方怡然,薛立

華南農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)與風(fēng)景園林學(xué)院,廣州 510642

0 前言

土壤鹽漬化是世界上最為嚴(yán)重的環(huán)境問(wèn)題之一[1]。目前全球10%以上的陸地面積受鹽漬化的影響[2],其中,我國(guó)的鹽堿土面積約9.99 × 107 hm2,分布范圍廣[3],主要分布于我國(guó)的干旱、半干旱及濱海地區(qū)[4]。由于鹽漬化的土壤具有鹽分含量高、礦物質(zhì)成分過(guò)量的特點(diǎn)[5],促使土壤溶液的濃度過(guò)高、導(dǎo)致植物吸收水分和養(yǎng)分的能力下降,進(jìn)而影響植物正常的生理和生化活動(dòng)[3]。因此土壤鹽漬化是限制樹(shù)木生長(zhǎng)的關(guān)鍵因子[1]。

光合作用作為植物生長(zhǎng)發(fā)育的生理基礎(chǔ)[6],對(duì)鹽脅迫十分敏感,因此,研究光合作用對(duì)鹽脅迫的響應(yīng)是了解植物脅迫機(jī)理及增強(qiáng)其抗鹽性的重要途徑[7]。當(dāng)植物光合作用受到抑制時(shí),最初受影響的便是葉綠體光系統(tǒng)II,即PSII[8]。由于PSII 的變化可清楚顯示光合能力受脅迫的程度,因此了解PSII 對(duì)逆境的適應(yīng)機(jī)制在一定程度上可反映植物在逆境下的生存策略[9]。其中,葉綠素?zé)晒饽軠?zhǔn)確反映光能吸收和傳遞的過(guò)程,并在電子傳遞的測(cè)定、質(zhì)子梯度的建立及ATP 的合成等過(guò)程中發(fā)揮獨(dú)特的作用,是研究植物光合生理狀況及植物與逆境脅迫關(guān)系的理想探針[10]。

目前,葉綠素?zé)晒鈩?dòng)力學(xué)技術(shù)被廣泛運(yùn)用于光合作用機(jī)理[11]、作物增產(chǎn)潛力預(yù)測(cè)[12]和植物抗逆生理[13]等方面,亦有關(guān)于植物及其光合作用對(duì)鹽脅迫響應(yīng)機(jī)制的研究報(bào)道,比如束勝[14]等分別從氣孔導(dǎo)度、光合色素、PSII 光化學(xué)反應(yīng)、光合電子傳遞、葉綠體超微結(jié)構(gòu)、類(lèi)囊體膜蛋白復(fù)合體以及光合磷酸化和CO2固定等方面綜述了鹽脅迫對(duì)植物光合作用的影響;劉倩等[15]則從生物量、光合作用、離子平衡和膜透性等方面分析植物對(duì)鹽堿脅迫的響應(yīng)機(jī)制等等,這些研究均有效的揭示了植物對(duì)鹽脅迫的適應(yīng)機(jī)制及緩解機(jī)制。但由于鹽脅迫對(duì)植物的光合作用及其葉綠素?zé)晒獾挠绊懯且粋€(gè)復(fù)雜的過(guò)程,鹽分類(lèi)型、植物種類(lèi)和水熱條件的差異可在較大程度上影響植物的主要受迫機(jī)理及受迫程度,從而導(dǎo)致研究結(jié)果的不一致。因此,必須了解這些因子對(duì)受脅迫植物的影響,才能更準(zhǔn)確的了解植物抗鹽脅迫機(jī)理,從而采取有效的改良措施。目前,關(guān)于植物葉綠素?zé)晒庠诓煌}分類(lèi)型、植物種類(lèi)和水熱條件下對(duì)鹽脅迫的響應(yīng)機(jī)制、受影響程度及緩解機(jī)制的綜述研究鮮有報(bào)道,因此,本文通過(guò)綜述鹽脅迫下,鹽分類(lèi)型、植物品種、光照強(qiáng)度和干旱等因素對(duì)植物葉綠素?zé)晒庥绊?并結(jié)合最新的研究成果,提出增強(qiáng)植物耐鹽性的方法,以期通過(guò)更全面的揭示植物對(duì)鹽脅迫的適應(yīng)機(jī)制,為全球耐鹽品種的選育和鹽堿地的有效開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 鹽脅迫的發(fā)生機(jī)理

各種鹽類(lèi)都是由陰陽(yáng)離子組成,鹽土中所含的鹽類(lèi)主要是由Cl-、SO42-、NO3-等陰離子及Na+、Ca2+、Mg2+等陽(yáng)離子組合而成。一般情況下,鹽脅迫是指植物由于生長(zhǎng)在高鹽度的生境而受到的高滲透勢(shì)的影響。其中,鹽脅迫的發(fā)生機(jī)理主要有以下三點(diǎn):

1.1 滲透脅迫

滲透脅迫是鹽脅迫對(duì)植物造成的主要危害之一[16],通常情況下,鹽脅迫能使植物吸水困難,原因是土壤鹽分的過(guò)量積累使土壤溶液的滲透勢(shì)下降,進(jìn)而使植物根部細(xì)胞無(wú)法利用水勢(shì)差吸取水分而造成的[17];當(dāng)植物細(xì)胞滲透勢(shì)隨著鹽分濃度的升高而增加時(shí),植物細(xì)胞容易失水而造成生理干旱,形成滲透脅迫[18]。

