陳彩霞綜述，蘇麗婭，任建軍審校

0 引 言

肝是哺乳動物最大的腺體，具有多種內(nèi)分泌和外分泌功能，包括碳水化合物、脂質(zhì)和氨基酸代謝、尿素合成、藥物和毒性內(nèi)源性化合物的解毒、膽汁產(chǎn)生和血漿蛋白質(zhì)分泌。肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）約占全部肝癌病例的90%，每年造成50萬人死亡，嚴(yán)重危害人類健康［1］。HCC涉及多種危險因素，包括慢性乙型肝炎病毒（hepatitis B vi?rus，HBV）或丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）感染、性別、年齡、乙醇和黃曲霉毒素B暴露等。HCC還涉及遺傳和表觀遺傳變化，包括突變易位、擴(kuò)增或缺失、染色質(zhì)重塑、DNA甲基化改變和非編碼RNA表達(dá)［2］。目前，手術(shù)肝切除和肝移植仍是HCC患者的主要治療手段。切除術(shù)對HCC患者具有良好的療效，當(dāng)腫瘤獨立且＜2cm時，切除后患者存活率接近70%，遺憾的是，只有10%左右的患者符合手術(shù)條件。為改善HCC患者預(yù)后，迫切需要了解HCC發(fā)病的分子機(jī)制，找出有效的治療策略，更好的理解分子機(jī)制有助于區(qū)分進(jìn)展型和非進(jìn)展型HCC，對于HCC早期診斷、探索新型的預(yù)后指標(biāo)和治療靶點至關(guān)重要。

MicroRNAs（miRNAs）是由18-25個核苷酸組成的短鏈非編碼RNA，由pri miRNAs加工而成，通過直接與靶基因3′非編碼區(qū)域（3′-UTRs）的特異序列結(jié)合，有助于靶基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控，現(xiàn)在已證實其至少影響人類30%的基因表達(dá)，成為當(dāng)今調(diào)控基因表達(dá)最豐富的調(diào)控者。在人類癌癥中miRNAs通過各種機(jī)制（包括miRNAs基因的擴(kuò)增或缺失、miR?NAs的異常轉(zhuǎn)錄及表觀遺傳改變失調(diào)）導(dǎo)致表達(dá)失調(diào)。在某些條件下，miRNAs可作為致癌基因或腫瘤抑制基因，從而調(diào)節(jié)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。失調(diào)的miRNAs能夠介導(dǎo)癌癥的發(fā)生及發(fā)展，包括維持增殖信號傳導(dǎo)、逃避生長抑制劑、抵抗細(xì)胞死亡、激活侵襲和轉(zhuǎn)移通路以及誘導(dǎo)血管生成。越來越多的研究已將miRNAs作為人類癌癥診斷、預(yù)后和治療靶點或潛在生物標(biāo)志物［3］。本文通過結(jié)合國內(nèi)外文獻(xiàn)，對近年來miRNAs在HCC診斷、治療及預(yù)后的相關(guān)進(jìn)展作一綜述。

