李濤 屈平平 孫霞 王志遠(yuǎn)

（山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院 261061）

1 試驗(yàn)材料

1.1 檢測(cè)樣品來(lái)源

110 份病料樣品均來(lái)自30 個(gè)豬場(chǎng)不同批次的發(fā)病哺乳仔豬。

1.2 試劑與儀器

普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂、伊紅美藍(lán)瓊脂、麥康凱瓊脂、LB 肉湯培養(yǎng)基，北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)；革蘭氏染色液，杭州濱和微生物試劑有限公司生產(chǎn)；微量生化發(fā)酵管及配套試劑，青島海博生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)；SK-1 快速渦勻器，中外合資深圳天南海北有限公司生產(chǎn)；PCR 儀、電泳儀、Gel Doc XR 凝膠成像系統(tǒng)，BIO-RAD 公司生產(chǎn)；BS-210S 型電子分析天平，北京賽多利斯天平有限公司生產(chǎn)；BHC-1300ⅡA/B3 型生物潔凈安全柜，蘇州潔凈設(shè)備有限公司生產(chǎn)；PYX-DHS-X 型隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱，上海市躍進(jìn)醫(yī)療器械廠(chǎng)生產(chǎn)；可調(diào)微量移液器，德國(guó)Eppendorf 公司生產(chǎn)；高壓蒸汽滅菌器，日本Panasonic 公司生產(chǎn)。

2 試驗(yàn)方法

2.1 病料中細(xì)菌的分離培養(yǎng)鑒定

2.1.1 細(xì)菌分離培養(yǎng)

取采集的病料樣品，在鮮血瓊脂、伊紅美藍(lán)或麥康凱平板上進(jìn)行分區(qū)劃線(xiàn)，倒置于37℃恒溫箱培養(yǎng)18～24h 后，挑取疑似單個(gè)菌落，于普通瓊脂平板上分區(qū)劃線(xiàn)進(jìn)行純培養(yǎng)，倒置放于37℃恒溫箱，培養(yǎng)18～24h 后，將平板放置于4℃中保存，待用[1-2]。

2.1.2 革蘭氏染色鏡檢

取潔凈的玻片在火焰上反復(fù)通過(guò)幾次，用接種環(huán)挑取1～2環(huán)生理鹽水，用接種環(huán)挑取純培養(yǎng)的菌落邊緣少許細(xì)菌，與玻片上的生理鹽水混勻，涂抹均勻，自然干燥，火焰固定。按常規(guī)步驟進(jìn)行染色，油鏡觀(guān)察待檢菌的形態(tài)、大小、顏色、排列方式[3-4]。

2.1.3 生化鑒定

對(duì)分離的細(xì)菌進(jìn)行生化實(shí)驗(yàn)，用青島海博革蘭氏陰性細(xì)菌鑒定系統(tǒng)進(jìn)行21 項(xiàng)生化實(shí)驗(yàn)，并把生化反應(yīng)的結(jié)果轉(zhuǎn)換為一個(gè)8 進(jìn)制數(shù)，通過(guò)提供的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫(kù)查詢(xún)系統(tǒng)可得到實(shí)驗(yàn)菌株歸屬的相對(duì)概率、T 值和R 值，對(duì)菌株的歸屬進(jìn)行鑒定[5-6]。

將細(xì)菌各項(xiàng)生化反應(yīng)結(jié)果填入附贈(zèng)的記錄卡中，依次每3項(xiàng)為一組，若這3 項(xiàng)反應(yīng)均為陽(yáng)性，則分別記為1、2、4，若為陰性，則相應(yīng)項(xiàng)記為0。將每組3 項(xiàng)的數(shù)值相加，共7 組，組成一個(gè)7 位數(shù)。將所得7 位數(shù)輸入數(shù)據(jù)庫(kù)系統(tǒng)中即可進(jìn)行查詢(xún)。使用前，所有試劑（21±3） ℃放置直至達(dá)到此溫度。打開(kāi)包裝，取出微孔板。

2.2 病料中病毒的PCR 檢測(cè)

取病死豬的脾、肺、淋巴結(jié)、扁桃體、腸及內(nèi)容物等用生理鹽水按照1∶5 比例勻漿，反復(fù)凍融3 次以便于病原釋放，提取核酸及PCR 檢測(cè)[7]。

2.3 寄生蟲(chóng)的檢測(cè)

將發(fā)病的哺乳仔豬剖檢，取其腸道及內(nèi)容物，置于干凈的載玻片上，滴加適量生理鹽水，蓋上蓋玻片，分別用顯微鏡的低倍鏡、高倍鏡和油鏡觀(guān)察是否有寄生蟲(chóng)的存在[8]。