1.2 離子脅迫

土壤含鹽量高時(shí),過(guò)量的鹽離子被植物吸收并積累在體內(nèi),能通過(guò)破壞膜的完整性及增加電解質(zhì)的滲出率來(lái)引發(fā)細(xì)胞代謝紊亂[19]。此外,植物對(duì)鹽離子和各營(yíng)養(yǎng)元素的吸收存在競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系,這種競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系能打破植物體內(nèi)離子吸收的平衡,造成植物營(yíng)養(yǎng)不均并使其遭受單鹽毒害(在鹽脅迫中該毒害主要由Na+引起),從而抑制植物的正常生長(zhǎng)[20]。

1.3 氧化脅迫

高濃度的鹽分會(huì)導(dǎo)致活性氧物質(zhì)在體內(nèi)的穩(wěn)態(tài)失衡,產(chǎn)生大量單線(xiàn)態(tài)氧、超氧化物自由基和過(guò)氧化氫等有害的細(xì)胞毒性氧[21],導(dǎo)致脂肪、蛋白質(zhì)和核酸等生物分子遭受氧化脅迫,并使參與代謝的酶失活或變性,阻礙蛋白質(zhì)的合成,進(jìn)而影響植物的光合作用并造成植物細(xì)胞代謝紊亂[22]。

2 葉綠素?zé)晒鈩?dòng)力學(xué)

葉綠素?zé)晒庑盘?hào)是由綠色植物(或含有葉綠素的部分組織)PSII 的天線(xiàn)色素蛋白復(fù)合體的葉綠素a分子所發(fā)出的一種微弱且強(qiáng)度隨時(shí)間不斷變化的暗紅色熒光信號(hào)[23]。其中,該熒光信號(hào)的獲取需對(duì)植物事先進(jìn)行暗適應(yīng)處理后,在可見(jiàn)光激發(fā)的狀態(tài)下用熒光計(jì)測(cè)得。獲取該熒光信號(hào)的過(guò)程被稱(chēng)為葉綠素?zé)晒庹T導(dǎo)動(dòng)力學(xué)[24]。實(shí)際上,熒光現(xiàn)象是葉綠素分子吸收光量子的能量后,處于激發(fā)態(tài)的葉綠素分子通過(guò)能量躍遷又恢復(fù)到穩(wěn)定態(tài)的現(xiàn)象[24]。光被植物色素系統(tǒng)吸收后的消耗途徑主要有3 種,分別是光合電子傳遞、葉綠素?zé)晒夂蜔岷纳?各消耗途徑的能量分配間存在此消彼長(zhǎng)的關(guān)系[11],因此通過(guò)植物發(fā)射熒光量的變化情況可反映鹽脅迫下植物的光合作用[11]及生理變化的情況,進(jìn)而對(duì)植物的抗鹽性進(jìn)行判斷。

常見(jiàn)的葉綠素?zé)晒鈪?shù)有初始熒光(Fo),主要用于度量色素吸收的能量中以熱和熒光形式散失的部分;最大熒光(Fm),代表PSII 反應(yīng)中心處于完全關(guān)閉時(shí)的熒光產(chǎn)量;PSII 原初光能轉(zhuǎn)化效率(Fv/Fm),代表PSII 反應(yīng)中心光能轉(zhuǎn)換效率;PSII 有效光化學(xué)量子產(chǎn)量(Fv′/Fm′),代表開(kāi)放的PSII 反應(yīng)中心原初光能捕獲效率;光化學(xué)猝滅系數(shù)(qP),反映PSII 反應(yīng)中心開(kāi)放部分的比例;非光化學(xué)猝滅系數(shù)(qN,即NPQ),代表PSII 天線(xiàn)色素吸收的光能不能用于光合電子傳遞而以熱的形式耗散掉的部分;表觀電子傳遞速率(ETR),表示實(shí)際光強(qiáng)條件下的表觀電子傳遞效率。此外,還有代表PSII 潛在活性的Fv/Fo以及代表PSII反應(yīng)中心部分關(guān)閉情況下實(shí)際PSII光能捕獲效率的ΦPSII等。

目前,葉綠素?zé)晒獾臏y(cè)量方法主要有兩種,即使用調(diào)制式和非調(diào)制式熒光計(jì)測(cè)量[13]。其中,調(diào)制式熒光計(jì)的使用至少需要調(diào)制的弱測(cè)量光和連續(xù)強(qiáng)化光這兩束光,該方法可直接測(cè)定相關(guān)的葉綠素a 熒光動(dòng)力學(xué)參數(shù)[25],并可據(jù)此計(jì)算出相關(guān)的Fv/Fm和ETR等參數(shù),而非調(diào)制式熒光計(jì)的使用僅需一個(gè)強(qiáng)連續(xù)光源,結(jié)構(gòu)更簡(jiǎn)單,信號(hào)檢測(cè)采用光電直流放大系統(tǒng)[25]。非調(diào)制式熒光計(jì)通常用于測(cè)定葉綠素a 熒光動(dòng)力學(xué)信號(hào)的快速響應(yīng),只獲得Fo、Fm和Fv/Fm。

