǎng)學(xué)生掌握基本操作技能的重要教學(xué)環(huán)節(jié)，目前在我校也作為臨床藥學(xué)及藥學(xué)專(zhuān)業(yè)學(xué)生的專(zhuān)業(yè)必修課程，經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)課程的學(xué)習(xí)，使學(xué)生了解并掌握藥品質(zhì)量控制的內(nèi)容、分析方法建立的思路以及基本的實(shí)驗(yàn)操作。

1 藥物分析實(shí)驗(yàn)課程現(xiàn)狀

目前包括我校在內(nèi)的國(guó)內(nèi)許多院校的藥物分析的實(shí)驗(yàn)教學(xué)模式過(guò)于陳舊，實(shí)驗(yàn)課程設(shè)置缺乏統(tǒng)一規(guī)劃，教學(xué)內(nèi)容單一不連貫，無(wú)法系統(tǒng)訓(xùn)練學(xué)生的實(shí)驗(yàn)?zāi)芰2-3]。而學(xué)生在實(shí)驗(yàn)課上主動(dòng)性差、依賴(lài)性強(qiáng)，按照實(shí)驗(yàn)講義上詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)步驟，按部就班的進(jìn)行操作，獨(dú)立思考及創(chuàng)造力培養(yǎng)的環(huán)節(jié)；由于實(shí)驗(yàn)教學(xué)都是“按方抓藥”的驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)為主，學(xué)生參與度不高，注意力不夠集中，即使是實(shí)驗(yàn)講義上寫(xiě)明的詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)步驟，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中依然會(huì)出現(xiàn)操作錯(cuò)誤，基本操作技能不達(dá)標(biāo)。因此，一味的沿用現(xiàn)有的實(shí)驗(yàn)教學(xué)模式不僅無(wú)法滿(mǎn)足現(xiàn)代社會(huì)對(duì)藥學(xué)類(lèi)人才的要求，也無(wú)法激起學(xué)生對(duì)實(shí)驗(yàn)課的興趣，老師也重復(fù)的上課過(guò)程中也容易出現(xiàn)倦怠心理。為了改善目前的狀況，我們考慮進(jìn)行實(shí)驗(yàn)課程改革，針對(duì)藥物分析的學(xué)科特性，對(duì)學(xué)生動(dòng)手能力和解決問(wèn)題能力的要求，我們決定在實(shí)驗(yàn)課程中引入綜合性設(shè)計(jì)型實(shí)驗(yàn)[2-4]。

2 實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革的思路

綜合性設(shè)計(jì)型實(shí)驗(yàn)教學(xué)旨在培養(yǎng)具有專(zhuān)業(yè)素質(zhì)的綜合性人才；在教學(xué)中更加看重學(xué)生在自主學(xué)習(xí)、團(tuán)隊(duì)合作，分析設(shè)計(jì)等綜合能力的培養(yǎng)[5]，包括文獻(xiàn)檢索和整理的能力、實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)的合理性、實(shí)驗(yàn)小組團(tuán)隊(duì)協(xié)作能力、在實(shí)驗(yàn)方案討論及施行中的自主性、實(shí)驗(yàn)結(jié)果的總結(jié)、討論與匯報(bào)等。