1miRNAs與HCC的診斷

1.1 miRNA表達(dá)譜一些關(guān)于HCC的miRNA表達(dá)譜的研究結(jié)果顯示，miRNA表達(dá)與肝細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展和治療之間存在一定的相關(guān)性［4］。Wei等［5］發(fā)現(xiàn)，一個含有30種miRNA的表達(dá)譜能夠區(qū)分HCC和相應(yīng)的非癌性肝組織，且可用于HCC的分類和預(yù)后。此外，Jiang等［6］對28對肝細(xì)胞癌和癌旁良性組織之間發(fā)現(xiàn)了差異表達(dá)的16種miRNA。用這16種miRNA的表達(dá)譜區(qū)分HCC和非癌性肝的分類準(zhǔn)確率達(dá)96.4%。在這16種miRNA中，有5種miR?NA存在于Wei等［5］發(fā)現(xiàn)的30種miRNA的表達(dá)譜中。同年，又發(fā)現(xiàn)69種miRNA顯示在中國東部地區(qū)的78對肝癌和相應(yīng)的非癌性肝組織中表達(dá)差異顯著，89.7%的樣本可通過69-miRNA特征正確分類［5］。有趣的是，有 11 種 miRNA（hsa-let-7i、hsamiR-103、hsamiR-106b、hsa-miR-130b、hsa-miR-18a、hsa-miR-20a、hsa-miR-20b、hsa-miR-210、hsa-miR-221、hsa-miR-451和hsa-miR-93）在69種miRNA的表達(dá)譜和Wei等［5］的30種miRNA表達(dá)譜重合。經(jīng)過驗證，研究人員鑒別出的這30種miRNA表達(dá)譜鑒定肝癌和非癌癥肝的準(zhǔn)確率為99.2%，且準(zhǔn)確性高于以前報道的所有miRNA表達(dá)譜。

有研究使用血清樣品發(fā)現(xiàn)，miR-25，miR-375和let-7f的組合可將健康對照樣品與HBV相關(guān)HCC樣品區(qū)分開，而miR-16，miR-195和miR-199a的組合可區(qū)分HBV與慢性HBV感染相關(guān)的HCC［7］。在驗證研究中，發(fā)現(xiàn)miR-15b和miR-130b的組合能夠有效預(yù)測HCC，并能早于甲胎蛋白檢測HCC［7］。miR-15b和miR-130的組合也能夠以高靈敏度和特異性區(qū)分HCC和健康人標(biāo)本，這些為HCC的早期發(fā)現(xiàn)提供了希望。在最近的一項研究中，應(yīng)用miRNAs表達(dá)譜鑒定HBV-或HCV-HCC相關(guān)的肝組織，結(jié)果發(fā)現(xiàn)40個差異表達(dá)的miRNAs，其中10個嚴(yán)重失調(diào)，但是與HCC患者相比，僅有miR-126和miR-142-3p在患有HCC的HBV患者的血漿中升高［8］。在回顧性研究中，HCC腫瘤組織中miR-15b，miR-21，miR-130b和miR-183相對于相鄰的非腫瘤組織呈上調(diào)狀態(tài)；在血清和細(xì)胞培養(yǎng)上清液中可檢測到這些miRNAs的水平，手術(shù)切除后血清水平顯著下降［9］。

與某個單一miRNAs相比，miRNAs表達(dá)譜用于HCC的診斷或預(yù)后預(yù)測，克服前者的偶然性及個體差異性，更具有臨床指示意義。對于HCC和非癌肝組織的miRNAs差異表達(dá)的研究表明，miRNAs表達(dá)譜可能是一種潛在的診斷工具，不僅能夠幫助探索肝癌發(fā)生的分子機(jī)制，還能為肝細(xì)胞癌治療的新分子靶點提供線索。