3 鹽脅迫對(duì)植物葉綠素?zé)晒庥绊?/h2>

3.1 不同鹽分脅迫對(duì)植物葉綠素?zé)晒獾挠绊?/h3>

大量研究表明,鹽脅迫能引起植物產(chǎn)生復(fù)雜的生理生化反應(yīng),其造成的滲透脅迫、離子毒害和氧化應(yīng)激等能對(duì)植物葉綠體的光合器官造成傷害,使PSII 反應(yīng)中心受損[4,11],最終導(dǎo)致植物光合能力的下降。其中,鹽脅迫對(duì)植物葉綠素?zé)晒獾挠绊懲ǔ１憩F(xiàn)為Fv/Fm、Fv/Fo、qP和ΦPSII等熒光指標(biāo)的下降和NPQ的上升。其中,Fv/Fm和Fv/Fo的下降在一定程度上能表明PSII 受損,植株受到光抑制[26];qP的降低說(shuō)明從PSII氧化側(cè)向PSII反應(yīng)中心的電子傳遞受到抑制[26];ΦPSII的急劇下降則表明ATP、NADPH 等同化力的形成受阻,植物凈光合速率下降[26],而NPQ的增加表明植物能通過(guò)非光化學(xué)猝滅來(lái)提高熱耗散,以此來(lái)消耗過(guò)多的激發(fā)能,減輕脅迫環(huán)境的傷害并進(jìn)行自我保護(hù)[27-28]。但由于不同鹽分對(duì)植物的主導(dǎo)脅迫機(jī)理和程度不同,因此在不同鹽分類(lèi)型下,植物的葉綠素?zé)晒庵笜?biāo)的變化情況存在差異。目前,在土壤眾多致害鹽類(lèi)中,以鈉鹽和鈣鹽為主,并以鈉鹽的危害最為普遍。有研究表明,鈉鹽對(duì)植物的傷害程度大于鈣鹽[29]。這是由于鈉鹽與鈣鹽相比,對(duì)植物的保護(hù)膜具有一定的破壞作用,鈣鹽在一定程度上能減緩滲透脅迫下的質(zhì)膜過(guò)氧化程度,對(duì)生物膜具有一定的保護(hù)作用,但鈣鹽濃度過(guò)高也會(huì)對(duì)植物產(chǎn)生離子毒害[30]。史慶華等[26]在研究番茄(Lycopersicon esculentumMill.)的光合作用對(duì)等滲Ca(NO3)2和NaCl 處理的響應(yīng)時(shí)發(fā)現(xiàn),等滲的NaCl 和Ca(NO3)2溶液均能引起番茄葉片F(xiàn)v/Fm、Fv/Fo、qP和ΦPSII的下降,但NaCl 處理下各相關(guān)的葉綠素?zé)晒鈪?shù)的下降幅度均大于Ca(NO3)2處理,即NaCl 處理對(duì)葉片的傷害程度遠(yuǎn)大于Ca(NO3)2處理。這與劉志媛等[29]對(duì)等滲Ca(NO3)2和NaCl 對(duì)番茄幼苗生長(zhǎng)的影響的研究結(jié)果一致。這是由于Ca(NO3)2和 NaCl 對(duì)番茄的主導(dǎo)脅迫機(jī)理不同,Ca(NO3)2主要通過(guò)滲透脅迫使番茄葉片發(fā)生生理干旱來(lái)影響植物的光合作用[29];而NaCl 除有相同的滲透脅迫外,還存在離子脅迫。過(guò)量的Na+通過(guò)破壞質(zhì)膜結(jié)構(gòu)、抑制K+、Ca2+和Mg2+等離子的吸收,降低與光合作用相關(guān)酶的活性等來(lái)抑制植株的生長(zhǎng)[31]。但由于不同植物對(duì)Na+和Cl-的敏感程度不同[32],因此起主導(dǎo)脅迫作用的離子不一定都是Na+。例如,在Srivastava 等[33]的研究中,Cl-是引起柑橘(Citrus reticulataBlanco)等果樹(shù)受脅迫影響的主要因素,而番茄等作物的脅迫作用主要是由Na+引起的[32]。但也有研究表明,鈣鹽對(duì)植物的傷害程度大于鈉鹽,李青云等[34]等在研究鈉鹽和鈣鹽脅迫對(duì)草莓(Fragaria ananassaDuch.)光合作用的影響時(shí)發(fā)現(xiàn),鈉鹽對(duì)草莓光合能力的傷害程度小于鈣鹽。這表明鹽脅迫對(duì)植物光合作用的影響機(jī)理和程度因鹽分種類(lèi)和植物類(lèi)型的不同而存在差異[35]。

對(duì)于鈉鹽而言,不同鈉鹽對(duì)植物的傷害作用的差異主要受陰離子類(lèi)型和濃度的影響[36]。胡楚琦等[37]用等Na+濃度的Na2SO4和Na2S 處理蘆葦(Phragmites australis(Cav.) Trin.ex Steud.)后發(fā)現(xiàn),經(jīng)Na2SO4處理的ΦPSII和qP下降幅度和NPQ的增加幅度均明顯低于Na2S 處理的。SO42-和S2-在植物細(xì)胞中的排出速率不同,相對(duì)S2-來(lái)說(shuō),SO42-比較容易從蘆葦細(xì)胞中分泌出來(lái),因此SO42-對(duì)植物的迫害程度較低[38],即SO42-對(duì)蘆葦?shù)膫π∮赟2-。張桂玲等[39]在研究轉(zhuǎn)Bt基因棉幼苗(Gossypium hirsutum)時(shí)發(fā)現(xiàn),在相同Na+濃度下,Cl-的毒害作用大于SO42-,表明植物光合作用的受脅迫程度會(huì)因組成陰離子的不同而存在差異,王斌等[40]研究Na2SO4和NaCl 對(duì)沼澤小葉樺(Betula microphyllaBunge)的生理響應(yīng)及張楚涵等[41]研究不同鈉鹽對(duì)狼尾草(Pennisetum alopecuroides(L.) Spreng.)的生理影響時(shí)也得出類(lèi)似的結(jié)果。

