黎銀波 ，李劍峰，姚金成，張貴賦

（1.湖南省藥品審評(píng)認(rèn)證與不良反應(yīng)監(jiān)測(cè)中心，湖南 長(zhǎng)沙 410013； 2.湖南賽隆藥業(yè)股份有限公司，湖南 岳陽(yáng) 414200）

阿加 曲班 （argatroban anhydrous）化學(xué)名為 （2 R，4 R）－4－甲基 －1－[N2－（（R，S）－3－甲基 －1，2，3，4－四氫－8－喹啉磺?；璍－精氨酰基]－2－哌啶羧酸一水合物，是日本三菱化學(xué)研究所研制的抗血栓藥，1990年2月在日本首次上市[1－2]，2002年在中國(guó)上市，是一種新型凝血酶抑制劑[3]，用于缺血性腦梗死急性期的抗凝治療[4－5]。阿加曲班的起始原料合成過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生多個(gè)異構(gòu)體雜質(zhì)，為有效進(jìn)行質(zhì)量控制，對(duì)其異構(gòu)體雜質(zhì)的控制必不可少。這些異構(gòu)體雜質(zhì)主要來(lái)源于2個(gè)起始原料，分別為3－甲基－8－喹啉磺酰氯（化合物Ⅱ）和（2 R，4 R）－4－甲基 －2－哌啶羧酸乙酯，后者的異構(gòu)體雜質(zhì)已有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。本研究中對(duì)化合物Ⅱ生產(chǎn)過(guò)程中可能產(chǎn)生的雜質(zhì)進(jìn)行了理論分析，推測(cè)出2個(gè)異構(gòu)體雜質(zhì)，并根據(jù)其結(jié)構(gòu)，重新設(shè)計(jì)了合成路線，并制備了這2個(gè)異構(gòu)體雜質(zhì)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

DF－101S型集熱式恒溫加熱磁力攪拌器（鄭州英峪予華儀器有限公司）；LOOYE ZX－98－1型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海魯伊工貿(mào)有限公司）；SHB－Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）；DZF6050型真空干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；安捷倫1260型高效液相色譜儀，安捷倫1200－6120型液質(zhì)聯(lián)用色譜儀，檢測(cè)精度 RSD≤2.0%，均購(gòu)自美國(guó)安捷倫科技有限公司；Bruker AvanceⅢ400NMR核磁共振儀（布魯克科技有限公司）。

1.2 試藥

5－溴－3－甲基喹啉（批號(hào)為 20160321，純度為98.5% ），二苯甲酮亞胺（批號(hào)為 20160510，純度為97.0% ），1，1′－聯(lián) 萘 －2，2′－雙 二 苯 膦 （批 號(hào) 為20160415，純度為98.0%），均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；5－溴－2－硝基苯甲醛（批號(hào)為 20160310，純度為98.0%，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；Pd（AcO）2（批號(hào)為 20170516，純度為 99% ，陜西瑞科新材料股份有限公司）；其余試劑均為市售分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 試驗(yàn)方法

2.1.1 雜質(zhì)來(lái)源及合成路線

3－甲基－8－喹啉磺酰氯（Ⅱ）的合成路線以3－甲基喹啉（Ⅲ）為起始原料，通過(guò)磺化、氯化得化合物Ⅱ[6]。一般喹啉的磺化反應(yīng)主要生成8－喹啉磺酸，在高溫下反應(yīng)會(huì)生成其他異構(gòu)體雜質(zhì)，如5－喹啉磺酸和6－喹啉磺酸[7]。在化合物Ⅱ的合成過(guò)程中，也會(huì)產(chǎn)生異構(gòu)體雜質(zhì)3－甲基－5－喹啉磺酰氯（A）及3－甲基－6－喹啉磺酰氯（B）?；衔铫虻暮铣陕肪€及雜質(zhì)A和雜質(zhì)B產(chǎn)生途徑見圖1。

