孫亞奇，郭京超，潘源虎，劉振利* ，王 旭* ，袁宗輝

(1.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，武漢430070;2.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)國家獸藥殘留基準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室(HZAU)、農(nóng)業(yè)部食品獸藥殘留檢測重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，武漢430070)

磺胺類藥物(Sulfonamides，SAs)通常是指一類在其化學(xué)結(jié)構(gòu)中含有對氨基苯磺酰胺結(jié)構(gòu)的人工合成抗菌藥物，用于治療和預(yù)防人類及動物的感染性疾病。磺胺類藥物通過干擾敏感菌的葉酸代謝而抑制細(xì)菌的生長繁殖，由于具有抗菌譜廣、性質(zhì)穩(wěn)定、價格低廉、便于大量生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于臨床多年［1］。在畜牧業(yè)和水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中，磺胺類藥物通常作為飼料添加劑用于促進(jìn)動物的生長［2－3］。盡管磺胺類藥物廣泛應(yīng)用于臨床，但也存在一些毒副作用，例如，它能夠引起過敏反應(yīng)甚至甲狀腺疾?。?－5］，抑制骨髓細(xì)胞、紅細(xì)胞或血小板的生成，造成造血系統(tǒng)損害，對動物的腎臟產(chǎn)生毒害作用等。過度使用此類藥物，不僅會在動物源性食品中產(chǎn)生殘留，而且會對人類的身體健康產(chǎn)生危害［6］。為了確保消費(fèi)者食品安全，中國及歐盟等都提出了食品中允許的磺胺類藥物的最大殘留限量(MRL)不應(yīng)超過 100 μg/kg［7］。近年來，國內(nèi)外有很多關(guān)于磺胺類藥物代謝與殘留的研究，其主要集中于磺胺類藥物代謝動力學(xué)方面，而關(guān)于磺胺類藥物代謝方面的研究鮮有報道。因此，了解并掌握磺胺類藥物在動物體內(nèi)的代謝、消除及殘留分布規(guī)律，不僅對安全用藥，制定合理的休藥期具有重要的意義，而且有助于對磺胺類藥物的監(jiān)管工作。本文綜述了國內(nèi)外有關(guān)動物中使用磺胺類藥物代謝與殘留消除以及檢測方法最新進(jìn)展，以期為磺胺類藥物的合理使用及開發(fā)新的殘留檢測技術(shù)提供理論依據(jù)。

1 磺胺類藥物代謝動力學(xué)研究進(jìn)展

磺胺類藥物在體內(nèi)主要是通過N4－乙?；?，羥基化和N1－葡萄糖醛酸化3種途徑進(jìn)行代謝［8］，這主要取決于藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)以及不同物種中酶的組成的不同(其分子結(jié)構(gòu)及主要代謝途徑如圖1所示)。由N－乙?；D(zhuǎn)移酶(NAT2)催化磺胺類藥物形成乙?；x物，由CYP2C9催化磺胺氧化成羥胺代謝物［9］，由葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶催化形成N1－葡萄糖醛酸結(jié)合物。N4－乙?；x物和葡萄糖醛酸代謝物均無抗菌活性，而羥化的代謝物具有抗菌活性且與甲氧芐啶合用時抗菌活性增強(qiáng)。磺胺類藥物的代謝周期因結(jié)構(gòu)不同而差異較大，短效磺胺類藥物，如磺胺二甲基嘧啶的半衰期小于8 h，中效磺胺類藥物，如磺胺嘧啶的半衰期在10 h以上，長效磺胺類藥物的半衰期大于30 h，如磺胺鄰二甲氧嘧啶的半衰期達(dá)到1周。

圖1 磺胺類藥物的分子結(jié)構(gòu)及代謝途徑Fig 1 Molecular structure and metabolic pathway of sulfonamide antibiotics

1.1 磺胺類藥在各種屬體內(nèi)的代謝研究 磺胺間二甲氧嘧啶(Sulphadimethoxine，SDM)又稱磺胺地索辛，屬于長效類磺胺藥。其主要代謝方式有:N4－乙?；蚇1－葡萄糖醛酸化，另外在有些物種的尿液中發(fā)現(xiàn)有少量的N4－葡萄糖醛酸結(jié)合物和N4－硫酸鹽。在人體內(nèi)，N1－葡萄糖醛酸結(jié)合是主要的代謝方式，占代謝比例的61%，N4－乙?；?1%，還有8%的N4－葡萄糖醛酸結(jié)合產(chǎn)物以及N4－硫酸鹽產(chǎn)物。在豚鼠體內(nèi)，N4－乙?；侵饕拇x方式，占66%，除此之外還有少量的葡萄糖醛酸結(jié)合產(chǎn)物。