鹽分濃度是影響鹽脅迫對(duì)植物傷害程度的重要因素之一。大量研究表明,各種鹽分在不同濃度時(shí)對(duì)植物生理功能的影響不同,且鹽分濃度越高、脅迫時(shí)間越長(zhǎng),影響就越明顯[42]。薛延豐等[43]的研究發(fā)現(xiàn),在低濃度NaCl 處理下,菊芋幼苗的熒光參數(shù)與對(duì)照相比均無(wú)明顯變化;除NPQ增加外，其余的熒光參數(shù)均隨NaCl 濃度的增加呈下降趨勢(shì),這說(shuō)明低濃度NaCl處理下,植物PSII氧化側(cè)的電子流動(dòng)沒(méi)有被阻斷,光合機(jī)構(gòu)和原初電子受體不受影響,亦無(wú)發(fā)生光抑制和光破壞;但隨著鹽處理濃度的增加,PSII 氧化側(cè)的放氧復(fù)合物的功能受損,向PSII反應(yīng)中心提供的電子數(shù)量減少,PSII還原側(cè)從QA向QB 的電子傳遞受阻,從而導(dǎo)致PSII 電子傳遞速度下降,光合機(jī)構(gòu)逐漸受到光抑制。此外,有研究報(bào)道,低濃度的鹽分處理有利于部分植物的生長(zhǎng)[44];但也有研究表明,不管鹽分種類(lèi)及其濃度如何,均對(duì)植物葉片葉綠素的合成起抑制作用[40],這可能與植物本身的耐鹽性及生長(zhǎng)環(huán)境有關(guān)。總體來(lái)說(shuō),高濃度鹽分會(huì)破壞植物的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu),降低酶活性,抑制光合作用,從而打亂植物的生理功能,但由于鹽分種類(lèi)的不同,植物各葉綠素?zé)晒鈪?shù)的變化曲線(xiàn)、峰值及下降程度均存在差異。

3.2 鹽脅迫對(duì)不同植物種類(lèi)葉綠素?zé)晒獾挠绊?/h3>

鹽脅迫對(duì)不同植物葉片光合作用的影響不同,例如在一定濃度鹽處理下,柳枝稷(Panicum virgatum)[45]、桑樹(shù)(Morus alba)[46]、楊樹(shù)(PopulusL.)[47]等植物品種的光合作用效率明顯下降,而絨毛梣(Fraxinus velutina)等無(wú)明顯變化,國(guó)槐(Sophora japonicaL.)則有所增強(qiáng)[48]。由于光合作用強(qiáng)弱與葉綠素?zé)晒鈪?shù)的變化密切相關(guān)[33],因此通過(guò)研究鹽脅迫下不同植物的葉綠素?zé)晒馓匦詠?lái)深入了解鹽脅迫對(duì)不同植物葉片光合作用的影響程度是十分有必要的。一般情況下,抗鹽性較高的植物種類(lèi)受鹽脅迫的迫害程度較小,其表現(xiàn)出熒光參數(shù)的變化幅度亦較小,且當(dāng)鹽分濃度較低時(shí),部分植物能通過(guò)提高葉片光合色素含量和光能的吸收,來(lái)進(jìn)一步增加自身的耐鹽能力[49],而鹽敏感植物即使在較低鹽濃度下,也能使熒光參數(shù)發(fā)生較大幅度的變化,并引起其光合能力的下降。因此,研究鹽脅迫下不同植物熒光參數(shù)的變化不僅能了解植物受脅迫的機(jī)理和程度,也可以判斷不同植物品種的抗鹽性,為篩選高抗鹽性植物及培育新耐鹽植物的研究提供參考[50]。據(jù)馮蕾等[7]報(bào)道,經(jīng)0.15% NaCl 濃度處理的枳椇(Hovenia acerba)比對(duì)照的Fv/Fm和qP值均有明顯下降;而皂莢(Gleditsia sinensis)的相應(yīng)指標(biāo)在NaCl 濃度高于0.30% 時(shí)才略有下降,且相同鹽濃度處理下,枳椇的Fv/Fm和qP值的下降幅度大于皂莢,而NPQ的增加幅度則剛好相反,這表明枳椇對(duì)NaCl 脅迫較皂莢敏感,亦表明皂莢的抗鹽性強(qiáng)于枳椇。Sixto 等[51]在利用葉綠素?zé)晒鈪?shù)篩選耐鹽性較高的銀白楊(Populus alba)品種時(shí)發(fā)現(xiàn),抗鹽性較強(qiáng)的品種與對(duì)照組的Fo和Fv/Fm并無(wú)顯著差異,而幾種鹽敏感品種的Fo高于對(duì)照,Fv/Fm則相反。由于Fo的增加是由PSII 反應(yīng)中心受損或可逆失活引起的,因此,根據(jù)Fo的變化情況在一定程度上能衡量PSII的穩(wěn)定性[52]。