圖1 化合物Ⅱ的合成路線及雜質(zhì)A和雜質(zhì)B產(chǎn)生途徑

為有效控制阿加曲班的質(zhì)量，對(duì)雜質(zhì)A和雜質(zhì)B進(jìn)行了合成與結(jié)構(gòu)確證。雜質(zhì)A以5－溴－3－甲基喹啉（Ⅳ）為起始原料，依次進(jìn)行 Buchwald反應(yīng)[8－9]、脫保護(hù)基反應(yīng)[10]、重氮化及 Sandermeyer反應(yīng)[11－12]而合成，詳見圖2。雜質(zhì)B以5－溴－2－硝基苯甲醛（Ⅶ）為起始原料，依次進(jìn)行鐵粉還原反應(yīng)[13－14]、關(guān)環(huán)反應(yīng)[15－16]、Buchwald反應(yīng)、脫保護(hù)基反應(yīng)、重氮化及Sandermeyer反應(yīng)而合成，詳見圖3。

圖2 雜質(zhì)A的合成路線

圖3 雜質(zhì)B的合成路線

2.1.2 3－甲基 －5－喹啉磺酰氯（A）的合成

5－（N－二苯亞甲基氨基）－3－甲基喹啉（Ⅴ）的合成：將 5 －溴 －3－甲基喹啉（30 g，0.135 mol）和二苯甲酮亞胺（49 g，0.27 mol）溶于 1 L 1，4 － 二氧六環(huán)中，加入Pd（AcO）2（1.5 g，0.007 mol），BINAP（8.4 g，0.014 mol），碳酸銫（66 g，0.203 mol），氮?dú)獗Ｗo(hù)下，80 ℃ 下攪拌反應(yīng)16 h。冷卻至室溫，向體系中加入1 L乙酸乙酯，依次用水1 L和飽和食鹽水（1 L×2）洗滌，乙酸乙酯相減壓濃縮得粗品，粗品過(guò)硅膠柱分離，展開劑為石油醚－乙酸乙酯（20 ∶1），得棕黃色固體（Ⅴ）32.6 g，收率為 74.8% 。

3－甲基－5－氨基喹啉（Ⅵ）的合成：將化合物Ⅴ（31 g，0.096 mol）溶于 1 L 二氯甲烷中，加入 50 mL 三氟乙酸，室溫下攪拌反應(yīng)24 h，減壓濃縮三氟乙酸，加入500 mL水，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)體系pH為堿性，用乙酸乙酯（500 mL × 3）萃取，減壓濃縮得黃色油狀物 12.9 g，收率為84.9%。

3－甲基－5－喹啉磺酰氯（A）的合成：將化合物Ⅵ（12 g，0.076 mol）加入 50 mL 濃鹽酸和 10 mL 冰醋酸的溶液中，反應(yīng)體系冷卻至－10℃，加入亞硝酸鈉（5.8 g，0.084 mol）水溶液，攪拌反應(yīng) 1 h，得化合物Ⅵ的重氮鹽溶液。向另一三口瓶中加入90 mL冰醋酸，通入二氧化硫氣體直至飽和，加入氯化銅（3.8 g，0.038 mol），攪拌直至溶液顏色變綠?？刂茰囟鹊陀?℃，將化合物Ⅵ的重氮鹽溶液滴入氯化銅醋酸溶液中，滴加完畢，室溫下攪拌反應(yīng)過(guò)夜。反應(yīng)完畢后，將反應(yīng)液加入冰水中淬滅，乙酸乙酯萃?。?00 mL×3），用乙酸乙酯相依次用飽和碳酸氫鈉（300 mL ×2）和水（300 mL ×2）洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，減壓濃縮得類白色固體14.3 g，純度為 95.8% ，收率為 78.1% 。 MS m ／z：242.1[M ＋ H]＋。1H － NMR（400 MHz，CDCl3）δ8.88（1H，s），8.80（1H，s），8.39（1H，d， J ＝ 8.4 Hz），8.33（1H，d， J ＝ 7.6 Hz），7.72（1H，t， J ＝ 8.0 Hz），2.59（3H，s）。

2.1.3 3－甲基 －6－喹啉磺酰氯（B）的合成

5－溴－2－氨基苯甲醛（Ⅷ）的合成：將 5－溴－2 －硝基苯甲醛（30 g，0.130 mol）加入 400 mL 乙醇和100 mL 水的溶液中，再加入氯化銨（8.4 g，0.160 mol）和鐵粉（36.4 g，0.652 mol），升溫至 80 ℃ 攪拌反應(yīng) 2 h。反應(yīng)完后，冷卻至室溫，過(guò)濾，濾液用乙酸乙酯萃?。?00mL ×2），乙酸乙酯相用飽和食鹽水洗滌（500mL ×2），無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓濃縮得粗品，粗品過(guò)硅膠柱分離，展開劑為石油醚－乙酸乙酯（10∶1），得黃色固體22.5 g，收率為86.5%。