磺胺二甲嘧啶(Sulfadimidine，SM2)屬于短效類磺胺藥，抗菌作用稍弱，其乙?；苌锞子谌芙?，毒性較低［10］。SM2主要的代謝方式有:乙?；?、羥化以及葡萄糖醛酸結(jié)合。其中羥化包括嘧啶環(huán)的5位和側(cè)鏈甲基上的羥化，羥化代謝物可再進(jìn)行葡萄糖醛酸化和乙?；?。SM2在人、兔、猴、魚體內(nèi)的的主要代謝方式是乙?；浯问橇u化。豬體內(nèi)只發(fā)生乙?；?，檢不出羥化代謝物。在反芻動物、家禽、龜和蝸牛體內(nèi)的羥化大于乙酰化。狗的血和尿中能檢出羥化物，不能檢出N4SM2［11］。

磺胺甲噁唑(Sulfamethoxazole，SMZ)在人和動物(豬、蝸牛、牛、魚等)體內(nèi)的代謝研究已經(jīng)完成，發(fā)現(xiàn)其代謝方式主要有乙酰化和羥化兩種。據(jù)報道，SMZ 的消除半衰期在人 9.5 h，狗 8 h，馬 5 h，牛2.5 h，水牛 7 h，豬 3 h，綿羊 2 h，貓 10 h。SMZ 在人、貓、豬、反芻動物中的代謝方式主要是乙?；?，但在狗、歸巢鴿、蝸牛和水龜體內(nèi)羥基化占優(yōu)勢。SMZ在豬體內(nèi)主要通過乙酰化進(jìn)行代謝，在豬的血漿和尿液中不能檢測到羥基和葡糖苷酸衍生物［12］。

綜上所述，磺胺類藥物在人和在不同種屬動物體內(nèi)的代謝途徑和代謝產(chǎn)物不同。這可能是因?yàn)椴煌N屬動物體內(nèi)參與磺胺類藥物代謝酶(P450酶)的組成以及它在不同種屬體內(nèi)基因表達(dá)上存在差異［13］。

1.2 磺胺類藥物在不同動物體內(nèi)的代謝動力學(xué)研究 目前對于磺胺類藥物的代謝動力學(xué)研究主要集中于水產(chǎn)動物，因此，本文主要就水產(chǎn)動物的代謝動力學(xué)進(jìn)行綜述。

同一種磺胺類藥物在同種動物體內(nèi)不同組織的代謝情況不同。鄧建朝等［14］研究了SMZ在青石斑魚各組織中代謝動力學(xué)的不同。試驗(yàn)中一次性投喂含有200 mg/kg SMZ的飼料，結(jié)果表明，SMZ在青石斑魚肝臟中的含量最高，其次是背肌、血漿、腎臟，鰓中的含量最低。SMZ在青石斑魚腎臟中的半衰期最長，其次是鰓、背肌、血漿，肝臟中SMZ的半衰期最短。SMZ在青石斑魚腎臟中代謝速度最慢，肝臟中代謝速度最快。

環(huán)境溫度改變會引起磺胺類藥物在水產(chǎn)動物體內(nèi)藥代動力學(xué)參數(shù)的改變。Ginneken等［15］研究了溫度對SM2在鯉魚中的藥代動力學(xué)的影響。在10℃、20℃下以100 mg/kg的劑量單次尾靜脈注射SM2，試驗(yàn)結(jié)果表明，與10℃相比，在20℃時SM2的表觀分布容積(Vd)顯著降低，消除半衰期(t1/2β)顯著縮短，體清除率(CL)顯著升高。林偉［16］也研究了溫度對SMZ在長絲鱸體內(nèi)藥動學(xué)的影響。與25℃相比，在30℃時SMZ在魚體血漿和肌肉中的分布較慢，而消除也慢。這種現(xiàn)象表明環(huán)境溫度對水產(chǎn)動物的藥代動力學(xué)參數(shù)有顯著影響。在一定溫度范圍內(nèi)，溫度越高，與藥物代謝相關(guān)的酶的活性越強(qiáng)，藥物在動物體內(nèi)的代謝也就越快。因此在水產(chǎn)動物給藥時應(yīng)考慮到環(huán)境溫度這個因素，尤其是當(dāng)水溫較低時應(yīng)適當(dāng)延長休藥期。

