王海燕，陳 瓊

(信陽(yáng)農(nóng)林學(xué)院 生物與制藥工程學(xué)院，信陽(yáng)市中藥資源開發(fā)工程技術(shù)研究中心，信陽(yáng)市中藥質(zhì)量分析檢測(cè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 河南 信陽(yáng)464000)

復(fù)方半邊蓮由半邊蓮、半枝蓮、白花蛇舌草三味中藥組成。目前僅有復(fù)方半邊蓮注射液一種劑型(河南同源制藥有限公司獨(dú)家生產(chǎn)的中藥注射液品種)，具有清熱解毒、消腫止痛的功效，臨床用于治療多發(fā)性癤腫、扁桃腺炎、乳腺炎等癥，亦可配合化療用于腫瘤，還可治療小兒支氣管肺炎、小兒或成人急性呼吸道感染、外感高熱等癥[1-4]。但中藥注射劑存在不安全因素，如致過(guò)敏、致休克等[5-7]。

類脂質(zhì)體是由非離子型表面活性劑與膽固醇構(gòu)成的一種單層或多層的新型藥物載體。其結(jié)構(gòu)組成及體內(nèi)、外的性質(zhì)多與脂質(zhì)體相似，但其不含磷脂，不存在磷脂的氧化降解問(wèn)題，生產(chǎn)和貯存皆不需特殊條件，可使工藝簡(jiǎn)化，成本降低。

本項(xiàng)目前期已進(jìn)行了該處方水溶性藥效部位制備工藝的研究，本文將采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)其水溶性藥效部位制備類脂質(zhì)體工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，以期為復(fù)方半邊蓮新劑型開發(fā)探尋成熟穩(wěn)定的中間體制備方法。

1 材料、試劑和儀器

1.1 材料與試劑

半邊蓮、半枝蓮、白花蛇舌草購(gòu)于信陽(yáng)市藥材站(經(jīng)信陽(yáng)農(nóng)林學(xué)院梁利香副教授鑒定合格)，野黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所，批號(hào)110842-201106)，纖維素酶(北京奧博星生物有限公司，批號(hào)20110910)，純化水(自制)，乙醇、氫氧化鈉、鹽酸均為分析純，甲醇為色譜純，一級(jí)針用活性炭。

1.2 儀器

Agilent1100 高效液相色譜儀(安捷倫科技有限公司), RE-3000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)，SHB-3 型循環(huán)水多用真空泵(鄭州杜甫儀器廠)，ZSBB-712 恒溫水浴(上海智城分析儀器制造有限公司)，PB602-S 電子天平[梅特勒·托利多儀器(上海)有限公司]，SCQ-8201E 超聲清洗儀(上海聲彥超聲波儀器設(shè)備有限公司)。

1.3 藥材處理

將半邊蓮、半枝蓮、白花蛇舌草挑揀、淘洗后，105℃烘干，備用。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 復(fù)方半邊蓮水溶性藥效部位的制備[8-9]

采用纖維素酶協(xié)同超聲波法，以純化水為提取溶媒，水提醇沉法制備復(fù)方半邊蓮水溶性藥效部位。以上三味藥材，各取50g。酶解條件為：酶用量6.7 mg/g(酶/藥材)，酶解pH6.0，酶解溫度40℃，酶解30 min；超聲條件為：功率400 W，料液比1:15(第1次10倍量，第2次5倍量)，超聲時(shí)間30 min(第1次20 min，第2次10 min)，提取2次。合并濾液濃縮至相對(duì)密度為1.15(55～60 ℃)的清膏，加乙醇至含醇量為65%，靜置12 h，濾過(guò)，濾液調(diào)節(jié)pH 8.0～8.5，靜置1 h，濾過(guò)，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，加純化水至50 mL，調(diào)節(jié)pH 2.0～3.0，加活性炭5 g，攪拌均勻，煮沸30 min，濾過(guò)，濾液調(diào)節(jié)pH 6.0，冷藏24 h，濾過(guò)，再調(diào)節(jié)pH6.0～7.0，濃縮，即得。

2.2 復(fù)方半邊蓮水溶性藥效部位類脂質(zhì)體的制備

2.2.1 PBS溶液(pH7.6)的制備 稱取磷酸二氫鉀27.22g，加水使溶解成1000mL，取50 mL，加0.2mol/L氫氧化鈉溶液42.4 mL，再加水稀釋至200 mL，即得。

2.2.2 復(fù)方半邊蓮水溶性藥效部位類脂質(zhì)體的制備 采用乙醚-薄膜分散法制備。①按正交表中司盤-80和膽固醇比例，加2倍載體量體積的乙醚，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中55℃旋轉(zhuǎn)成膜；②制備復(fù)方半邊蓮水溶性藥效部位的PBS溶液，濃度為0.25g/mL；③將①中薄膜溶于乙醚中，加入②；④在考察溫度和時(shí)間內(nèi)水合。