6－溴－3－甲基喹啉（Ⅸ）的合成：氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將化合物Ⅷ（21 g，0.105 mol）加入乙醇 500 mL 中，再加入丙醛（6.7 g，0.115 mol）和哌啶（1.8 g，0.021 mol），回流攪拌反應(yīng) 9 h，反應(yīng)過(guò)程中分批補(bǔ)加丙醛（20.1 g，0.345 mol）和哌啶（9.0 g，0.105 mol）。反應(yīng)完后，減壓濃縮得粗品，粗品過(guò)硅膠柱分離，展開劑為石油醚 －乙酸乙酯（6 ∶1），得黃色油狀物 16.5 g，收率為 70.8% 。

6－（N－二苯亞甲基氨基）－3－甲基喹啉（Ⅹ）的合成：化合物Ⅹ的合成工藝與化合物Ⅴ一致，結(jié)果得棕黃色固體 15.5 g，收率為 66.8% 。

3－甲基－6－氨基喹啉（Ⅺ）的合成：化合物Ⅺ的合成工藝與化合物Ⅵ一致，結(jié)果得黃色油狀物6.4 g，收率為 86.9% 。

3－甲基－6－喹啉磺酰氯（B）的合成：雜質(zhì)B的合成工藝與雜質(zhì) A一致，結(jié)果得類白色固體7.6 g，純度為 98.7% ，收率為 82.9% 。MS m ／z：242.1[M ＋ H]＋。1H － NMR（400 MHz，CDCl3）δ8.91（1H，d， J ＝ 1.6 Hz），8.46（1H，d， J ＝ 2.4 Hz），8.23（1H，d， J ＝ 8.8 Hz），8.10（1H，dd，J ＝ 8.8，2.0 Hz），8.04（1H，s），2.54（3H，s）。

2.2 結(jié)果

合成制備了2個(gè)異構(gòu)體雜質(zhì)，所得雜質(zhì)純度均大于95%，理化性質(zhì)穩(wěn)定，波譜特征與目標(biāo)化合物相符。

3 討論

芳香磺酰氯的制備方法主要有3種：采用磺化反應(yīng)對(duì)芳環(huán)體系直接引入磺酸基團(tuán)，再進(jìn)行氯化；由芳香硫醇及相關(guān)衍生物合成[17]；將芳胺類化合物重氮化，再進(jìn)行Sandermeyer反應(yīng)，將芳香化重氮鹽轉(zhuǎn)化而成。在異構(gòu)體雜質(zhì)合成路線設(shè)計(jì)過(guò)程中，方法一由于采用3－甲基喹啉進(jìn)行磺化反應(yīng)產(chǎn)生的主要化合物為3－甲基－8－喹啉磺酸，故不可取；方法二由于未見3－甲基－5－巰基喹啉和3－甲基－6－巰基喹啉的合成方法的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，無(wú)法獲取起始原料，故未采用；方法三由于采用 Buchwald反應(yīng)，可簡(jiǎn)便、有效地制備 3－甲基－5－氨基喹啉和3－甲基－6－氨基喹啉，故最終選定該合成方法。通過(guò)試驗(yàn)驗(yàn)證，該路線設(shè)計(jì)合理，所得異構(gòu)體雜質(zhì)純度高，為異構(gòu)體雜質(zhì)對(duì)照品提供了有效的合成方法。

本研究對(duì)阿加曲班起始原料3－甲基－8－喹啉磺酰氯的合成路線進(jìn)行了分析，推測(cè)了可能產(chǎn)生的異構(gòu)體雜質(zhì)，對(duì)異構(gòu)體雜質(zhì)（3－甲基－5－喹啉磺酰氯和3－甲基－6－喹啉磺酰氯）進(jìn)行了合成研究，完成了異構(gòu)體雜質(zhì)的合成。由于未見3－甲基－8－喹啉磺酰氯的異構(gòu)體雜質(zhì)未見相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，本研究為阿加曲班的研制與生產(chǎn)單位及質(zhì)量監(jiān)督部門提供了合成雜質(zhì)對(duì)照品的技術(shù)方法，可為系統(tǒng)建立阿加曲班起始原料的有關(guān)物質(zhì)分析方法提供參考。