1.2 miRNA122miRNAs在哺乳動物中的發(fā)現(xiàn)源于土撥鼠肝腫瘤基因改變的研究。1989年，有研究描述了與這一腫瘤相關(guān)的c-myc重排基因及名為“hcr”一種不尋常的轉(zhuǎn)錄物，同時將這一轉(zhuǎn)錄本定性為內(nèi)切核酸酶處理后的肝特異性非編碼的核物質(zhì)，而“hcr”正是miR-122的前體。在目前的理解中，預(yù)計包含“pri-miRNA”的hcr轉(zhuǎn)錄物的部分將會被內(nèi)切核酸酶處理，從而形成66nt長的“premiRNA”，其呈現(xiàn)具有79%堿基配對的發(fā)夾結(jié)構(gòu)，并最終被內(nèi)切酶Dicer切割形成成熟的miR-122。2002年，從不同小鼠組織中進(jìn)行miRNA的系統(tǒng)克隆和測序，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-122在肝中是含量最豐富的miRNA［10］。此外，在土撥鼠、人類肝、人類原代肝細(xì)胞和培養(yǎng)的源于肝的細(xì)胞（如小鼠Hepa1-6細(xì)胞和人類Huh7細(xì)胞）中均發(fā)現(xiàn)了miR-122［11］。更進(jìn)一步的研究表明，在小鼠胚胎生長過程中，miR122在小鼠胚胎肝中的表達(dá)逐漸上調(diào)，通過抑制其下游靶基因調(diào)節(jié)肝細(xì)胞的增殖和分化，從而保障肝發(fā)育順利進(jìn)行［12］。然而，miR-122在患HCC的人類和嚙齒動物肝中顯著并特異性地下調(diào)［13］。這說明，肝中miR122的表達(dá)調(diào)控作用因肝狀態(tài)而異，且在正常肝的生長發(fā)育及肝癌發(fā)生中的有一定作用。研究人員進(jìn)一步在肝癌來源的細(xì)胞系中發(fā)現(xiàn)，miR-122可調(diào)節(jié)細(xì)胞周期蛋白G1的表達(dá)，且原發(fā)性肝癌中miR-122a和細(xì)胞周期蛋白G1的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)［14］。細(xì)胞周期蛋白G1不僅參與DNA復(fù)制還促進(jìn)凋亡和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起作用，并推斷miR-122可能是通過細(xì)胞周期蛋白G1介導(dǎo)HCC的發(fā)生與發(fā)展。

HCC患者與健康人及其他肝疾病患者肝腫瘤組織、血清、血漿和尿液中的miRNAs概況各不相同。雖然miR-122在原發(fā)性HCC腫瘤中表達(dá)下調(diào)，但是在HCC患者血清中表達(dá)上調(diào)，這可能是miR-122從腫瘤進(jìn)入循環(huán)中釋放造成的結(jié)果［15］。另外，研究人員通過比較成人和/或胎兒肝中miRNAs的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，miR-122是成年肝中表達(dá)最高的miRNA，而miR-92a和miR-483在胎兒肝中更為特異［16］。因此，在尋找參與肝疾?。ㄓ绕銱CC）的miRNAs失調(diào)的途徑時，miR-122充當(dāng)了舉足輕重的角色。

1.3 miR-199a*(miR-199a-3p)miR?199a基因位于染色體1和19上，miR-199a-1位于染色體19p13.2上的Dynamin 2（DNM2）基因的內(nèi)含子中。miRNA基因可表達(dá)miRNA成熟鏈或與其配對的miRNA*鏈。盡管miRNA鏈通常較miRNA*鏈表達(dá)水平更高，但肝組織中的miR-199a基因并非如此，其中miR-199a*表達(dá)較miR-199a表達(dá)高 100至 300倍［17］。確實有研究表明，miR-199a和miR-199a*在肝癌癌組織中的表達(dá)量較相鄰的癌旁組織降低了約2倍［17］。研究人員通過定量聚合酶鏈反應(yīng)（qPCR）測定了miR-199a和miR-199a*在各種HCC細(xì)胞系（Skep-1、SNU449、SNU182、HepG2、Hep38、Huh7 和 PLC/PRF5）中的表達(dá)，結(jié)果顯示，在任何一種均不能檢測到成熟的miR-199a和miR-199a*，但在來自各種腫瘤（包括乳腺癌、肺癌、結(jié)直腸癌、前列腺癌、頭頸癌、胰腺癌和血液惡性腫瘤）的37種細(xì)胞系中卻非如此發(fā)現(xiàn)［18］。因此，HCC腫瘤標(biāo)本中miR-199a*的水平有所下降，且在各種HCC細(xì)胞系中無法通過qPCR檢測。而且miR-199a*的這種表達(dá)失調(diào)一般在易患肝癌的條件下發(fā)生，包括脂肪性肝炎、肝纖維化、肝功能衰竭和 HCC［19］。因此，miR-199a*可能在未來作為HCC早期診斷的分子標(biāo)志物。

