阿娜古麗·馬合木提，熱比姑麗·伊斯拉木，曼爾丹·尼牙孜

（新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)藥研究所·新疆維吾爾醫(yī)方劑學(xué)實(shí)驗(yàn)室，新疆 烏魯木齊 830049）

高孜班亦稱牛舌草，別名為高孜班印地、叁尕吾里，為紫草科植物意大利牛舌草 Anchusaitalica Retz.或同科植物琉璃苣 Borage of ficinales L.的地上部分。維吾爾醫(yī)學(xué)認(rèn)為，高孜班屬性濕熱，功能生濕生熱，調(diào)節(jié)異常黑膽質(zhì)，潤(rùn)濕補(bǔ)腦，祛寒補(bǔ)心，爽心悅志，潤(rùn)燥消炎，止咳平喘等，主治干寒性或黑膽質(zhì)性疾病，如干性腦虛，寒性心虛、心悸、憂郁癥，干性胸膜炎、肺炎及結(jié)核疾病等，寒性咳嗽、感冒、氣短等[1－2]。目前，高孜班作為新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)醫(yī)院院內(nèi)制劑主要藥物，在抗抑郁、抗老年癡呆領(lǐng)域也有一定進(jìn)展。本課題組前期已開(kāi)展了維藥高孜班化學(xué)成分相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究[3－5]。本研究中通過(guò)D－半乳糖致衰老小鼠模型實(shí)驗(yàn)，探討了維藥高孜班提取物的抗衰老作用及其可能的途徑，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、試藥與儀器

動(dòng)物：SPF級(jí)昆明種小鼠，60只，雌雄各半，體質(zhì)量（20±2）g，由新疆實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)許可證號(hào)為SCXK（新）2016－0001。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)藥研究所藥物安全性評(píng)價(jià)中心（藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范中心，SYXK＜新＞2016－0005）審核，符合動(dòng)物倫理委員會(huì)的管理準(zhǔn)則。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前檢疫，經(jīng)一般行為觀察，選用符合要求的54只小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

試藥與儀器：高孜班（Gao Zi Ban，GZB，新疆麥迪森維藥有限公司，產(chǎn)地巴基斯坦，批號(hào)為201602）；D－半乳糖（D－galactose，上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司，批號(hào)為161210）；0.9%氯化鈉注射液（新疆華世丹藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)為 18030508）；維生素 E（vitamin E，VE，上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)為CAS＃59－02－9，YY11518－100 g分進(jìn)）。小鼠白細(xì)胞介素 2（IL－2）試劑盒（批號(hào)為 20171120）、小鼠白細(xì)胞介素 6（IL － 6）試劑盒（批號(hào)為 20171202）、小鼠腫瘤壞死因子 －α（TNF －α）試劑盒（批號(hào)為20171111），均購(gòu)于武漢博士德生物技術(shù)有限公司。Model550型酶標(biāo)儀（美國(guó) Bio－Rad公司）；Thermo fisher低溫冰箱（－86℃，賽默飛世爾高科技＜中國(guó)＞有限公司）；TGL－5－A型低速大容量離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）。

1.2 方法

高孜班提取物的制備[3－4]：取高孜班 20 kg，粗粉碎，加石油醚冷浸，脫脂，藥渣粉末曬干，分別取粉碎脫脂后的高孜班每份10 kg，加15倍量70%乙醇，回流提取 2 h，共提取3次，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至1 500 mL，備用。

D－半乳糖致小鼠衰老模型建立[6－7]：將54只KM小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組（10只）和衰老模型組（44只），雌雄各半。正常對(duì)照組小鼠腹腔注射生理鹽水；衰老模型組小鼠腹腔注射 D－半乳糖（200 mg／kg），1次／天，連用46 d。

