周素貞，李國惠，吳阿平，胡金柱

（南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院，江西 南昌 330006）

0 引言

冠心病并發(fā)室性心動過速（ventricular tachycardia, VT）導(dǎo)致的心源性猝死約占20-25%[1]，與心肌細(xì)胞離子通道基因突變有關(guān)。Hu等對心肌梗死并發(fā)VT患者的研究中發(fā)現(xiàn)，SCN5A-G400A突變攜帶者同期內(nèi)發(fā)生VT的幾率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于非攜帶者[2]。本研究對冠心病并發(fā)VT進(jìn)行KCNQ1基因篩查以探討冠心病并發(fā)VT與KCNQ1基因是否具有相關(guān)性。

1 對象與方法

該研究經(jīng)南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院審查委員會及倫理委員會審查通過，并已獲得患者的知情同意。

1.1 對象

23例冠心病并發(fā)VT的患者作為研究組。對照組100例，我院健康體檢者無明顯心血管疾病。

1.2 方法

（1）患者外周靜脈血標(biāo)本5mL，經(jīng)EDTA抗凝，提取基因組DNA，最終濃度50ng/ul作為聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)反應(yīng)的模板。

（2）KCNQ1作為候選基因，根據(jù)GenBank的參考序列，采用Primer Premier 5.0軟件進(jìn)行引物設(shè)計(jì)。

（3）PCR擴(kuò) 增 基 因 組 DNA， 使 用 BigDye Terminator Cycle Sequencing雙脫氧鏈終止法測序，結(jié)果與NCBI GenBank的BLAST基因同源性分析，若有基因變異位點(diǎn)，與100例健康體檢者的DNA對照。

2 結(jié)果

KCNQ1基因第10號外顯子的第1343位點(diǎn)上C堿基突變?yōu)镚堿基，導(dǎo)致編碼的第448位氨基酸由脯氨酸突變?yōu)榫彼幔碖CNQ1-P448R，100例健康體檢對照組中未發(fā)現(xiàn)該基因位點(diǎn)改變，提示可能是突變（圖1,2）。

圖1 KCNQ1基因突變

圖2 正常對照組

3 討論

鉀離子通道廣泛分布于心臟、血管、腎臟、胃腸道、骨骼肌以及內(nèi)分泌腺體等細(xì)胞，是迄今為止發(fā)現(xiàn)的分布最廣泛、亞型最多、作用最復(fù)雜的一類離子通道[3,4]。1987年P(guān)apazian和Tempel等利用遺傳學(xué)和分子克隆方法，首次從果蠅中克隆出鉀通道的突變基因，從而開創(chuàng)了鉀通道基因研究的里程碑，掀起了鉀通道分子水平研究的熱潮。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展及膜片鉗技術(shù)的廣泛應(yīng)用于電生理學(xué)的研究，越來越多的研究表明鉀通道基因突變引起遺傳性心律失常[5,6]?；蛲蛔冊诠谛牟〔l(fā)室速發(fā)生機(jī)制中的作用越來越受人們的關(guān)注[7-11]。

本實(shí)驗(yàn)收集臨床診斷為冠心病并發(fā)室速患者的血標(biāo)本，采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)及基因直接測序法，以鉀通道基因作為候選基因，試圖對冠心病并發(fā)室速的遺傳學(xué)發(fā)生機(jī)制提供新的認(rèn)識。測序結(jié)果通過NCBI GenBank上的BLAST程序進(jìn)行基因同源性的比較分析，結(jié)果在病例組發(fā)現(xiàn)了1例鉀通道基因突變KCNQ1-P448R，需后續(xù)進(jìn)一步的通道功能分析定。

本研究進(jìn)一步說明了冠心病并發(fā)室速與鉀離子通道基因存在相關(guān)性，揭示了鉀離子通道基因在一定程度上決定冠心病并發(fā)室速的發(fā)生。由于突變基因功能分析仍在進(jìn)行中，限制了我們對鉀通道基因?qū)е聬盒孕穆墒С０l(fā)生的電生理機(jī)制的分析。隨著功能分析的深入，我們相信一定能更好地說明冠心病并發(fā)室速與鉀通道基因突變之間的關(guān)系。