miR-199a*調(diào)控細(xì)胞功能也可能有助于HCC的發(fā)展。miR-199a*能夠靶向作用于c-MET原癌基因。c-MET為肝細(xì)胞生長因子受體產(chǎn)生跨膜酪氨酸激酶受體。c-MET蛋白通過誘導(dǎo)細(xì)胞運動、侵入和抑制細(xì)胞凋亡來促進(jìn)侵襲性生長?；罨腸-MET增加與HCC患者存活率差有關(guān)［20］。miR-199a*模擬物能夠逆轉(zhuǎn)MET誘導(dǎo)的多種癌細(xì)胞系的侵襲性生長。在增殖活躍的腫瘤中，miR-199a/a*基因座被嚴(yán)重甲基化，唯一表達(dá)這些miRNA的細(xì)胞是腫瘤內(nèi)的成纖維細(xì)胞。將miR-199a*導(dǎo)入腫瘤細(xì)胞時，能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡［18］。Fornari等［21］證實，向HCC組織添加miR-199a*通過與c-MET產(chǎn)生相互作用導(dǎo)致G1期細(xì)胞周期停滯。增加miR-199a*水平導(dǎo)致細(xì)胞對阿霉素敏感性增加、對缺氧的敏感性增加、細(xì)胞凋亡增強(qiáng)、G1期細(xì)胞周期停滯和侵襲能力降低［22］。miR-199a*最終的驗證靶點是ERK，雖然這是c-MET的下游靶點，但是被miR-199a*獨立下調(diào)。miR-199a*似乎對c-MET信號傳導(dǎo)途徑具有多重控制作用，因此，miR-199a*表達(dá)可能在HCC中是動態(tài)變化的。

1.4 miR-224關(guān)于HCC中的血漿/血清miRNA，不少研究小組已經(jīng)報道了在血漿/血清中循環(huán)miR?NA在臨床應(yīng)用中的潛在用途。然而，這些miRNA不一定是HCC的候選者，有必要尋找一些不依賴肝基礎(chǔ)疾病和肝功能情況且對HCC早期檢測和治療更敏感、更有研究及應(yīng)用前景的候選者。關(guān)于既不依賴肝疾病及肝功能又對早期HCC檢測敏感性強(qiáng)的理想血液分子生物標(biāo)志物的報道較少。近期，有研究人員通過NCBI數(shù)據(jù)庫中的HCC系統(tǒng)回顧和各種驗證分析選擇候選miRNA，并將血漿miR-224鑒定為HCC診斷和治療的新型生物標(biāo)志物［22］。具體而言，HCC患者中血漿miR-224的表達(dá)水平顯著高于健康志愿者。此外，使用血漿miR-224的HCC檢測的優(yōu)點在于，此方法不受基礎(chǔ)肝病和肝功能障礙程度的影響，即使在肝硬化中也是如此。這些發(fā)現(xiàn)可能有助于HCC治療過程中更敏感的診斷和更好的診療決策，并且證明miR-224作為一種新型的、非侵入性的基于液體的HCC的生物標(biāo)志物的意義。miR-224主要通過信號通路（如NF-κB炎癥信號通路和TGF-β信號通路）調(diào)節(jié)發(fā)揮作用［23］。該分子也被報道為細(xì)胞周期進(jìn)程的主要調(diào)節(jié)者，并且其過表達(dá)會導(dǎo)致G1/S檢查點釋放，隨后加速細(xì)胞生長［23］。在將這些研究結(jié)果轉(zhuǎn)化為HCC患者的臨床應(yīng)用及非侵入性篩查之前，許多問題有待解決。如應(yīng)該使用不同體液和高通量平臺的方法尋找其他更敏感的候選miRNA作為基于液體的生物標(biāo)記物來診斷和監(jiān)測HCC。

