■伍 劍劉 棋熊 毅鐘 銘萬(wàn)海峰李 勇吳 德

（1.廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，廣西南寧530004；2.廣西動(dòng)物疫病控制中心，廣西南寧530004；3.廣西種豬營(yíng)養(yǎng)工程技術(shù)中心，廣西南寧530105；4.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)研究所，四川成都611130）

仔豬斷奶時(shí)從母體獲得的免疫保護(hù)逐漸下降，自身免疫系統(tǒng)未發(fā)育完善，易受環(huán)境的改變產(chǎn)生免疫應(yīng)激，導(dǎo)致機(jī)體代謝發(fā)生改變，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的分配由維持生長(zhǎng)向維持免疫相關(guān)的過(guò)程轉(zhuǎn)變，導(dǎo)致仔豬生長(zhǎng)緩慢，飼料轉(zhuǎn)化率降低[1]。采取營(yíng)養(yǎng)措施調(diào)控仔豬免疫應(yīng)激對(duì)提高生產(chǎn)效益具有重要意義。妊娠階段是胎豬在母體內(nèi)發(fā)育的過(guò)程，妊娠期母體的營(yíng)養(yǎng)供給可影響后代的生長(zhǎng)發(fā)育及抗病能力[2]，因此有可能通過(guò)母體營(yíng)養(yǎng)手段降低仔豬斷奶免疫應(yīng)激。膳食纖維是不能被哺乳動(dòng)物消化酶消化的非淀粉多糖和木質(zhì)素的總稱[3]，因其對(duì)動(dòng)物和人類健康有重要作用而被稱為第七大營(yíng)養(yǎng)素。研究表明，膳食纖維可提高母豬胎產(chǎn)活仔數(shù)[4]，改善抗氧化性能[5]，影響血清免疫球蛋白水平和細(xì)胞因子水平[6]。關(guān)于母豬攝入膳食纖維是否會(huì)影響仔豬斷奶免疫應(yīng)激還未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)采用脂多糖（LPS）建立斷奶仔豬免疫模型，研究母體攝入復(fù)合膳食纖維對(duì)后代仔豬免疫調(diào)控的影響，為生產(chǎn)實(shí)際中通過(guò)母體營(yíng)養(yǎng)調(diào)節(jié)斷奶仔豬應(yīng)激提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

復(fù)合膳食纖維(DFC)：含60%纖維素、40%菊粉（純度＞90%），由廣西商大科技股份有限公司提供；脂多糖：血清型O55∶B5（Sigma）。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及日糧

選取丹系經(jīng)產(chǎn)純種母豬，日糧參照美國(guó)NRC（1998）肥育豬的營(yíng)養(yǎng)需要配成粉狀全價(jià)料，日糧配方及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼養(yǎng)管理

采用2×2雙因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選取丹系經(jīng)產(chǎn)純種母豬（3～6胎）24頭隨機(jī)分為四組，每組6頭，試驗(yàn)組Ⅰ(0%DFC-LPS)和試驗(yàn)組Ⅱ(0%DFC+LPS)妊娠母豬日糧中添加0%DFC，后代斷奶仔豬分別注射生理鹽水和脂多糖（LPS），試驗(yàn)組Ⅲ(3%DFC-LPS)和試驗(yàn)組Ⅳ(3%DFC+LPS)妊娠母豬日糧中添加3%DFC，后代斷奶仔豬分別注射生理鹽水和LPS，母豬泌乳期及仔豬采食相同日糧。母豬妊娠第1～30、31～60、61～90 d和91 d～分娩每頭母豬每天分別飼喂2.0、2.2、2.4、2.8 kg日糧。試驗(yàn)?zāi)肛i泌乳期采食相同日糧，自由采食。仔豬21日齡斷奶，每組選擇接近平均斷奶體重的仔豬1頭單欄飼養(yǎng)，進(jìn)行LPS攻毒試驗(yàn)，試驗(yàn)從斷奶持續(xù)至斷奶后14 d，在試驗(yàn)的第7 d試驗(yàn)組Ⅱ和試驗(yàn)組Ⅳ進(jìn)行LPS攻毒（25 μg/kg BW），試驗(yàn)組Ⅰ和試驗(yàn)組Ⅲ注射相同劑量的生理鹽水，攻毒4 h后，采前腔靜脈血10 ml，分離血清，于-20℃冷凍保存待測(cè)，攻毒試驗(yàn)期仔豬飼喂相同日糧。

表1 母豬妊娠日糧組成和營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.4 檢測(cè)指標(biāo)

生長(zhǎng)性能包括平均日采食量(ADFI)、平均日增重（ADG）、飼料轉(zhuǎn)化率（FCR）。

血清細(xì)胞因子IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF-α，采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA法，向預(yù)先包被了抗體的酶標(biāo)孔中加入樣本，再加入生物素標(biāo)記的識(shí)別抗原，在37℃下孵育1 h，兩者與固相抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合形成免疫復(fù)合物，經(jīng)PBST洗滌除去未結(jié)合的生物素抗原，然后加入親和素-HRP，在37℃下孵育1 h，親和素-HRP與生物素結(jié)合，洗滌后結(jié)合的HRP催化TMB（四甲基聯(lián)苯胺）成藍(lán)色，隨后在酸的作用下轉(zhuǎn)化為黃色，在450 nm波長(zhǎng)下有吸收峰，吸光值與樣本中濃度成負(fù)相關(guān)。試劑盒由南京建成生物工程研究所提供，操作過(guò)程嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行。