3 實(shí)驗(yàn)教學(xué)中的應(yīng)用

目前我院藥物分析實(shí)驗(yàn)課程的總學(xué)時(shí)為45學(xué)時(shí)，結(jié)合教學(xué)實(shí)踐與本教研室的科研成果，我們將其中18學(xué)時(shí)的實(shí)驗(yàn)安排為兩個(gè)綜合性設(shè)計(jì)型實(shí)驗(yàn)的內(nèi)容即“HPLC法同時(shí)測(cè)定牛黃解毒片中的黃芩苷及甘草酸的含量”以及“灌胃給藥牛黃解毒片后大鼠血漿中黃芩苷和甘草酸的含量測(cè)定”。牛黃解毒片由人工牛黃、大黃、黃芩等八味藥組成，具有清熱解毒的功效，屬于常見(jiàn)的非處方藥?！吨袊?guó)藥典》(2015版)中使用高效液相色譜法測(cè)定其中黃芩苷的含量對(duì)制劑進(jìn)行質(zhì)量控制，要求每片含黃芩以黃芩苷計(jì)，小片不得少于3.0 mg，大片不得少于4.5 mg。甘草酸是甘草中的主要活性成分，不僅是很好的甜味劑，還可用于鎮(zhèn)咳祛痰、胃潰瘍等，同時(shí)具有顯著地腎上腺皮質(zhì)激素樣作用，可用于人體抗衰老、抗炎、降壓、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)等作用，具有很高的研究?jī)r(jià)值。在此基礎(chǔ)上，再進(jìn)行生物樣品中黃芩苷與甘草酸的含量測(cè)定，讓學(xué)生了解和掌握關(guān)于生物樣品中藥物含量測(cè)定的相關(guān)理論知識(shí)及實(shí)驗(yàn)操作。由于我校沒(méi)有專(zhuān)門(mén)開(kāi)設(shè)《體內(nèi)藥物分析》課程，而對(duì)于臨床藥學(xué)及藥學(xué)專(zhuān)業(yè)的同學(xué)來(lái)說(shuō)，體內(nèi)藥物分析的相關(guān)理論知識(shí)和實(shí)驗(yàn)方法的掌握對(duì)今后的工作及繼續(xù)深造都有著重要的意義，體內(nèi)藥物分析知識(shí)體系涵蓋了臨床藥理學(xué)、藥物分析學(xué)、藥物代謝動(dòng)力學(xué)等多個(gè)方面，是綜合性強(qiáng)，應(yīng)用范圍廣的一門(mén)學(xué)科[6]。在實(shí)踐教學(xué)中，綜合性設(shè)計(jì)型實(shí)驗(yàn)的應(yīng)用需要注意以下幾個(gè)關(guān)鍵步驟。

3.1 高效液相色譜原理及基本操作

高效液相色譜是實(shí)驗(yàn)中所需的主要的分析儀器，結(jié)合前期實(shí)驗(yàn)、視頻資料以及實(shí)驗(yàn)演示介紹高效液相色譜的原理及標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)部分，高效液相色譜分析中，實(shí)驗(yàn)所用的色譜柱、流動(dòng)相以及樣品溶液都由實(shí)驗(yàn)老師提前準(zhǔn)備好，學(xué)生不能全面的了解從實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備到實(shí)驗(yàn)操作的全過(guò)程過(guò)程，包括流動(dòng)相配制，標(biāo)曲范圍確定以及倍半稀釋的配制方法等，而通過(guò)綜合性設(shè)計(jì)型實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行，學(xué)生會(huì)在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中逐漸掌握全部過(guò)程及注意事項(xiàng)。

3.2 實(shí)驗(yàn)方案的設(shè)計(jì)

在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始之前兩個(gè)星期，教師就將實(shí)驗(yàn)的主要內(nèi)容告知學(xué)生，學(xué)生有針對(duì)性的進(jìn)行文獻(xiàn)檢索和資料查閱，每4～6人自行進(jìn)行分組，進(jìn)行組內(nèi)的實(shí)驗(yàn)方案的討論，之后教師對(duì)每組學(xué)生提交的實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行初審，提出修改意見(jiàn)后，確定最終的實(shí)驗(yàn)方案。實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)中可能存在的問(wèn)題有以下幾點(diǎn)。

3.2.1 同時(shí)測(cè)定多種成分實(shí)驗(yàn)方法的建立

在驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)中，學(xué)生根據(jù)實(shí)驗(yàn)講義中給出的色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定，并且都是單一組分。而對(duì)于同時(shí)測(cè)定復(fù)方制劑中的多種成分，就對(duì)方法的專(zhuān)屬性、分離效果都有更高的要求；學(xué)生要通過(guò)實(shí)驗(yàn)了解分析方法建立的流程，特別是要樹(shù)立“分析方法的驗(yàn)證是分析方法建立中的重要組成部分”的概念，明確方法學(xué)驗(yàn)證的重要性。

3.2.2 生物樣品的定量分析

與“HPLC法同時(shí)測(cè)定牛黃解毒片中的黃芩苷及甘草酸的含量”相比較，通過(guò)對(duì)生物樣品中藥物含量的測(cè)定，了解藥物分析與體內(nèi)藥物分析方法建立與驗(yàn)證的異同點(diǎn)。體內(nèi)藥物分析方法的建立由空白溶劑實(shí)驗(yàn)、空白生物基質(zhì)實(shí)驗(yàn)、模擬生物樣品實(shí)驗(yàn)以及實(shí)際生物樣品實(shí)驗(yàn)四個(gè)步驟組成。