2miRNAs與HCC的治療

2.1 miR-127miR-127位于Dlk1-Gt12印跡區(qū)域內(nèi)。miR-127與miR-433成簇表達(dá)，且這兩種miR?NA主要轉(zhuǎn)錄物受核受體信號（包括小異二聚體伴侶和雌激素相關(guān)受體γ）的調(diào)控。目前，還未報道m(xù)iR-127的體內(nèi)生理功能的相關(guān)信息；在病理作用方面，盡管有關(guān)于其與肺癌、宮頸癌及直腸癌的相關(guān)報道，但關(guān)于其在人類肝癌中的潛在作用仍未有定論。

MHCC97H是一種轉(zhuǎn)移性肝癌細(xì)胞系，其侵襲性較其他HCC細(xì)胞（包括HepG2、Hep3B、Huh7和MHCC97L）強(qiáng)。研究發(fā)現(xiàn)，miR-127的過度表達(dá)減少了約40%的MHCC97H的遷移率；相反，使用miR-127特異性抑制劑（抗-miR-127）敲低內(nèi)源性miR-127，有助于MHCC97H細(xì)胞遷移，主要機(jī)制是影響了轉(zhuǎn)化生長因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）下游的靶基因基質(zhì)金屬蛋白酶13［24］。這些結(jié)果提示miR-127可能具有抑制HCC侵襲及轉(zhuǎn)移的作用。這與之前在HCC發(fā)生過程中，大鼠肝中miR-127顯著下調(diào)的研究結(jié)論矛盾［25］，所以，miR-127在HCC中的功能存在爭議，有待進(jìn)一步深入研究，以探索miR-127在HCC中的確切功能，將其開發(fā)為一種HCC的治療劑。

HCC的發(fā)病率已經(jīng)轉(zhuǎn)向相對較低的年齡，因此肝癌已成為中國乃至世界的主要健康問題。TGF-β在與HCC進(jìn)展和轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因特征中占有重要地位，表達(dá)TGF-β的腫瘤具有侵入性強(qiáng)、復(fù)發(fā)率高的特點。所以，根據(jù)miR-127能夠拮抗TGF-β介導(dǎo)的HCC細(xì)胞遷移，可將miR-127開發(fā)為HCC潛在的腫瘤抑制劑，這可能有助于miRNAs相關(guān)的腫瘤療法的發(fā)展，但需要進(jìn)一步研究驗證。

2.2 miR-148amiR-148a可通過多種機(jī)制介導(dǎo)HCC的發(fā)生與發(fā)展。在培養(yǎng)的HCC細(xì)胞和小鼠異種移植模型中，miR-148a通過抑制不同的癌蛋白信號通路來抑制腫瘤間質(zhì)轉(zhuǎn)化、侵襲和轉(zhuǎn)移，發(fā)揮了內(nèi)在的腫瘤抑制作用［26］。miR-148a缺陷小鼠通過多種復(fù)雜機(jī)制促進(jìn)二乙基亞硝胺（diethylnitrosa?mine，DEN）誘導(dǎo)的HCC發(fā)生，且通過慢病毒轉(zhuǎn)染重新表達(dá)miR-148a可逆轉(zhuǎn)腫瘤易感性，說明miR-148a表達(dá)恢復(fù)可抑制DEN誘導(dǎo)的小鼠肝癌發(fā)生，此過程可能是由miR-148a直接或間接抑制多種功能相關(guān)基因（編碼促進(jìn)HCC進(jìn)展的關(guān)鍵因子，如c-Myc、Dn?mt1、Wnt1、Ybx1、Sirt7 和 Pgc1α）的表達(dá)所介導(dǎo)的［27］。最近研究顯示，使用miR-148a模擬治療Pten基因敲除的HCC小鼠，能夠顯著抑制腫瘤生長速度和腫瘤發(fā)展，這些作用部分由IkB激酶α/NUMB/NOTCH信號介導(dǎo)產(chǎn)生，與腫瘤細(xì)胞分化有關(guān)［28］。因此，miR-148a可能成為HCC患者miRNA替代治療的候選者。miR-148a不僅可能作為HCC診斷和預(yù)后的生物標(biāo)志物，還有望成為HCC治療的靶點。

