孫曉春，李 鉑，黃文靜，王 楠，宋忠興，唐志書

(陜西中醫(yī)藥大學(xué) 陜西省中藥資源產(chǎn)業(yè)化協(xié)同創(chuàng)新中心，陜西 咸陽 712083)

當(dāng)歸為傘形科植物當(dāng)歸Angelicasinensis( Oliv. ) Diels的干燥根，其性溫，味甘、辛。歸肝、心、脾經(jīng)；具有補血活血、調(diào)經(jīng)止痛等功效[1～2]。主要包括揮發(fā)油[3]、多糖[4]、有機酸[5]等成分。研究顯示，阿魏酸具有抗氧化和清除自由基的作用，同時還具有抗腫瘤、降血脂、抗病毒等重要作用[2,6]?！吨袊幍洹?015年版將阿魏酸規(guī)定為當(dāng)歸藥材的檢測指標(biāo)。王婕等[7]建立了HPLC法測定當(dāng)歸藥材中阿魏酸和藁本內(nèi)酯含量的方法。李琰等[8]以HPLC法測定21個產(chǎn)地當(dāng)歸的阿魏酸含量，阿魏酸的含量在0.243%～1.026%之間，結(jié)果表明不同產(chǎn)地的當(dāng)歸阿魏酸含量相差較大。目前關(guān)于當(dāng)歸多糖[9～10]、揮發(fā)油[11]的抗氧化活性研究均有報道。筆者對甘肅省隴南市宕昌縣采收的12批當(dāng)歸藥材中阿魏酸含量進行了測定，并對其中4批藥材醇提物的體外抗氧化活性進行了檢測，為天然抗氧化劑的開發(fā)提供數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

當(dāng)歸采收于甘肅省隴南市宕昌縣。經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室王繼濤高級實驗師鑒定為為傘形科植物當(dāng)歸Angelica sinensis ( Oliv. ) Diels的干燥根。

阿魏酸對照品(批號wkq17022303，四川省維克奇生物科技有限公司出品)，甲醇(成都市科隆化學(xué)品有限公司)，DPPH (笛醫(yī)生物科技有限公司)，Vc(成都科龍化工試劑廠)，總抗氧化能力試劑盒 (批號20180306，南京建成生物工程研究所)，超氧陰離子清除能力試劑盒(批號201702，蘇州科銘生物技術(shù)有限公司)。

KQ3200超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)，F(xiàn)A2004B電子天平(上海佑科儀器儀表有限公司)，UV-2600紫外分光光度計(日本島津)，1510全波長酶標(biāo)儀(賽默飛世爾科技公司)，e2695高效液相色譜儀(沃特世科技有限公司)。

1.2 當(dāng)歸醇提物制備

參照《中國藥典》2015年版進行制備。

1.3 阿魏酸含量檢測

參照《中國藥典》2015年版，色譜條件：色譜柱Agilent TC-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈-0.085%磷酸溶液(17∶83)為流動相；流速1.0 mL·min-1檢測波長為316 nm；柱溫35 ℃。

1.4 清除DPPH·活性測定方法

參照吳小燕等[12]的清除DPPH·活性測定方法。

1.5 清除·OH活性測定方法

參照汪荔等[13]的清除·OH活性測定方法，以水楊酸法測·OH清除率。

1.6 總抗氧化能力測定

按照試劑盒說明書操作。

1.7 清除超氧陰離子自由基活性

按照試劑盒說明書操作。

1.8 統(tǒng)計分析

試驗所得數(shù)據(jù)利用Excel 2013進行分析和制圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 阿魏酸含量檢測結(jié)果

阿魏酸對照品色譜圖如圖1A所示，當(dāng)歸樣品色譜圖如圖1B所示，其中保留時間17.1 min色譜峰為阿魏酸。12批當(dāng)歸樣品中阿魏酸含量檢測結(jié)果如表1所示。阿魏酸含量在0.1393%～0.2335%之間，均高于中國藥典規(guī)定的0.05%。

圖1 對照品(A)和供試品(B)高效液相色譜

編號s1s2s3s4s5s6s7s8s9s10s11s12阿魏酸含量/%0.23350.22310.18580.13930.18630.20640.18340.17650.21420.15970.15940.1955

2.2 體外抗氧化性檢測結(jié)果

2.2.1 清除DPPH·活性測定結(jié)果 隨機選取4批當(dāng)歸醇提物(s2、s7、s10和s12)進行體外抗氧化活性檢測，以Vc作為對照。對DPPH·清除結(jié)果如圖2所示。4批當(dāng)歸醇提物對DPPH·均具有清除作用，并且隨濃度增加，清除作用增加，呈量效關(guān)系。濃度為8 μg·mL-1時，s2、s7、s10和s12對DPPH·的清除率分別為77.98%、81.44%、81.97%和85.16%，相同濃度下Vc對DPPH·的清除率為53.65%。結(jié)果表明當(dāng)歸醇提物對DPPH·的清除作用高于Vc對DPPH·的清除作用。

2.2.2 清除·OH活性測定結(jié)果 對·OH的清除結(jié)果如圖3所示。4批當(dāng)歸醇提物對·OH的清除作用良好。濃度為0.5 μg·mL-1時，s2、s7、s10和s12對·OH的清除率分別為53.06%、47.15%、67.45%和62.42%，相同濃度下Vc對·OH的清除率為6.56%。結(jié)果表明當(dāng)歸醇提物對·OH的清除作用高于Vc對·OH的清除作用。

圖2 當(dāng)歸醇提物和Vc對DPPH·清除結(jié)果

圖3 當(dāng)歸醇提物和Vc對·OH清除結(jié)果

圖4 當(dāng)歸醇提物和Vc對清除結(jié)果

2.2.4 總抗氧化能力測定結(jié)果 按照試劑盒方法操作，樣品抗氧化活性以達到同樣A 值所需的FeSO4 的濃度(mmol·L-1)表示，所需FeSO4的量越大，表明總抗氧化能力越高。結(jié)果如圖5所示，在相同濃度下，當(dāng)歸醇提物的總抗氧化能力均高于Vc的總抗氧化能力。

圖5 歸醇提物和Vc的總抗氧化能力檢測結(jié)果

3 結(jié)論

所采樣品中阿魏酸含量在0.1393%～0.2335%之間，均高于中國藥典規(guī)定的0.05%。采用四種體系(·OH、DPPH·、O2-·和總抗氧化能力)檢測了當(dāng)歸醇提物的體外抗氧化能力，均高于同濃度下Vc的抗氧化能力。結(jié)果表明，宕昌當(dāng)歸醇提物具有良好的體外抗氧化能力，可為天然抗氧化劑的開發(fā)提供理論數(shù)據(jù)。