血清IgG、IgM水平采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)。

1.5 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)用SPSS軟件GLM程序進(jìn)行兩因子方差分析，模型主效應(yīng)包括母豬妊娠期攝入DFC和后代仔豬LPS應(yīng)激處理以及二者的交互作用，同時(shí)對(duì)4個(gè)處理進(jìn)行單因素方差分析和Duncan's法多重比較，數(shù)據(jù)均以“平均值±SEM”表示，結(jié)果以P＜0.05表示統(tǒng)計(jì)差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能的影響（見(jiàn)表2）

表2 母豬妊娠期日糧添加DFC對(duì)注射LPS斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響

LPS顯著降低了仔豬末重、ADFI、ADG及FCR（P＜0.05），母豬妊娠期攝入DFC與LPS攻毒對(duì)仔豬ADG存在顯著交互作用（P=0.046），試驗(yàn)組Ⅳ仔豬ADG顯著高于試驗(yàn)組Ⅱ（P＜0.05），說(shuō)明母豬妊娠期攝入DFC可緩解后代仔豬遭受LPS攻毒后生長(zhǎng)速度的降低。

2.2 LPS攻毒后斷奶仔豬血清免疫球蛋白的影響（見(jiàn)表3）

表3 母豬妊娠期日糧添加DFC對(duì)注射LPS斷奶仔豬血清免疫球蛋白的影響(g/l)

LPS攻毒顯著提高了仔豬血清IgG的水平（P＜0.05），母豬妊娠期攝入DFC與LPS攻毒對(duì)仔豬血清免疫球蛋白水平無(wú)顯著交互作用。

2.3 LPS攻毒后斷奶仔豬血清細(xì)胞因子的影響(見(jiàn)表4)

表4 母豬妊娠期日糧添加DFC對(duì)注射LPS斷奶仔豬血清細(xì)胞因子的影響(ng/l)

LPS攻毒顯著提高了仔豬血清IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-10的水平（P＜0.05），母豬妊娠期攝入DFC與LPS攻毒對(duì)仔豬血清TNF-α水平存在顯著交互作用（P=0.029），試驗(yàn)組Ⅳ仔豬血清TNF-α顯著低于試驗(yàn)組Ⅱ（P＜0.05）。

3 討論

LPS是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的一種多糖，通過(guò)注射LPS構(gòu)建豬免疫應(yīng)激模型是常用的研究方法。LPS進(jìn)入機(jī)體后，可引發(fā)炎癥連鎖反應(yīng)，導(dǎo)致豬出現(xiàn)厭食、嗜睡和發(fā)熱等癥狀，并降低豬的生長(zhǎng)性能[7-9]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，LPS顯著降低仔豬的ADG、ADFI以及FCR，說(shuō)明本試驗(yàn)通過(guò)注射LPS成功構(gòu)建了仔豬免疫應(yīng)激模型。LPS通過(guò)刺激機(jī)體產(chǎn)生較高水平的免疫球蛋白以對(duì)抗抗原，并刺激巨噬細(xì)胞合成和分泌IL-6、IL-10和TNF-α等炎性細(xì)胞因子[10]，本試驗(yàn)結(jié)果表明LPS顯著提高了仔豬血清免疫球蛋白和細(xì)胞因子的水平，說(shuō)明LPS對(duì)仔豬造成了免疫應(yīng)激，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)向免疫系統(tǒng)合成免疫球蛋白，從而降低飼料轉(zhuǎn)化率和仔豬生長(zhǎng)速度。

關(guān)于母體纖維營(yíng)養(yǎng)是否會(huì)影響后代仔豬免疫應(yīng)激情況下的生長(zhǎng)性能的研究還未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)結(jié)果表明母豬妊娠期攝入DFC與注射LPS對(duì)仔豬ADG和血清TNF-α水平的影響存在顯著交互作用，母豬妊娠期攝入DFC顯著降低后代仔豬LPS攻毒后血清TNF-α水平，說(shuō)明母豬妊娠期攝入DFC可緩解因注射LPS導(dǎo)致的仔豬免疫應(yīng)激和生長(zhǎng)抑制現(xiàn)象，原因可能與妊娠期母體攝入DFC促進(jìn)了胎兒的發(fā)育有關(guān)。母體的營(yíng)養(yǎng)供給會(huì)影響胎兒基因表達(dá)及內(nèi)分泌,從而影響胎兒的健康發(fā)育和生理功能，這將對(duì)出生后后代的免疫系統(tǒng)的發(fā)育產(chǎn)生影響[11-12]。馮冬冬等（2011）[13]研究表明妊娠母豬攝入纖維可增加仔豬心臟、肝臟、腎臟器官指數(shù)，提示纖維對(duì)胎豬發(fā)育的促進(jìn)作用。Yan等(2011)[14]等研究表明母體攝入纖維可影響胎盤養(yǎng)分轉(zhuǎn)動(dòng)能力，進(jìn)而促進(jìn)胎兒發(fā)育。胎兒發(fā)育不良將損傷動(dòng)物出生后體液免疫和細(xì)胞免疫，影響其生長(zhǎng)性能[15-17]。因此，推測(cè)母豬妊娠期攝入DFC降低后代仔豬免疫應(yīng)激的機(jī)理可能與纖維促進(jìn)胎豬的發(fā)育，改善出生后仔豬免疫功能相關(guān)。

4 結(jié)論

母豬妊娠期日糧添加復(fù)合膳食纖維可緩解LPS誘導(dǎo)的后代仔豬免疫應(yīng)激。