一般情況下,抗鹽性較強(qiáng)的植物品種能較好的利用PSII 反應(yīng)中心非輻射熱能量的耗散來(lái)減輕鹽脅迫對(duì)光合機(jī)構(gòu)的傷害,但這種利用非光化學(xué)猝滅來(lái)減輕植物受脅迫傷害的能力是有限的,它不僅與植物品種有關(guān),還與鹽分濃度密切相關(guān)[28]。唐玲等[28]的研究發(fā)現(xiàn),雞爪槭(Acer palmatum)作為一種耐鹽性較強(qiáng)的植物[53],在一定鹽濃度下,可以通過(guò)提高NPQ來(lái)保護(hù)光合機(jī)構(gòu),使其不受損害;而當(dāng)鹽濃度高達(dá)一定程度并超過(guò)它自身的調(diào)節(jié)范圍后,PSII 反應(yīng)中心的光合機(jī)構(gòu)則會(huì)受到嚴(yán)重?fù)p害。當(dāng)NPQ出現(xiàn)大幅度下降時(shí),表明植物利用非輻射能量途徑散失過(guò)剩激發(fā)能的功能受到抑制[27],這與周丹丹等[54]研究樸樹(shù)(Celtis sinensis)和速生白榆(Ulmus pumilaL.)幼苗以及秦紅艷等[27]研究山葡萄(Vitis amurensisRupr.)對(duì)鹽脅迫的響應(yīng)時(shí)得出的結(jié)果相似。

3.3 不同光照強(qiáng)度下鹽脅迫對(duì)植物葉綠素?zé)晒獾挠绊?/h3>

鹽脅迫下,植物的葉綠素?zé)晒馓匦砸资芄庹諒?qiáng)度的影響[55],因此,探明不同光照強(qiáng)度對(duì)鹽脅迫下植物葉綠素?zé)晒獾挠绊懹兄诹私庵参镌邴}脅迫下對(duì)光強(qiáng)的適應(yīng)能力,進(jìn)而為鹽脅迫地區(qū)植物的合理生產(chǎn)及管理提供參考。一般情況下,單純的鹽脅迫或弱光鹽脅迫并不會(huì)引起植物發(fā)生光抑制[56],因?yàn)辂}脅迫雖能誘導(dǎo)活性氧(ROS)的過(guò)量生產(chǎn),對(duì)植物葉片造成氧化傷害[57],但植物細(xì)胞能通過(guò)抗氧化系統(tǒng)的防御來(lái)降低鹽脅迫對(duì)葉片的氧化傷害。例如,過(guò)量的H2O2能利用金屬催化的Haber-Weiss 反應(yīng)產(chǎn)生高度活潑和破壞極強(qiáng)的羥基自由基(·OH)[58],進(jìn)而破壞放氧復(fù)合體(OEC)的構(gòu)成亞基并妨礙其周轉(zhuǎn)而降低PSII 的功能[59],但細(xì)胞能通過(guò)提高抗壞血酸過(guò)氧化物酶(APX)的活性[57]來(lái)清除過(guò)量的H2O2,而光作為植物光合作用的唯一能量來(lái)源,是植物進(jìn)行光合作用的基礎(chǔ)。在一定范圍內(nèi),增加光強(qiáng)能提高植物的光合速率[46],一般情況下,強(qiáng)光只引起 PSII 反應(yīng)中心的可逆性失活而不會(huì)對(duì)其形成不可逆的破壞[60]。但當(dāng)鹽脅迫與強(qiáng)光脅迫交互作用時(shí),過(guò)剩的光能會(huì)引起植物光合速率降低和APX 失活[61],使活性氧代謝紊亂和膜質(zhì)過(guò)氧化[62],進(jìn)而損傷光合機(jī)構(gòu),造成光抑制,甚至光氧化或光漂白死亡。其中,強(qiáng)光是造成鹽脅迫下植物光抑制的直接原因[61]。據(jù)逄好勝等[61]報(bào)道,200 μmol·m-2·s-1和500 μmol·m-2·s-1光強(qiáng)下的桑樹(shù)幼苗的Fv/Fm、Fv/Fo、ΦPSII和ETR均隨著鹽濃度的增加而呈下降趨勢(shì),但整體下降幅度較小,而在1 000 μmol·m-2·s-1光強(qiáng)下,各對(duì)應(yīng)熒光參數(shù)下降明顯,這表明在弱光下,桑樹(shù)幼苗能通過(guò)增強(qiáng)抗氧化系統(tǒng)功能有效減輕鹽脅迫誘導(dǎo)的PSII 光抑制[51];在強(qiáng)光下,對(duì)PSII 的抑制程度隨著鹽濃度的上升而加劇,進(jìn)而使植物葉片發(fā)生光抑制。Allakhverdiev 等[63]在研究集胞藻 (Synechocystissp.)的試驗(yàn)中亦報(bào)道,導(dǎo)致植物發(fā)生光抑制的直接效應(yīng)并非鹽脅迫,而是通過(guò)阻礙PSII 的修復(fù),即影響光誘導(dǎo)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯,尤其是抑制D1 蛋白的重新合成而造成的[64]。束勝等[14]的報(bào)道也表明,在鹽脅迫下,鈍頂螺旋藻細(xì)胞(Spirulina platensis)的Fv/Fm的下降程度隨光強(qiáng)的增加而加劇。但也有研究發(fā)現(xiàn),當(dāng)鹽處理濃度高于0.5%時(shí),桑樹(shù)的光合速率隨光強(qiáng)的增加而提升[46],這可能與植物的光合機(jī)構(gòu)在高鹽脅迫下被破壞,而強(qiáng)光在一定程度上能促進(jìn)光電子的傳遞并提高光能的轉(zhuǎn)化效率有關(guān)[46]。