動物年齡會影響磺胺類藥物在體內(nèi)的代謝。Janus等［17］研究了年齡對犢牛中SM2藥代動力學(xué)的影響。試驗(yàn)選取10日齡犢牛和20日齡犢牛各10只，以44 mg/kg的劑量單次口服給藥。結(jié)果表明，犢牛的年齡對磺胺二甲嘧啶的藥代動力學(xué)參數(shù)有顯著影響。觀察到與10日齡犢牛相比，20日齡犢牛中SM2的Vd顯著增加，平均停留時間(MRT)顯著降低，CL顯著升高。參與磺胺二甲嘧啶代謝的酶的含量和活性隨著犢牛的年齡而增加。

同一種磺胺類藥物隨給藥次數(shù)的不同而代謝不同。王偉利等［18］研究了給藥次數(shù)對吉富羅非魚(Oreochromis niloticus)中磺胺嘧啶(SD)藥代動力學(xué)的影響。試驗(yàn)分為120 mg/kg單次飼喂組和連續(xù)5 d飼喂組，結(jié)果表明，單次給藥下磺胺嘧啶在吉富羅非魚腎臟中的消除半衰期最長，其次是血漿、肝臟、肌肉，在腎臟中的消除最慢。連續(xù)給藥情況下磺胺嘧啶在吉富羅非魚體內(nèi)的濃度顯著高于單次給藥。

給藥方式會影響磺胺類藥物在動物體內(nèi)的代謝。艾曉輝等［19］研究了給藥方式的不同對SMZ在草魚體內(nèi)的藥代動力學(xué)的影響。試驗(yàn)中分別采用口灌和腹腔注射的給藥方式，以100 mg/kg劑量單次給藥，結(jié)果表明，相較于口服給藥，腹腔注射給藥時SMZ在草魚血漿和肌肉中的吸收、分布與消除速度都更快。血漿中SMZ的分布半衰期(t1/2α)為0.596±0.117 h，t1/2β為 9.85±0.64 h，肌肉中 SMZ 的t1/2α為 0.535±0.421 h，t1/2β為 9.73±0.58 h。

同品種魚類不同組織對不同種磺胺類藥物的吸收、分布、代謝及消除存在較大差異。李金寶等［10］研究了SM2、SD 及磺胺對甲氧嘧啶(SMD)這3種磺胺類藥物在中國對蝦體內(nèi)的藥代動力學(xué)特征。試驗(yàn)期間，以100 mg/kg的劑量單次口服3種磺胺類藥物。結(jié)果表明，CYP2C參與磺胺類藥物在中國對蝦體內(nèi)的代謝，是磺胺類藥物的一個主要代謝酶;SMD在中國對蝦體內(nèi)分布比SM2、SD更廣泛，且吸收量最多，消除半衰期最長，清除率最低，表明SMD的藥效更加持久。

綜合以上分析，同種磺胺類藥物在不同種動物不同組織的代謝不同，不同種磺胺類藥物在同種動物不同組織的代謝不同?；前奉愃幬镌趧游矬w內(nèi)的吸收、分布、代謝及消除與動物的年齡、性別以及投喂次數(shù)、不同給藥途徑還有環(huán)境溫度都有關(guān)。因此在實(shí)際生產(chǎn)中要根據(jù)藥物使用情況和自身養(yǎng)殖條件靈活地把握休藥期。

2 殘留消除規(guī)律及檢測方法研究

2.1 磺胺類藥物在動物體內(nèi)的殘留消除規(guī)律研究我國農(nóng)業(yè)部235號公告規(guī)定，磺胺類藥物在所有食品動物的肌肉、脂肪、肝、腎和牛奶中的最高殘留限量為100μg/kg。通?；前匪幵诟闻K和血液中濃度最高，在脂肪和肌肉中的含量較低［10］?；前奉愃幬锏臍埩魳?biāo)示物為原形藥物，殘留靶組織為肝臟。對于磺胺類藥物的殘留消除研究，目前研究最多的是水產(chǎn)動物，因此，本文著重介紹水產(chǎn)動物的殘留消除規(guī)律。