2.3 miR-122耐藥性的發(fā)展是癌癥化療失敗的主要原因。肝癌患者易對常規(guī)化療藥物產(chǎn)生耐藥性。因此，提高肝癌化療的療效顯得十分迫切。miR-122在HCC中的表達(dá)明顯低于正常肝組織，在HCC的生理和病理過程中起著多種作用［15］。最近的研究結(jié)果顯示，miR-122可通過下調(diào)耐藥相關(guān)基因（包括多藥耐藥基因-1、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶和多藥耐藥相關(guān)蛋白）以及通過調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)來改變HCC細(xì)胞的化療敏感性［38］。

2.4 miR-139-5p癌細(xì)胞能夠通過有氧糖酵解優(yōu)先代謝葡萄糖，為他們生存提供優(yōu)勢。研究表明，miR-139-5p過表達(dá)可通過抑制有氧糖酵解從而抑制HCC細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。與癌旁組織相比，HCC中miR-139-5p表達(dá)降低且參與調(diào)節(jié)HCC細(xì)胞中的有氧糖酵解及HCC細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移，這在癌癥基因組圖譜中得到證實［30］。因此，從代謝學(xué)方面尋找HCC治療新靶點具有不可忽視的科學(xué)意義。

3miRNAs與HCC的預(yù)后

3.1 miR-148amiR-148a在各種癌癥（包括胃癌、乳腺癌和泌尿生殖系統(tǒng)癌癥以及神經(jīng)膠質(zhì)瘤）中異常表達(dá)，并已被鑒定為在癌發(fā)生的分子機(jī)制中具有關(guān)鍵作用的致癌或腫瘤抑制劑［31］。miR-148a的功能性作用對于發(fā)現(xiàn)新的腫瘤分子標(biāo)志物和確定潛在的治療靶點至關(guān)重要。其異常表達(dá)與HCC的某些臨床病理特征（包括轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)和預(yù)后）也密切相關(guān)。研究人員發(fā)現(xiàn)，與癌旁組織相比，HCC組織中miR-148a顯著下調(diào)；此外，轉(zhuǎn)移性肝腫瘤微血管miR-148a的表達(dá)水平較非轉(zhuǎn)移性低；且miR-148a的低水平表達(dá)與甲胎蛋白水平高、TNM分期差、OS低以及無復(fù)發(fā)生存率低相關(guān)，也意味著轉(zhuǎn)移性肝腫瘤微血管miR-148a表達(dá)較低的HCC患者預(yù)后較差［32］。mir-148a還與HCC分期、分化程度及浸潤有關(guān)，Pan等［33］發(fā)現(xiàn)mir-148a與HCC TNM分期和莢膜浸潤呈負(fù)相關(guān)；與高分化HCC相比，mir-148a在低分化HCC中的表達(dá)相對較低。因此，miR-148a不僅可能作為HCC的治療靶點，還有望在HCC預(yù)后方面有所貢獻(xiàn)。

3.2 外泌體外泌體是由許多細(xì)胞類型分泌的微泡，其作為生物信息交換的物質(zhì)載體，能夠通過遞送一系列生物分子（包括蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸）調(diào)節(jié)細(xì)胞微環(huán)境。腫瘤細(xì)胞衍生的外泌體參與細(xì)胞間通訊、腫瘤血管生成、腫瘤轉(zhuǎn)移以及藥物和放療抗性［34］。