3.4 鹽旱交互脅迫對(duì)植物葉綠素?zé)晒獾挠绊?/h3>

鹽脅迫多發(fā)生于干旱、半干旱地區(qū)。由于該類(lèi)地區(qū)氣候干旱、土壤水分蒸發(fā)量大,植物多受干旱與鹽分的雙重脅迫的影響[65]。因此,研究植物在多種逆境交叉下葉綠素?zé)晒獾淖兓闆r,有助于了解植物在多種逆境下的生存對(duì)策和適應(yīng)性。干旱對(duì)植物的影響主要是由氣孔的關(guān)閉和CO2的減少引起的,進(jìn)而抑制葉片的蒸騰和光合作用并直接影響PSII 的葉綠素?zé)晒鈪?shù)。據(jù)常紅軍等[65]報(bào)道,干旱脅迫與鹽脅迫均能引起早熟禾 (Poa pratensisL.)的Fv/Fm、Fv′/Fm′、ΦPSII和qP的下降,其中植物體內(nèi)活性氧的大量積累是造成PSII 反應(yīng)中心的受損的主要原因[66],其迫害程度由鹽旱復(fù)合脅迫、干旱脅迫及鹽脅迫依次遞減,其中干旱是鹽旱交互脅迫對(duì)早熟禾生理影響的主導(dǎo)因子,這與Su[67]等的結(jié)果一致。但也有研究表明,鹽旱復(fù)合脅迫下,適度的干旱條件能增強(qiáng)銀沙槐(Ammodendron argenteum(Pall.) Kuntze)植株的滲透調(diào)節(jié)能力,增加可溶性物質(zhì)含量并促使細(xì)胞代謝正?；?從而提高銀沙槐的耐鹽能力[68]。翁亞偉等[69]的研究也表明在鹽旱交互脅迫下,小麥(Triticum aestivumL.)能通過(guò)增強(qiáng)根系水分吸收及降低根葉中脫落酸(ABA) (一種能誘導(dǎo)氣孔關(guān)閉的生長(zhǎng)激素)的含量來(lái)維持較高的光合能力[14]。這表明不同植物對(duì)鹽旱交互脅迫的防御機(jī)制和適應(yīng)能力存在差異。此外有研究表明,在輕、中度鹽脅迫下,玉米(Zea maysL.)幼苗的葉綠素含量隨干旱程度的加劇呈上升趨勢(shì),而在重度鹽脅迫下則相反[70],因此,鹽處理濃度亦是影響植物受脅迫程度的重要因素。

4 提高植物抗鹽性的途徑

4.1 施加外源物質(zhì)

施加外源物質(zhì)作為一種成本低且緩解鹽脅迫傷害效果佳的抗鹽方法,已成為眾多學(xué)者的重點(diǎn)研究對(duì)象[15]。外源物質(zhì)主要通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞滲透勢(shì)、降低細(xì)胞膜透性、增強(qiáng)植物抗氧化能力和調(diào)整內(nèi)源激素水平來(lái)發(fā)揮作用[20],現(xiàn)今已有越來(lái)越多的外源物質(zhì)被發(fā)現(xiàn)。植物可以通過(guò)增強(qiáng)對(duì)Ca2+的吸收來(lái)緩解鹽脅迫。Wang 等[71]的研究表明,外源性Ca2+能通過(guò)促進(jìn)光合作用的電子傳遞、提升幼苗對(duì)C、N 元素的吸收、降低細(xì)胞內(nèi)K+外滲、緩解基因表達(dá)水平的變化等途徑來(lái)有效提高鹽脅迫下高羊茅(Festuca elataKeng ex E.Alexeev)幼苗PSII 的光化學(xué)反應(yīng)能力和抗鹽性,Ca2+也增強(qiáng)了鹽脅迫下小麥[72]、番茄[73]的抗鹽性。此外,外源性硒、硅[74]、γ-氨基丁酸、水楊酸、阿司匹林和茉莉酸等物質(zhì)均在相關(guān)研究中被證實(shí)具有提高植物的抗鹽作用。胡凡波等[75]研究了不同濃度外源NO 供體硝普鈉(sodium nitroprusside,SNP)對(duì) NaCl 脅迫下長(zhǎng)春花(Catharanthus roseus(L.) G.Don)幼苗葉綠素?zé)晒獾挠绊?發(fā)現(xiàn)添加0.1c/(mmol·L-1) SNP 能有效緩解葉綠素的降解和PSII 反應(yīng)中心的破壞。外源物質(zhì)的添加量對(duì)緩解植物受脅迫的效果存在差異,過(guò)量的添加外源物甚至對(duì)植物的生長(zhǎng)產(chǎn)生抑制作用,因此掌握外源物質(zhì)最適度的添加量,才能最大化其緩解脅迫傷害的功效。

4.2 轉(zhuǎn)基因技術(shù)