侯延龍等［20］在(18±1)℃水溫條件下，對彭澤鯽采用多劑量混飼和口灌兩種方式給藥，研究了SMZ在彭澤鯽體內(nèi)的殘留消除規(guī)律，劑量為150 mg/kg，連續(xù)給藥10 d。結(jié)果表明:SMZ在彭澤鯽肌肉中濃度最高，腎臟中最低?？诠嘟o藥需要22 d各組織中的殘留量才滿足要求，而混飼給藥則需要24～25 d。與口灌給藥相比，混飼給藥各組織中的SMZ殘留量要低，且殘留消除速度要慢。這說明給藥方式不同殘留消除速度不同，從而休藥期不同，因此在實(shí)際養(yǎng)殖用藥時應(yīng)注意給藥方式對休藥期的影響。

陳進(jìn)軍等［21］研究了在(27±1)℃水溫條件下，以100 mg/kg單劑量口灌給藥復(fù)方磺胺嘧啶后，SD在擬穴青蟹(Scylla paramamosain)體內(nèi)的分布和殘留消除規(guī)律。結(jié)果顯示:SD在肝胰腺中含量最高，消除最為緩慢，需要6 d才能滿足最大殘留限量，而肌肉和鰓僅需4 d即可滿足要求，說明藥餌或口灌給藥途徑下，肝胰腺可能是殘留靶器官。

鞠晶等［22］在(28±2)℃水溫條件下，對吉富羅非魚分別采用單次給藥和連續(xù)給藥，研究了磺胺間甲氧嘧啶(SMM)在羅非魚體內(nèi)的藥代動力學(xué)及殘留消除規(guī)律。結(jié)果顯示:以200 mg/kg劑量單次混飼給藥后，SMM在各組織中的含量依次為，肝臟＞腎臟＞血液＞肌肉，并且在肌肉和血液中的消除快于肝臟、腎臟。按200 mg/kg的劑量連續(xù)5 d給藥后，SMM在肌肉中的含量降低到0.1 mg/kg的時間約為120 h，建議休藥期不低于5 d。

孫晨明等［23］采用高效液相色譜法研究復(fù)方磺胺氯吡嗪鈉混懸液在雞體內(nèi)的殘留消除規(guī)律。實(shí)驗(yàn)以300 mg/L飲水連續(xù)7 d混飲給藥，對每只雞的肌肉、肝臟、腎臟和皮脂進(jìn)行殘留量的檢測。結(jié)果表明:磺胺氯吡嗪在肌肉中的消除要快于其他組織，而在皮脂中消除最為緩慢，在停藥第7天低于最大殘留限量，休藥期為7 d。徐維等［24］采用高效液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法研究SMD和二甲氧芐啶(DVD)預(yù)混劑在白羽肉雞體內(nèi)的殘留消除規(guī)律。實(shí)驗(yàn)以添加1000 mg/kg SMD和DVD預(yù)混劑的全價飼料連續(xù)飼喂10 d，結(jié)果表明，SMD在白羽肉雞腎臟中殘留量最高，其次是肝臟，肌肉中殘留量最低，建議休藥期為7 d。

韓冰等［25］在(20±0.5)℃水溫條件下采用高效液相色譜法研究了復(fù)方磺胺甲噁唑在松浦鏡鯉體內(nèi)的殘留消除規(guī)律。實(shí)驗(yàn)以50 mg/kg的劑量連續(xù)5 d口灌給藥，結(jié)果表明:SMZ在肌肉中的消除要快于血漿和皮，在停藥第9天開始所有檢測組織中SMZ已全部低于最大殘留限量，建議休藥期至少為15 d。

綜合以上分析，磺胺類藥物在不同水產(chǎn)動物體內(nèi)消除速度不同，并且不同組織消除速度也不同，相比較而言肌肉中的消除速度最快。磺胺類藥物在水產(chǎn)動物上的消除也因給藥方式、給藥劑量、環(huán)境水溫、動物種屬和藥物種類等有很大的差別，因此，在實(shí)際生產(chǎn)時應(yīng)根據(jù)自身的養(yǎng)殖條件去靈活的把握藥物的休藥期。

2.2 磺胺類藥物殘留檢測方法研究 目前，磺胺類藥物的檢測方法主要有微生物學(xué)法、理化分析方法和免疫法等。

微生物學(xué)法的原理是利用微生物與藥物的作用來檢測樣品中磺胺藥的種類和含量。該法簡便、費(fèi)用低，一般實(shí)驗(yàn)室都可操作?；前奉愃幬锏奈⑸餀z測方法有很多，包括STOP法、CAST法、FAST法等。目前應(yīng)用最多的是FAST法，因?yàn)橄噍^于另外兩種方法，F(xiàn)AST法具有高敏感性和檢測分析快速性且最低殘留限量更低［26］。