在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，以類脂質(zhì)體包封率為指標(biāo)，采用L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)影響類脂質(zhì)體制備工藝中的參數(shù)表面活性劑司盤-80：膽固醇、載體：藥物、水合溫度、水合時(shí)間進(jìn)行考察，見表1-3。

表1 正交試驗(yàn)因素-水平表

2.2.3 復(fù)方半邊蓮水溶性藥效部位類脂質(zhì)體包封率的測(cè)定 取類脂質(zhì)體粉末0.05g，精密稱定，加蒸餾水溶解并定容至20ml，并轉(zhuǎn)移至透析袋內(nèi)；將透析袋放入150ml蒸餾水中，于磁力攪拌器上室溫?cái)嚢?h，取外介質(zhì)溶液10ml，揮干，用20%甲醇溶解并定容至5ml，經(jīng)0.22 m的微孔濾膜過(guò)濾，HPLC法測(cè)定，計(jì)算復(fù)方半邊蓮水溶性藥效部位中野黃芩苷的濃度，并計(jì)算包封率。

包封率計(jì)算公式為EE(%)=( C總-C游離)/ C總*100%

2.2.4 野黃芩苷的測(cè)定 按復(fù)方半邊蓮注射液含量測(cè)定項(xiàng)下方法[9]測(cè)定。

2.2.5 噴霧干燥法制備類類脂質(zhì)體粉末 按優(yōu)化條件制備復(fù)方半邊蓮類脂質(zhì)體混懸液，選定進(jìn)口溫度為120℃、進(jìn)料速度為180mL/h、 霧化壓力為105KPa， 進(jìn)行噴霧干燥，制備復(fù)方半邊蓮水溶性藥效部位類脂質(zhì)體粉末。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 正交試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果見表2-3。由表2、表3結(jié)果分析可知，各因素對(duì)復(fù)方半邊蓮水溶性藥效部位類脂質(zhì)體包封率影響的主次順序?yàn)椋篈> B>D>C，即司盤-80：膽固醇為主要影響因素，且具極顯著性，載體：藥物為次要影響因素，具顯著性，其次為水合時(shí)間，水合溫度影響最小。確定的最佳工藝條件為A1B2C1D1，即司盤-80：膽固醇為1:1，載體：藥物為1.05:1，水合溫度為 60℃，水合時(shí)間12min。

3.2 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

按優(yōu)選的制備工藝條件，平行制備5份復(fù)方半邊蓮水溶性藥效部位類脂質(zhì)體，按2.2.3下方法測(cè)定包封率，結(jié)果分別為62.53%、62.41%、62.29%、62.45%、62.35%，平均包封率為62.41%(RSD為1.48%)，高于正交試驗(yàn)表中任一條件下的包封率。

制備的類脂質(zhì)體在顯微鏡下如圖1。

表2 正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果

表3 方差分析表

F0.05(2,2)=19.00 F0.01(2,2)=99.00 **：極顯著差異 *：顯著差異

4 結(jié)論

對(duì)中藥有效部位進(jìn)行研究，是中藥現(xiàn)代化進(jìn)程中一項(xiàng)不可或缺的工作。本文在前期對(duì)該處方水溶性藥效部位研究的基礎(chǔ)上，對(duì)該藥效部位類脂質(zhì)體的制備工藝進(jìn)行摸索，通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)確定的制備工藝為：按司盤-80和膽固醇質(zhì)量比1：1混合，加2倍量體積的乙醚，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中55℃旋轉(zhuǎn)成膜，加適量乙醚溶解，加入復(fù)方半邊蓮水溶性藥效部位0.25g/mL的PBS溶液，超聲10min，再加入適量PBS溶液，于60℃水合12min；再于進(jìn)口溫度為120℃、進(jìn)料速度180mL/h、 霧化壓力105KPa的條件下進(jìn)行噴霧干燥，制備復(fù)方半邊蓮水溶性藥效部位類脂質(zhì)體粉末。

本文是在實(shí)驗(yàn)室條件下進(jìn)行的復(fù)方半邊蓮水溶性藥效部位類脂質(zhì)體制備，作為復(fù)方半邊蓮新開發(fā)的中間體，尚需對(duì)產(chǎn)品的外觀、粒徑分布、載藥量、體外釋放度等進(jìn)行相關(guān)考察，以確定其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

圖1復(fù)方半邊蓮水溶性藥效部位類脂質(zhì)體