在方法學(xué)考察中，體內(nèi)藥物分析需對(duì)不同濃度范圍的指標(biāo)分別進(jìn)行考察，一般分為高、中、低三個(gè)濃度范圍。而在樣品檢測(cè)過(guò)程中，也要特別注意利用隨行曲線(xiàn)和隨行質(zhì)控來(lái)確定分析結(jié)果的可靠性。

3.2.3 生物樣品的獲取與處理

對(duì)于生物樣品中的藥物測(cè)定，樣品來(lái)源為大鼠血漿，首先要進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，選擇合適的劑量給藥、取血及制備血漿等，隨后對(duì)血漿樣品進(jìn)行預(yù)處理。學(xué)生通過(guò)實(shí)驗(yàn)掌握體內(nèi)藥物分析的基本實(shí)驗(yàn)操作，包括常見(jiàn)生物樣品的采集和制備，生物樣品預(yù)處理的目的和方法。實(shí)驗(yàn)室中對(duì)生物樣品的預(yù)處理方法主要有蛋白質(zhì)沉淀和被測(cè)藥物的提取，蛋白質(zhì)沉淀的方法包括有機(jī)溶劑沉淀(如乙腈、甲醇)、強(qiáng)酸沉淀(如10%高氯酸， 6%高氯酸)等；提取方法包括選用合適的有機(jī)溶劑進(jìn)行液-液萃取或者是固相萃取。具體預(yù)處理的方法需要學(xué)生進(jìn)行必要的預(yù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行選擇和確定。

3.3 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理

要求學(xué)生通過(guò)實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法計(jì)算未知濃度藥物含量的方法，并學(xué)會(huì)對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。

3.4 實(shí)驗(yàn)考核

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，指導(dǎo)教師結(jié)合各組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果以及每組學(xué)生在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的參與度與操作能力進(jìn)行綜合性的評(píng)價(jià)，綜合性設(shè)計(jì)型實(shí)驗(yàn)的成績(jī)占最終實(shí)驗(yàn)課程總成績(jī)的50%。這種考核方式不以一考定成績(jī)，而是注重過(guò)程考核，有助于培養(yǎng)和激勵(lì)學(xué)生的科研思維能力和動(dòng)手操作的熱情，只做一個(gè)“旁觀者”和抄抄實(shí)驗(yàn)報(bào)告再也無(wú)法獲得理想的成績(jī)。

4 總結(jié)

綜合性設(shè)計(jì)型實(shí)驗(yàn)的開(kāi)展，不僅對(duì)學(xué)生提出了更高的要求，同時(shí)也需要學(xué)校及教師相應(yīng)更高程度的配合。就學(xué)校而言，對(duì)于這種綜合性的拓展的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容需要有足夠的教學(xué)資源來(lái)輔助，包括實(shí)驗(yàn)中部分內(nèi)容可能需要課下進(jìn)行，公共實(shí)驗(yàn)平臺(tái)的建立及對(duì)學(xué)生的開(kāi)放至關(guān)重要。對(duì)于教師的要求也更高，“照本宣科”顯然無(wú)法滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)需求，在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和進(jìn)行的過(guò)程中，指導(dǎo)學(xué)生和幫助學(xué)生解決問(wèn)題需要教師有著更加豐富的知識(shí)儲(chǔ)備、更嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目蒲兴季S以及更為扎實(shí)的實(shí)驗(yàn)操作能力。在實(shí)踐教學(xué)中，我們通過(guò)以下措施盡可能的滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)各方面的需求：(1)加強(qiáng)理論課教學(xué)，夯實(shí)基礎(chǔ)；(2)提高教師自身教學(xué)科研水平，重視實(shí)驗(yàn)教學(xué)，積極指導(dǎo)學(xué)生；(3)開(kāi)展開(kāi)放性實(shí)驗(yàn)等課外科研活動(dòng)，面向?qū)W生展開(kāi)一部分實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，讓學(xué)生有更多的時(shí)間自己動(dòng)手進(jìn)行操作，提高對(duì)科研的興趣。希望通過(guò)綜合型設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)的開(kāi)展，不僅使得學(xué)生在藥物分析實(shí)驗(yàn)課程中能夠提高自己的實(shí)驗(yàn)基本操作技能，同時(shí)更重要的是對(duì)科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目蒲兴季S的培養(yǎng)，全方位提高學(xué)生的專(zhuān)業(yè)水平和素養(yǎng)。