理化分析法常作為確證方法檢測動物組織中磺胺類藥物的殘留，主要有高效液相色譜法(HPLC)、液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法(LC－MS)、氣相色譜法(GC)、氣相色譜－質(zhì)譜法(GC－MS)、高效毛細(xì)管電泳法(HPCE)等。

高效液相色譜法是實(shí)驗(yàn)室最為普遍的磺胺類藥物檢測方法，最常用的有紫外檢測器(UVD)、熒光檢測器(FLD)、電化學(xué)檢測器(ECD)以及二極管陣列檢測器(DAD)等［27］。由于磺酰胺具有苯環(huán)結(jié)構(gòu)，因此可用紫外檢測器進(jìn)行檢測。Ke－jun Deng［28］采用HPLC－UV測定雞肝中磺胺醋酰，磺胺噻唑(STZ)，SM2和磺胺甲氧基噠嗪(SMP)殘留量，該方法使用固相萃取(SPE)和分散液液相微萃取(DLLME)技術(shù)進(jìn)行樣品前處理，C18液相色譜柱進(jìn)行分離。檢測限為 0.4～8.4 μg/kg。加標(biāo)回收率范圍為70.2%～91.4%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于5.35%。在有許多雜質(zhì)峰干擾的情況下，可用二極管陣列檢測器進(jìn)行檢測，可以有效避免樣品基質(zhì)中雜質(zhì)的干擾。Premarathne等［29］報道采用 HPLC－DAD 檢測方法可同時測定雞和雞蛋中的七種磺胺類藥物(SD，STZ，磺胺吡啶(SPD)，磺胺甲基嘧啶(SMR)，SM2，SMZ和SMP)。樣品用蒸餾水:乙酸乙酯(1∶3)液－液萃取進(jìn)行提取，正庚烷脫脂，平均回收率在86%～108%之間，檢測限為129至140 ppb?；前奉愃幬锝Y(jié)構(gòu)中含有氨基，也可采用衍生技術(shù)進(jìn)行熒光在線衍生，熒光檢測器檢測。許旭［30］建立了HPLC－FLD測定牛肉中16種磺胺殘留量的方法。該方法采用改良QuEChERS進(jìn)行樣品前處理，然后取上清液與熒光胺柱后在線衍生，熒光檢測器檢測。檢測限為 1.6～8.2 μg/kg，加標(biāo)回收率范圍為66.6%～109.5%。由于 HPLC 分析速度較慢，對中藥等組分較復(fù)雜的樣品分離比較困難，篩查效率較低。近幾年來超高效液相色譜法(Ultra Performance Liquid Chromatography，UPLC)逐漸發(fā)展起來。UPLC的色譜柱采用小粒徑填料，更小的孔徑有利于物質(zhì)的分離，也有利于縮短分析時間，提高分析通量。相較于HPLC，UPLC的分離效率、峰容量以及靈敏度都更高［31］。

液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)目前也被廣泛地應(yīng)用于磺胺類藥物的分離檢測，與液相色譜相比具有分離效率高、分析時間短、準(zhǔn)確率高等優(yōu)點(diǎn)［32］。程國棟等［33］采用超高效液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC MS/MS)測定調(diào)制乳中三種磺胺類藥物的殘留量，該方法使用乙酸水溶液和甲醇進(jìn)行提取，提取液經(jīng)HLB固相萃取柱凈化。該方法的定量限為1μg/kg，平均加標(biāo)回收率為76.5%～101.9%，此方法適用于調(diào)制乳中磺胺類藥物殘留的確證檢測。Abdallah［34］開發(fā)了一種LC－MS/MS方法，用于測定23種磺胺類藥物在可食性組織中的殘留。使用QuEchers方法進(jìn)行樣品前處理，Zorbax Eclipse XDB－C8色譜柱(100 mm×2.1 mm，3.5 μm) 分離，采用電噴霧正離子電離，多反應(yīng)監(jiān)測模式檢測。該方法的檢測限和定量限范圍分別為 0.5～14.5 μg/kg 和 1.8～48.4 μg/kg。Xiaojing Li等［35］建立了一種 QuEChERS－分散液液微萃取結(jié)合超高效液相－串聯(lián)質(zhì)譜快速檢測豬肉樣品中19種磺胺類藥物殘留的檢測方法。樣品經(jīng)QuEChERS前處理，分散液液微萃取富集，BHE C18柱分離，以乙腈和0.1%甲酸作為流動相梯度洗脫，采用多反應(yīng)監(jiān)測正離子模式測定，檢出限為0.04～0.49 μg/kg，平均加標(biāo)回收率在 78.3% ～106.1%范圍內(nèi)。Haixiang Zhao等［36］建立了多壁碳納米管為吸附劑的固相萃取凈化－高效液相色譜－紫外檢測測定豬肉和雞肉中12種磺胺類藥物多殘留的方法。樣品采用乙腈提取，多壁碳納米管固相萃取凈化。檢測限為 0.003 mg/L，定量限為 0.01 mg/L，9 種磺胺類藥物的回收率高于70%。

氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法是將氣相色譜和質(zhì)譜通過接口連接起來，將復(fù)雜化合物分析分離成單組分之后進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行成分檢測的方法。趙曉鳳等［37］利用氣相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法檢測豬肉組織中的磺胺二甲嘧啶殘留量。樣品脫脂后，采用二氯甲烷提取樣品中的目標(biāo)化合物，經(jīng)萃取、硅烷化衍生后，用氣相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法檢測。該方法快速準(zhǔn)確，干擾較少。檢測限為0.01 mg/kg，加標(biāo)回收率為76%～110%。

近幾年來，由于磁性功能材料的訊速發(fā)展，將磁性功能材料與固相萃取技術(shù)相結(jié)合用于磺胺類藥物的殘留檢測已有報道。與傳統(tǒng)固相萃取相比較，磁性固相萃取(MSPE)最主要的優(yōu)勢是不需要萃取柱，容易吸附，并且目標(biāo)化合物能從固定相上簡單、快速地分離，能大大縮短分析時間［38］。Pengzhi Shi等［39］制備了 Fe3O4－氧化石墨烯(Fe3O4－GO)納米復(fù)合材料，并將其作為磁性吸附劑進(jìn)行樣品前處理，再用HPLC－DAD對水中的三種磺胺類化合物(SD、SM2、STZ)進(jìn)行檢測。測得檢測限在 0.05～0.10 μg/mL 之間，回收率在 67.4% ～119.9%之間。Hongyuan Yan等［40］采用微型化石墨烯管尖萃取(M－G－PTE)方法，結(jié)合 HPLC－UV 檢測技術(shù)，對牛乳中的SM2、磺胺氯噠嗪 、SMM、磺胺氯吡嗪進(jìn)行了殘留檢測。與C18、HLB和多壁碳納米管相比，M－GPTE對磺胺類化合物的吸附性能更好。檢測限為0.004～0.012 μg/g，加標(biāo)回收率在 90.1%～113.5%。該方法簡單、經(jīng)濟(jì)、靈敏，產(chǎn)生的有機(jī)污染少，可用于復(fù)雜牛乳樣品中磺胺類藥物的快速篩選。Mengyu Qi等［41］建立了一種基于氧化石墨烯/聚吡咯(GO/PPy)的管尖固相萃取技術(shù)(PT－SPE)，與高效液相色譜相結(jié)合，用于檢測蜂蜜和牛奶樣品中的磺胺類化合物。測得檢測限為1.04～1.50 ng/mL，平均回收率為 62.3%～109.0%。該方法快速、靈敏、準(zhǔn)確，適用于復(fù)雜成分中的磺胺類藥物分析。

高效毛細(xì)管電泳法是近年來發(fā)展的一種新的檢測技術(shù)，具有高效、快速、微量和環(huán)境污染小等優(yōu)點(diǎn)。張琳婧等［42］采用固相萃?。?xì)管電泳法同時檢測牛奶中5種磺胺類藥物的含量。該方法能使5種磺胺類藥物在16 min內(nèi)得到完全分離，檢測限為 4 mg/L，平均加標(biāo)回收率為 100.8%～104.1%。該法簡單、可靠，靈敏度高，適用于牛奶中磺胺類藥物殘留的檢測。

免疫分析法主要為酶聯(lián)免疫法(ELISA)與化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法(CMIA)［43］，膠體金免疫層析技術(shù)［44］，該法靈敏度高、操作簡單、檢測成本低、可批量檢測，具有較好的發(fā)展前景。

