吳 飛 陳 晨

（揚(yáng)州市疾病預(yù)防控制中心 江蘇 揚(yáng)州 225002）

對(duì)游泳池水進(jìn)行嚴(yán)格的消毒殺菌，是防止各種疾病的傳播，保障游泳者健康與池水水質(zhì)的必要措施。我國(guó) GB26370-2010《含溴消毒劑衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》[1]規(guī)定，溴氯海因和二溴海因適用于游泳池水、污水和一般物體表面消毒。GB/T36758-2018《含氯消毒劑衛(wèi)生要求》[2]規(guī)定，二氯海因可用醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)、公共場(chǎng)所和水的消毒。

二氯海因、溴氯海因和二溴海因均屬乙內(nèi)酰脲類衍生物，在水中水解生成5,5-二甲基乙內(nèi)酰脲、次溴酸和次氯酸，起消毒殺菌作用。但其在消毒過程中可與水中有機(jī)物發(fā)生反應(yīng)，生成對(duì)人體有害的鹵代消毒副產(chǎn)物。大量研究表明，鹵乙酸僅次于三鹵甲烷的第二大類 DBPs，其濃度約占DBPs總量的13%，但致癌風(fēng)險(xiǎn)占總致癌風(fēng)險(xiǎn)的91.95%以上。常見的HAAs 有 一氯乙酸、二氯乙酸、三氯乙酸、一溴乙酸、二溴乙酸、三溴乙酸、溴氯乙酸、一溴二氯乙酸、二溴一氯乙酸9 種[3]。目前文獻(xiàn)報(bào)道的測(cè)定乙內(nèi)酰脲的方法有液相色譜法[4]；9種鹵乙酸的檢測(cè)方法有液相色譜-質(zhì)譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法、氣相色譜法[3,5-6]，前兩種方法儀器設(shè)備價(jià)格昂貴，難以在基層實(shí)驗(yàn)室開展檢測(cè)，后一種方法需要衍生，操作繁瑣，本實(shí)驗(yàn)在保證目標(biāo)化合物峰型對(duì)稱性和分離效果的條件下，通過適當(dāng)加大進(jìn)樣量，建立了同時(shí)測(cè)定游泳池水中二甲基乙內(nèi)酰脲和9種鹵乙酸的高效液相色譜分析方法

1.實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器

1290型高效液相色譜儀，配自動(dòng)進(jìn)樣器和二極管陣列檢測(cè)器（美國(guó)Agilent公司）。

1.2 試劑

二甲基乙內(nèi)酰脲、9種鹵乙酸標(biāo)準(zhǔn)品（上海安譜公司）；甲醇 (上海安譜公司CNW)；磷酸氫二鈉、磷酸（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液與標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

分別取適量的二甲基乙內(nèi)酰脲和9種鹵乙酸標(biāo)準(zhǔn)品（精確到0.01mg）用純水溶解定容至50ml，配制濃度為1000mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，置于冰箱中保存。精密吸取一定量的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用純水逐級(jí)稀釋成0.02mg/L～20.0mg/L混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 樣品前處理 均勻水樣經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾后，收集約1.5ml按色譜條件進(jìn)行測(cè)定。

1.4.2 色譜條件 PICKERING-C8 色譜柱（4.6 mm×250mm，5μm）；柱溫30℃；流量1.0ml/min；進(jìn)樣體積100μL；檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm,流動(dòng)相：A為甲醇，B為0.01mol/L磷酸氫二鈉（PH7.5）。梯度洗脫程序：0～6min時(shí)，A為5%；6～20min時(shí)，A由5%升至20%，20～25min時(shí)，A由20%降至5%，保持5min。

圖1 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

2.結(jié)果

2.1 流動(dòng)相條件的選擇

為確定合適的流動(dòng)相和梯度洗脫程序,分別采用乙腈-水、甲醇-水、甲醇-0.02mol/L乙酸銨、甲醇-0.01mol/L磷酸氫二鈉作為流動(dòng)相進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，并比較了在不同pH條件下的分離度，在柱溫30℃；流量1.0ml/min；流動(dòng)相：A為甲醇，B為0.01mol/L磷酸氫二鈉（PH7.5），0～6min時(shí)，A為5%；6～20min時(shí)，A由5%升至20%，20～25min時(shí)，A由20%降至5%，保持5min的條件下甲基乙內(nèi)酰脲和9種鹵乙酸能達(dá)到有效分離且峰型對(duì)稱性好，游泳池水中尿素在此條件下不保留，不對(duì)檢測(cè)產(chǎn)生干擾，故選用上述流動(dòng)相比例作為本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)條件。

2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

利用二極管陣列檢測(cè)器在190nm～400nm之間進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，在本流動(dòng)相條件下二甲基乙內(nèi)酰脲和9種鹵乙酸最大吸收波長(zhǎng)在200nm～216nm之間，綜合考慮10種化合物的檢測(cè)靈敏度和不同檢測(cè)波長(zhǎng)下基線噪聲因素，選擇 210nm作為本方法的檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限

用純水稀釋混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液配制成0.02、0.05、0.10、0.25、0.50,1.00,5.00，10.0,20.0mg/L混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,按實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定,并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明：僅一氯乙酸0.5～20.0mg/L范圍，二甲基乙內(nèi)酰脲和其余9種鹵乙酸的質(zhì)量濃度均在0.02～20.0mg/L范圍內(nèi)與其峰面積呈線性關(guān)系,見表1。

2.4 精密度與回收實(shí)驗(yàn)

分別向自來水樣中添加低、中、高三個(gè)濃度的二甲基乙內(nèi)酰脲和9種鹵乙酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述實(shí)驗(yàn)條件分別進(jìn)行6次測(cè)定，見表2。

表1 線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限

表2 精密度和回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=6）

3.結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立了采用高效液相色譜同時(shí)測(cè)定游泳池水中二甲基乙內(nèi)酰脲和9種鹵乙酸的檢測(cè)方法.方法的建立對(duì)了解游泳池水中的有毒有害物質(zhì)，進(jìn)行有毒有害物質(zhì)的篩查，保障游泳者、游樂者、藝術(shù)表演者的身體健康提供了可靠的科學(xué)依據(jù)。