隨著分子生物學(xué)的快速發(fā)展,人們已從分子水平來(lái)研究植物的耐鹽機(jī)理,其中誘導(dǎo)植物耐鹽相關(guān)基因的高效表達(dá)是增強(qiáng)植物耐鹽性的有效方法[20]。目前,對(duì)植物耐鹽相關(guān)基因的研究主要集中在高等植物離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因、滲透調(diào)節(jié)相關(guān)基因、信號(hào)傳導(dǎo)相關(guān)基因和細(xì)胞抗氧化相關(guān)基因等方面[20]。例如,HKT 轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在植株中 Na+的轉(zhuǎn)運(yùn)上起著整體調(diào)控的重要作用[76]。其中,在Kader 等[77]在研究水稻(Oryza sativaL.)的過(guò)程中發(fā)現(xiàn),鹽脅迫能誘導(dǎo)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因OsHKT1、OsHKT2 和OsVHA的表達(dá)，并通過(guò)調(diào)節(jié)Na+與K+的比例來(lái)降低Na+的濃度,從而緩解由于高Na+濃度而引起的葉片氣孔關(guān)閉和氣孔導(dǎo)度降低等問(wèn)題,且利于CO2向葉綠體的輸送和葉綠體內(nèi) CO2的同化等過(guò)程,進(jìn)而減輕鹽脅迫對(duì)光合電子傳遞的影響,維護(hù)植物光合功能的作用[78]。相關(guān)研究表明,PhaHAK5、Pha HAK2-n、PhaHAK2-e和PhaHAK2-u 等基因均能調(diào)節(jié)鹽生植物中的Na+的濃度[79]。此外,在野生大豆(Glycine sojaSieb.et Zucc.)中分離出的基因GsJAZ2[80]和新型混合富含脯氨酸型基因GsEARL17[81];甜高粱(Sorghum dochna(Forssk.) Snowden)中的SbCIPKs基因[82];蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)中的MtWRKY76[83]以及紫花苜蓿(Medicago sativaL.)中的GsGSTU13[84]等均能有效緩解鹽脅迫對(duì)植物的傷害。雖然轉(zhuǎn)基因技術(shù)能有效增強(qiáng)植物的耐鹽性,但由于植物耐鹽性受到多基因網(wǎng)絡(luò)體系的調(diào)控且不同信號(hào)與代謝途徑間的關(guān)聯(lián)錯(cuò)綜復(fù)雜,而且在技術(shù)方法存在諸多限制,因而研究成果相對(duì)較少,仍存在許多技術(shù)難題需要攻克,其安全性也是備受爭(zhēng)議的話(huà)題[15]。

4.3 與真菌的協(xié)同效應(yīng)

有大量研究表明,真菌普遍存在于土壤中且能與眾多高等植物根系形成互惠的共生體系[85],在專(zhuān)業(yè)術(shù)語(yǔ)上稱(chēng)為“菌根”,菌根有外生菌根和內(nèi)生菌根之分。據(jù)王佺珍等[15]報(bào)道,內(nèi)生菌可通過(guò)參與滲透調(diào)節(jié)、提高光合作用、提高植物營(yíng)養(yǎng)、增強(qiáng)抗氧化系統(tǒng)等方面來(lái)發(fā)揮其增強(qiáng)植物抗鹽性的作用。其中,叢枝菌根(Arbuscular mycorrhizal,AM)作為內(nèi)生菌的一種,能通過(guò)增加葉綠素含量及提高葉綠素?zé)晒庑蕘?lái)有效減輕植物的受迫程度[86],從而提高凈光合速率。張美月等[87]研究表明,接種AM 真菌的草莓能通過(guò)提高草莓對(duì)礦質(zhì)元素,特別是磷元素的吸收來(lái)提高葉片的葉綠素含量,使植株保持較高的光合速率,在一定程度上減弱因鹽脅迫引起的葉綠素分解,從而提高植株的抗鹽性。這與祝文婷等[88]報(bào)道的叢枝菌根真菌具有提高植物抗鹽堿脅迫能力的結(jié)論一致。但AM 真菌對(duì)緩解植物受鹽脅迫傷害的程度是有限的,它受鹽脅迫強(qiáng)度的影響。賈婷婷等[88]在研究AM 真菌對(duì)沙棗(Elaeagnus angustifolia)苗木光合與葉綠素?zé)晒馓匦缘挠绊憰r(shí)發(fā)現(xiàn),隨著鹽處理濃度的升高,AM真菌與沙棗幼苗共生對(duì)沙棗葉片的保護(hù)作用會(huì)逐漸減弱。此外,Porcel 等[89]研究表明,AM 真菌在非鹽脅迫下對(duì)PSII 不起作用,但在鹽脅迫條件下能保護(hù)水稻葉的PSII 系統(tǒng)?？偠灾?菌根真菌作為增強(qiáng)植物抗鹽脅迫性的一種方法,在一定程度上既能提高植物的抗鹽性又能減少化學(xué)制劑的使用,因而可以減輕環(huán)境壓力[15]。

4.4 培育耐鹽品種

通過(guò)與生物技術(shù)手段相結(jié)合、抗鹽堿基因的轉(zhuǎn)移、品種間雜交和對(duì)現(xiàn)有植物進(jìn)行耐鹽堿篩選等都是培育耐鹽堿品種的有效途徑。大部分研究表明,植物的多倍體化可使植物具有較高的耐鹽性,這是由于四倍體在鹽脅迫下能維持正常的離子平衡、較高的抗氧化活性和較低的甲基化和去甲基化比率[90],還能增強(qiáng)植物鉀的積累。例如,重度鹽脅迫下的四倍體金銀花(Lonicera Japonica)與二倍體金銀花相比,仍有較高的 Rubisco 酶活化狀態(tài),PSI 和PSII 均不受光抑制且光合速率受影響的程度小,因此四倍體金銀花更適合栽種于鹽堿地[91]。也有研究報(bào)道[92]鹽脅迫下四倍體柑橘葉片的Na+和Cl-的積累量較多,PSII 受損嚴(yán)重,耐鹽性不如二倍體。因此,鹽脅迫下,不同倍性植物的Na+和Cl-運(yùn)移機(jī)制是否是導(dǎo)致耐鹽能力的差異還需更深入的研究。此外,擬南芥(Arabidopsis thaliana(L.) Heynh.)中多胺氧化酶5 的功能缺失突變[93]、將山菠菜(Prunella asiaticaNakai)的BADH基因轉(zhuǎn)入煙草(Nicotiana tabacumL.)[94]以及二倍體野生西方白三葉(Trifolium occidentaleCoombe)和普通白三葉(Trifolium repensL.)雜交[95]均能選育出耐鹽堿品種。孫衛(wèi)紅等[96]在研究轉(zhuǎn)番茄正義抗壞血酸過(guò)氧化物酶基因(Let APX)對(duì)煙草耐鹽能力的影響時(shí)發(fā)現(xiàn),在鹽脅迫下,將番茄的Let APX轉(zhuǎn)化到煙草中能使煙草保持相對(duì)較高的光合能力,并有效減少Fv/Fm的下降,從而提高煙草的耐鹽能力。