酶聯(lián)免疫吸附法的特點(diǎn)是操作簡便、靈敏度高、可實(shí)現(xiàn)大量樣品的通量化檢測。Wenxiao Jiang等［45］開發(fā)了一種新的雙比色酶聯(lián)免疫吸附法(DCELISA)，可同時檢測牛奶中22種磺胺類藥物。該方法將兩種不同的酶(堿性磷酸酶和辣根過氧化物酶)同時用于單次免疫測定的每個孔中，用于檢測多種低分子量化合物。磺胺類藥物的檢測限為5.8 ng/mL。何進(jìn)等［46］采用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法對雞肉、魚肉、蝦肉中的磺胺類藥物殘留進(jìn)行檢測，方法靈敏度為1μg/kg，3類樣品的最低檢測限均為0.864μg/kg?；前奉愃幬镌陔u肉中添加回收率為 94.36%～100.11%，RSD 為 1.2%～6.5%;與液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜相比，檢測結(jié)果一致，但檢測時間短、前處理簡單、成本低、批次檢測量大。Haasnoot［47］建立了一種生物傳感器免疫測定法(BIA)來檢測雞血清和血漿中的SMZ和SD。該方法分析速度快(每個樣品5 min)，樣品制備容易(僅在含有抗體的緩沖液中稀釋)，并且兩種磺胺類藥物的檢測限均低于 10 ng/mL。Dapeng Peng［48］利用分子印跡聚合物(MIP)作為人工識別元件，結(jié)合SPE建立了一種分子印跡－酶聯(lián)免疫分析法(MI－ELISA)。該方法用于檢測SM2在豬肌肉中的殘留量，檢測限和定量限分別為 6.8 μg/kg、20.4 μg/kg，是一種快速有效的檢測方法。

3 展望

本文著重總結(jié)了近年來磺胺類藥物在水產(chǎn)動物體內(nèi)的代謝與殘留消除研究進(jìn)展，表明環(huán)境溫度、動物的種屬、年齡以及投喂次數(shù)、不同給藥途徑等都會對其在動物體內(nèi)的代謝與消除造成明顯影響，這也使得磺胺類藥物在動物體內(nèi)的休藥期會因養(yǎng)殖條件不同而有所變化?；前奉愃幬锏拇x存在明顯的種屬差異性，而目前對于磺胺類藥物的代謝研究僅僅局限于畜禽中的幾種動物，但實(shí)際用藥中，仍有許多其他特種動物也在使用，而磺胺類藥物在這些動物體內(nèi)的代謝途徑尚不清楚，代謝物不明確，有可能會產(chǎn)生毒性效應(yīng)和殘留。因此，有必要擴(kuò)大磺胺類藥物在各種屬動物上的代謝研究。另外，目前對于磺胺類藥物代謝酶尚未開展系統(tǒng)的研究。研究磺胺類藥物代謝酶有助于明確和其他藥物之間在體內(nèi)的相互作用，同時有助于指導(dǎo)磺胺類新藥的開發(fā)。

磺胺類藥物的殘留與代謝密不可分，劑型、給藥途徑、劑量、種屬、年齡以及聯(lián)合用藥等影響代謝的因素均能影響其在動物體內(nèi)的殘留消除?，F(xiàn)如今磺胺類藥物在食源性動物體內(nèi)殘留超標(biāo)嚴(yán)重，尋找一種快速有效的殘留預(yù)測方法就顯得尤為重要。已有研究表明生理藥動學(xué)(physiologically based pharmacokinetics，PBPK)模型可用于預(yù)測藥物在動物體內(nèi)的殘留［49］，因此基于PBPK模型的特點(diǎn)和優(yōu)勢結(jié)合計(jì)算機(jī)技術(shù)開發(fā)一種磺胺類藥物殘留預(yù)測模型在指導(dǎo)磺胺類藥物的合理使用以及殘留監(jiān)管上具有實(shí)際意義。

基于現(xiàn)場監(jiān)控和基層檢測磺胺類藥物的殘留需要，開發(fā)更加簡便、快速、靈敏，適合基層的臨床檢測技術(shù)尤為重要。近些年來隨著納米材料、免疫生物材料等新型材料的快速發(fā)展而發(fā)展起來的簡便快速甚至自動化的樣品前處理方法將是檢測磺胺類藥物殘留的重要發(fā)展趨勢。