對(duì) D－半乳糖致小鼠衰老模型的影響：造模成功后，將符合要求的40只小鼠隨機(jī)分為衰老模型組（模型組）、陽(yáng)性對(duì)照藥維生素 E 組（VE 組，10 mg／kg）、GZB提取物高劑量組（GZB －H 組，3.65 mg／kg）、GZB 提取物低劑量組（GZB －L 組，1.8 mg／kg），各 10 只。各組灌胃給予相應(yīng)藥物，正常對(duì)照組灌胃等體積生理鹽水。各組灌胃容積均為每10 g體質(zhì)量0.2 mL，1次／日，連續(xù)3周。小鼠每周測(cè)1次體質(zhì)量，根據(jù)體質(zhì)量變化隨時(shí)調(diào)整給藥劑量。各組小鼠于末次給藥1 h后，摘眼球法取血。4℃下3 000 r／min離心10 min，取上清液于－86℃保存待測(cè)。然后快速常規(guī)取出腦組織，用生理鹽水沖洗，濾紙吸干；隨后取適量腦組織，稱定質(zhì)量，制勻漿，在4℃下3 000 r／min離心10 min，取上清液，待測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法分別檢測(cè)血清和腦組織IL－2，IL－6，TNF－α水平，操作步驟均按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行[8－9]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件 One－Way ANOWA方法進(jìn)行多組樣品均數(shù)比較，所得數(shù)據(jù)用±s表示，檢驗(yàn)水準(zhǔn) α＝0.05。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)血清中IL－2，IL－6，TNF－ 水平的影響

與正常對(duì)照組比較，衰老模型組小鼠血清IL－2水平降低，IL－6和 TNF－α 水平升高（P＜0.01）。與衰老模型組比較，VE組、GZB－H組小鼠血清IL－2水平升高，IL－6和 TNF－α水平降低（P＜0.01）；GZB－L組小鼠血清 IL－2水平升高（P＜0.05），血清 IL－6和TNF－α 水平降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見(jiàn)表1。

表1 各組小鼠血清中 IL－2，IL－6，TNF－ 水平比較（X ± s，pg／mL，n＝10）

2.2 對(duì)腦組織中IL－2，IL－6，TNF－ 水平的影響

與正常對(duì)照組比較，衰老模型組小鼠腦組織IL－2水平降低，IL－6和 TNF－α水平升高（P＜0.01）；與衰老模型組比較，VE組和GZB－H組小鼠腦組織IL－2水平升高，IL－6和 TNF－α 水平降低（P＜0.05）；GZB－L組小鼠腦組織IL－2水平升高，IL－6水平降低（P ＜0.05），雖小鼠腦組織 TNF－α 水平降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。詳見(jiàn)表 2。

表2 各組小鼠腦組織中 IL－2，IL－6，TNF－ 水平比較（X ± s，pg／mL，n＝10）

3 討論

衰老是生物體在生命周期中隨著年齡的增長(zhǎng)而發(fā)生的全身各組織、器官功能減退和穩(wěn)態(tài)功能下降的過(guò)程，是諸多病理、生理過(guò)程綜合作用的結(jié)果，是一個(gè)不可抗拒的過(guò)程[10－11]。延緩衰老藥物是一類(lèi)從機(jī)體物質(zhì)和能量代謝出發(fā)，在組織器官、細(xì)胞及分子水平上延緩各種退行性變化，提高生物活力、延長(zhǎng)壽命的藥物。由于生物體復(fù)雜，因此延緩衰老藥物研究的途徑和方法也有多種[12－13]。其中，D－半乳糖致衰老動(dòng)物模型以衰老的代謝學(xué)說(shuō)為指導(dǎo)建立的，是目前最常用的制備衰老模型的方法[14]。

本研究結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組比較，衰老模型組小鼠血清、腦組織IL－2水平降低，IL－6和TNF－α水平升高（P＜0.01）。提示 D－半乳糖致衰老動(dòng)物模型成立。衰老的特征之一是免疫功能降低，主要表現(xiàn)為免疫細(xì)胞數(shù)量減少和功能減弱[5－7]。與衰老模型組比較，VE組和GZB－H組小鼠血清和腦組織中IL－2水平均升高，IL－6和 TNF－α 水平均降低（P＜0.05）；GZB－L組小鼠血清 IL－2水平升高（P＜0.05），雖小鼠血清IL－6和TNF－α水平均降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）；GZB－L組小鼠腦組織 IL－2水平升高，IL－6水平降低，TNF－α水平降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。提示VE具有抗衰老作用，增強(qiáng)小鼠免疫功能，可延緩衰老；GZB提取物通過(guò)增強(qiáng)小鼠免疫功能，延緩衰老，且具有一定的劑量依賴性。

綜上所述，維藥高孜班提取物可通過(guò)調(diào)節(jié) D－半乳糖致衰老小鼠模型免疫狀態(tài)，從而起到抗衰老作用，但有待深入研究。