5 結(jié)論與展望

鹽脅迫是一個(gè)復(fù)雜的環(huán)境問(wèn)題,而植物對(duì)鹽脅迫響應(yīng)是一個(gè)復(fù)雜的機(jī)制。人們已從不同方向?qū)Σ煌参锏目果}機(jī)理進(jìn)行研究并提出各種增強(qiáng)植物抗鹽性的方法,其中葉綠素?zé)晒鈩?dòng)力技術(shù)由于其對(duì)植物無(wú)損傷、測(cè)定簡(jiǎn)單快速且能夠揭示熒光變化的每個(gè)過(guò)程和解釋光合作用的機(jī)理等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于植物抗鹽機(jī)理研究及抗鹽能力評(píng)價(jià)。未來(lái)葉綠素?zé)晒鈩?dòng)力技術(shù)在抗鹽脅迫方面的研究熱點(diǎn)如下:

1)目前,葉綠素?zé)晒鈩?dòng)力技術(shù)雖在研究植物的抗鹽性上有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì),但該技術(shù)本身也存在著不容忽視的缺點(diǎn),例如Fv/Fm的獲得必須經(jīng)過(guò)暗適應(yīng),在林冠層難以實(shí)施;測(cè)定區(qū)域有限,如調(diào)制式葉綠素?zé)晒鈨xPAM—2100 暗適應(yīng)夾的有效測(cè)定面積為38.5 mm2;代表性不強(qiáng);多用于室內(nèi)研究,室外極易受到外界條件變化的干擾等等,且該技術(shù)尚未能較全面反映PSII 中水氧化分解的過(guò)程、電子傳遞及合成 ATP 和NADPH 所需的能量等。因此,需要不斷改進(jìn)測(cè)量?jī)x器來(lái)實(shí)現(xiàn)技術(shù)上的突破。

2)對(duì)于鹽脅迫對(duì)植物葉綠素?zé)晒庥绊懙难芯恐饕性趩我畸}分類(lèi)型脅迫,特別是NaCl 脅迫,而對(duì)混合鹽脅迫方面的研究的相對(duì)較少。由于鹽脅迫通常不是由單一的鹽分種類(lèi)引起,不同鹽分離子常常存在交互作用,因此,對(duì)混合鹽脅迫對(duì)葉綠素?zé)晒庥绊懙难芯繉?duì)于提高作物產(chǎn)量和改善生態(tài)環(huán)境具有重要意義。

3)鹽脅迫雖會(huì)降低植物產(chǎn)量,但也會(huì)提高一些植物果實(shí),如小麥、燕麥(Avena sativaL.)和番茄等的質(zhì)量。因此在鹽脅迫下,運(yùn)用葉綠素?zé)晒鈩?dòng)力技術(shù)來(lái)反映植物光合作用的變化,并建立與產(chǎn)量和質(zhì)量的關(guān)系,揭示其高產(chǎn)的形成機(jī)理,確定達(dá)到植物最高產(chǎn)量和最佳質(zhì)量的鹽濃度平衡閾值,是今后研究的一個(gè)新方向。

4)目前,大多數(shù)的鹽脅迫研究多集中在植物種子萌發(fā)和幼苗時(shí)期,對(duì)植物整個(gè)生命過(guò)程的系統(tǒng)研究較少。因此,研究鹽脅迫下植物不同生長(zhǎng)時(shí)期內(nèi)的熒光參數(shù)動(dòng)態(tài)與生長(zhǎng)發(fā)育規(guī)律的關(guān)系,有利于明確植物在不同生長(zhǎng)期的鹽適應(yīng)機(jī)制。

5)目前,針對(duì)鹽脅迫下植物分子機(jī)制的研究尚處于初級(jí)階段,對(duì)于耐鹽堿相關(guān)基因的篩選、基因家族轉(zhuǎn)錄組的測(cè)序以亞細(xì)胞的定位等是當(dāng)前研究的熱門(mén)方向。另外,鹽脅迫信號(hào)元件的分子特性,液泡膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白及質(zhì)子泵的功能和突變體篩選有待深入研究。因此,將葉綠素?zé)晒鈩?dòng)力技術(shù)與植物生理學(xué)、基因組學(xué)、分子生物學(xué)和蛋白組學(xué)等不同學(xué)科相結(jié)合,通過(guò)環(huán)境友好型的生物手段全方位闡釋植物的抗鹽機(jī)制,篩選和改造耐鹽植物是未來(lái)研究的熱門(mén)課題。