3 試驗(yàn)結(jié)果

3.1 病料中細(xì)菌的檢測(cè)結(jié)果

細(xì)菌引起的哺乳仔豬腹瀉檢出率為11.82%，其中主要是大腸桿菌感染引起的仔豬黃白痢，魏氏梭菌感染引起的仔豬紅痢也有發(fā)生，見(jiàn)圖1～2，表1。豬黃痢是新生仔豬的一種急性致死性較高的傳染病，常發(fā)生于出生后7d 之內(nèi)，又名早發(fā)性大腸桿菌病。仔豬白痢，常發(fā)生于10～30 日齡，又稱(chēng)遲發(fā)性大腸桿菌病，病程較短，長(zhǎng)的1 周左右，有的仔豬能自行康復(fù)，病死率低。仔豬紅痢又名仔豬傳染性壞死性腸炎，仔豬腸毒血癥，主要發(fā)生于1 周齡以?xún)?nèi)的新生仔豬，以排出紅色帶血的稀便為特征。本病發(fā)生快，病程短，病死率高。

圖1 大腸桿菌

圖2 魏氏梭菌

表1 病料中細(xì)菌的檢測(cè)結(jié)果

3.2 病料中病毒PCR 檢測(cè)結(jié)果

病毒引起的哺乳仔豬腹瀉檢出率為88.18%，主要有豬瘟病毒、豬偽狂犬病毒、豬流行性腹瀉病毒和豬傳染性胃腸炎病毒，其中豬流行性腹瀉病毒感染率最高，豬傳染性胃腸炎病毒感染率較低，參見(jiàn)圖3，表2。

圖3 部分病料病毒的PCR 擴(kuò)增結(jié)果

表2 病料中病毒PCR 檢測(cè)結(jié)果

3.3 病料中寄生蟲(chóng)的檢測(cè)結(jié)果

寄生蟲(chóng)引起的哺乳仔豬腹瀉檢出率為15.45%，主要有球蟲(chóng)、小袋纖毛蟲(chóng)和滴蟲(chóng)。豬小袋纖毛蟲(chóng)病是由結(jié)腸小袋蟲(chóng)寄生于豬大腸，導(dǎo)致患豬出現(xiàn)腹瀉癥狀的一種人畜共患原蟲(chóng)病，一般呈陰性感染。當(dāng)仔豬感染傳染性胃腸炎、豬瘟、沙門(mén)氏菌病時(shí)，腸黏膜發(fā)生炎癥反應(yīng)，蟲(chóng)體隨即侵襲到黏膜內(nèi)大量繁殖，導(dǎo)致潰瘍性結(jié)腸炎，而發(fā)生腹瀉，參見(jiàn)圖4～5，表3。

圖4 豬等孢球蟲(chóng)

圖5 經(jīng)瑞氏-吉姆薩染色的小袋纖毛蟲(chóng)

表3 病料中寄生蟲(chóng)的檢測(cè)結(jié)果

4 綜合防控措施的制定

4.1 細(xì)菌性腹瀉

進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，選擇最敏感的抗菌素。大腸桿菌性腹瀉，從藥敏試驗(yàn)中篩選氯霉素類(lèi)、氨基糖苷類(lèi)、頭孢類(lèi)等抗生素藥物進(jìn)行治療，梭菌性腸炎選擇青霉素類(lèi)、頭孢類(lèi)抗生素進(jìn)行治療[9]。

4.2 病毒性腹瀉

綜合防控，防止繼發(fā)感染，降低死亡率。哺乳仔豬的病毒性腹瀉沒(méi)有特效藥物可以治療，主要通過(guò)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和疫苗預(yù)防來(lái)防控。對(duì)癥療法、口服微生態(tài)制劑，通過(guò)藥敏試驗(yàn)選用敏感抗菌素等防止繼發(fā)感染，可以降低哺乳仔豬病毒性腹瀉的死亡率。對(duì)豬輪狀病毒病，在盡早喂給足量初乳后，用母乳喂養(yǎng)，使用口服補(bǔ)液鹽可防止脫水，補(bǔ)充養(yǎng)分；對(duì)傳染性胃腸炎和流行性腹瀉，給予口服補(bǔ)液鹽[10]。

4.3 寄生蟲(chóng)性腹瀉

驅(qū)蟲(chóng)是重點(diǎn)，球蟲(chóng)性腸炎可內(nèi)服氨丙啉或磺胺二甲基嘧啶治療[11]。

5 結(jié)論

根據(jù)對(duì)哺乳仔豬腹瀉原因的傳染性因素調(diào)查結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，傳染性因素方面主要集中在豬瘟、流行性腹瀉、偽狂犬、傳染性胃腸炎、仔豬黃白痢等幾種疾病，陽(yáng)性率分別達(dá)到25.45%、33.64%、20.91%、8.18%、10.91%，這幾種疾病仍然是引起哺乳仔豬腹瀉的主要疾病。

但不可忽視的是，一些以前發(fā)生較少的寄生蟲(chóng)病在這次檢測(cè)過(guò)程中有所上升，如小袋纖毛蟲(chóng)的檢出率達(dá)到了8.18%，豬毛滴蟲(chóng)也檢出了2 例，而且這些寄生蟲(chóng)很多情況下是繼發(fā)于病毒性傳染病，加重了仔豬腹瀉的程度，造成更高的死亡率和更大的損失。

上述調(diào)查和檢測(cè)結(jié)果提示，養(yǎng)殖場(chǎng)的技術(shù)人員要關(guān)注疾病發(fā)生和流行的動(dòng)態(tài)，抓好飼養(yǎng)管理，預(yù)防老病新發(fā)與新流行疾病對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)造成的危害。