肝癌細(xì)胞的旁分泌或自分泌外泌體富含小RNA和蛋白質(zhì)，這些RNA和蛋白質(zhì)可通過外泌體轉(zhuǎn)移以促進(jìn)HCC細(xì)胞轉(zhuǎn)移［35］。由于外泌體的自然轉(zhuǎn)運作用，RNAs由外泌體攜帶可到達(dá)并影響遠(yuǎn)處的細(xì)胞從而產(chǎn)生不同的細(xì)胞表型，這可能是肝癌遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移的重要機(jī)制。如HCC細(xì)胞通過神經(jīng)酰胺將選擇性miRNA包裝到外泌體中。這些外泌體可通過調(diào)節(jié)自身表達(dá)以及靶細(xì)胞TGF-β活化激酶1的下游信號傳導(dǎo)途徑，從而調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)化細(xì)胞的生長和凋亡［35］。miRNAs可通過外泌體在細(xì)胞間轉(zhuǎn)移，并且可影響靶細(xì)胞。如外泌體可在Huh7和Hepg2人肝癌細(xì)胞系之間轉(zhuǎn)移miR-122。Huh7細(xì)胞衍生的外泌體將miR-122轉(zhuǎn)移至Hepg2細(xì)胞，可抑制Hepg2細(xì)胞的生長并加速這些細(xì)胞的老化［36］。另外，外泌體miR-718可調(diào)節(jié)靶基因同源框B8以抑制HCC細(xì)胞的分化。在肝移植后患者中，血清外泌體miR-718水平較低者腫瘤復(fù)發(fā)率較高［37］。因此，外泌體可在細(xì)胞之間轉(zhuǎn)移miRNAs，這些miRNAs調(diào)節(jié)靶細(xì)胞中基因的表達(dá)且在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移中起重要作用。另外，某些RNA可通過外泌體轉(zhuǎn)移到其他細(xì)胞和組織中，并為腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移建立適當(dāng)?shù)奈h(huán)境。

外泌體是一類新型細(xì)胞間信號介質(zhì)，其在HCC的發(fā)生發(fā)展中具有重要的作用，因此，其在檢測和治療該疾病中具有潛在的臨床應(yīng)用價值，然而，外泌體在HCC侵襲和轉(zhuǎn)移中的具體機(jī)制尚不完全清楚，這一局限性阻礙了其在診斷和治療HCC方面的發(fā)展。將來的研究應(yīng)該集中在確定其作用機(jī)制并確定HCC的潛在診斷和治療方法。HCC中發(fā)生多種組織病理學(xué)改變，包括血管生成和血管滲透性增加，這與腫瘤發(fā)生、發(fā)展、侵襲和化學(xué)抗性相關(guān)。由于已知HCC衍生的外泌體在腫瘤微環(huán)境中起重要作用，因此對HCC衍生的外泌體在血管生成、血管功能和結(jié)構(gòu)中作用的更多了解將有助于我們對抗血管生成治療的理解，并可能提高化療和放射治療的療效。

4 結(jié)語與展望

由于miRNAs表達(dá)的微小變化可能影響數(shù)百種靶基因的表達(dá)，也可能使轉(zhuǎn)錄組發(fā)生顯著變化，所以，miRNAs調(diào)控網(wǎng)絡(luò)參與一些疾病的發(fā)生發(fā)展。目前，人類基因組中已經(jīng)鑒定出約500個miRNAs基因，在抗逆性、代謝、防御致病性感染、細(xì)胞增殖和細(xì)胞死亡的協(xié)調(diào)、腫瘤發(fā)生中起重要作用。有確鑿證據(jù)表明，miRNAs在調(diào)控肝細(xì)胞生長、應(yīng)激反應(yīng)、代謝、病毒感染和增殖、基因表達(dá)和維持肝表型方面有重要意義［38］。肝纖維化是HCC發(fā)生發(fā)展的一個重要因素，有人報道了miRNA-21能夠促進(jìn)肝纖維發(fā)生，所以降低miRNA-21表達(dá)可能成為有助于抑制肝纖維化發(fā)展，進(jìn)而預(yù)防HCC發(fā)生［39］。所以，miRNAs不僅在HCC的診斷、治療及預(yù)后中發(fā)揮一定作用，其在HCC的預(yù)防方面也有重要作用。HCC中miRNAs的表達(dá)水平或功能失調(diào)已是眾人皆知，因此，越來越多的研究著力于驗證miRNAs在癌癥發(fā)生、進(jìn)展和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用，并探討這些明星分子是否能夠成為癌癥預(yù)后的強(qiáng)大生物標(biāo)志物或治療靶點，為HCC的診斷及治療提供幫助。

盡管miRNAs作為HCC的生物標(biāo)志物具有很大的潛力，在許多研究中，評估了多種miRNAs聯(lián)合預(yù)測HCC的效果，但是由于miRNAs來源各異，研究人員所采用測定方法不一，這些因素增加了研究小組對HCC生物標(biāo)記研究的困難性。此外，使用miR?NAs芯片對候選miRNAs進(jìn)行初篩選的研究方法存在一定的局限性，這種方法通常只包含一組有限的探針，這些探針可能不包括最近鑒定的miRNAs，也不能夠防止與未表征的miRNAs交叉雜交。所以，開發(fā)miRNAs芯片技術(shù)，無論miRNAs芯片單獨使用還是與其他生物標(biāo)志物結(jié)合使用，最終均有助于判斷樣品的肝功能及HCC的發(fā)展進(jìn)程，并有助于選擇治療方法，甚至能夠幫助建立HCC預(yù)后的生物標(biāo)志物庫。此外，監(jiān)測miRNAs圖譜中的變化可在肝功能變化前發(fā)現(xiàn)HCC，從而可進(jìn)行更早更有效的治療并且改善患者存活率。特別是在慢性乙型肝炎患者人群中，急需這種改善。

HCC死亡率在惡性腫瘤中居第二位，且治愈性差、復(fù)發(fā)率高、耐藥頻發(fā)且預(yù)后不良［40］。目前，仍無創(chuàng)新且有效的治療方法來滿足臨床需求。肝移植有利于不適合手術(shù)切除的患者，圖像引導(dǎo)消融是最常用的治療方法，但由于腫瘤大小各異，所以，此療法受到一定的局限性。索拉非尼能夠增加HCC患者生存率，也是唯一批準(zhǔn)的用于治療晚期HCC的一線藥物，是晚期肝細(xì)胞癌的標(biāo)準(zhǔn)治療方法，但由于其劑量相關(guān)的眾多不良反應(yīng)限制其高劑量使用，使患者產(chǎn)生耐藥性；若與其他抗腫瘤藥物聯(lián)合使用，需考慮多藥聯(lián)合不良反應(yīng)；所以，需要探索新型非常規(guī)藥物（如基于miRNAs的寡核苷酸制劑）單獨或與其聯(lián)合治療HCC。雖然靶向遞送和治療性miR?NAs的表達(dá)研究將可能是一個重大挑戰(zhàn)，但是，更深入地理解miRNAs和其他非編碼RNA的作用可能有助于HCC及其他癌癥的耐受性治療。RNA技術(shù)具有高效阻斷體內(nèi)特定基因表達(dá)的作用，該技術(shù)已廣泛用于基因功能及基因治療等方面的研究。郭固楠等［41］利用siRNA技術(shù)，發(fā)現(xiàn)了肝癌可能的治療靶點。目前，人們正在探索用于抑制miRNAs功能的反義寡核苷酸方法和siRNA樣技術(shù)以作為潛在的治療劑。盡管RNAi技術(shù)的一些安全性問題仍有待解決，但這一療法在未來可能成為肝疾病的一種有效治療方法，并且可能為腫瘤治療提供新策略，分子靶向藥物單獨使用或者與現(xiàn)有藥物聯(lián)合使用治療HCC也是令人期待的。