李臻 潘教文 王慶國(guó) 劉煒

摘要：本課題組在對(duì)水稻病害的研究中，鑒定并克隆到一個(gè)羧酸酯酶基因?OsCDAP?。為進(jìn)一步研究該酯酶生物學(xué)功能，構(gòu)建了?OsCDAP?植物過(guò)表達(dá)載體，通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)化水稻“中花11”。轉(zhuǎn)基因水稻表型分析顯示，過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)基因水稻植株株高略高于對(duì)照，其第一節(jié)間長(zhǎng)度明顯長(zhǎng)于對(duì)照，而第五節(jié)間長(zhǎng)度明顯短于對(duì)照，其他節(jié)間長(zhǎng)度差異不明顯;?OsCDAP?過(guò)表達(dá)株系的劍葉夾角明顯大于對(duì)照。進(jìn)一步對(duì)轉(zhuǎn)基因水稻GA和BR合成及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)部分基因的表達(dá)發(fā)生改變。本試驗(yàn)結(jié)果顯示?OsCDAP?可通過(guò)調(diào)控內(nèi)源GA和BR的含量及參與相關(guān)信號(hào)途徑調(diào)控水稻節(jié)間長(zhǎng)度及葉夾角大小，進(jìn)而對(duì)水稻的生長(zhǎng)發(fā)育產(chǎn)生影響。

關(guān)鍵詞：水稻;羧酸酯酶OsCDAP;株高;節(jié)間長(zhǎng)度;劍葉夾角;赤霉素;油菜素內(nèi)酯;基因表達(dá)

中圖分類號(hào)：S511.03??文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A??文章編號(hào)：1001-4942（2019）01-0008-06

Biological Function Analysis of Carboxylesterase OsCDAP in Rice

Li Zhen?Pan Jiaowen?Wang Qingguo?Liu Wei

（1. Biotechnology Research Center/Shandong Provincial Key Laboratory of Crop Genetic Improvement，

Ecology and Physiology， Shandong Academy of Agricultural Sciences， Jinan 250100， China;

2.College of Life Sciences， Shandong Normal University， Jinan 250014，China）

Abstract?Our research group cloned and indentified a carboxylesterase gene OsCDAP in the study of rice diseases. In order to study its function， an over-expression vector containing OsCDAP was constructed， and the transgenic lines of rice Zhonghua 11 were harvested through Agrobacterium-mediated transformation. Phenotype analysis showed that the plant height of OsCDAP over-expressed rice was slightly higher than that of control. The length of the first internode of transgenic strains was significantly longer than that of control， while the length in the of the fifth internode was significantly shorter than that of the control. There were almost no significant differences in the other internode length between transgenic strains and control. The leaf angles of flag leaves of transgenic strains were significantly larger than those of control. The expressions of GA and BR synthesis and signal transduction genes were also changed corresponding to the phenotypes variation. The results indicated that OsCDAP might regulate rice internode length and leaf angle by regulating the GA and BR synthesis and participating in signal transduction， which eventually lead to the variation of growth and development of rice.

Keywords?Rice; Carboxylesterase OsCDAP; Plant height; Internode length; Flag leaf angle; GA; BR; Gene expression

水稻是世界上最重要的糧食作物之一，全世界一半以上的人口以稻米作為主食。隨著全球人口的增加和耕地面積的減少，選育優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的水稻品種對(duì)于維系世界糧食安全具有重要意義。株高及葉夾角是水稻株型形成的關(guān)鍵因素，與產(chǎn)量密切相關(guān)[1，2]。研究發(fā)現(xiàn)，水稻體內(nèi)多種基因參與株高及葉夾角的調(diào)控過(guò)程。其中生長(zhǎng)素（auxin， IAA）、赤霉素（gibberellin， GA）以及油菜素內(nèi)酯（brassinolide，BR）在調(diào)控株高及葉夾角形成過(guò)程中均發(fā)揮重要作用。半矮稈基因SD1的發(fā)現(xiàn)帶來(lái)第一次綠色革命，該基因編碼GA合成途徑關(guān)鍵酶GA20ox-2氧化酶基因，該位點(diǎn)的突變可以導(dǎo)致水稻不同程度的矮化[3];其他參與GA合成的基因如水稻貝殼杉烯氧化酶基因OsKO2[4]、GA氧化酶基因GA20ox1[5]以及GA3β羥基化酶基因OsGA3ox2[6]的缺失突變，均可導(dǎo)致水稻植株矮化。而B(niǎo)R合成基因D2、D11以及OsBR6ox等基因的缺失，不但導(dǎo)致突變體水稻株高降低，還能導(dǎo)致葉夾角變小[7-9]。SMOS1和DLT是BR、IAA和GA互作的關(guān)鍵基因，其功能缺失導(dǎo)致植株出現(xiàn)矮化、節(jié)間變短、葉片直立等表型[10，11]。

羧酸酯酶是一大類水解酶家族，參與多種生物學(xué)過(guò)程，在植物生長(zhǎng)發(fā)育、植物與病原物的互作、除草劑等植物毒素的代謝、植物激素信號(hào)物質(zhì)的活化以及植物響應(yīng)脅迫等過(guò)程發(fā)揮重要作用[12-15]。課題組前期在水稻中克隆到一個(gè)羧酸酯酶基因?OsCDAP?（LOC_Os11g04350），該基因在水稻莖中高表達(dá)，并受GA誘導(dǎo)，GA抑制劑PAC可抑制其表達(dá)[16]。本研究通過(guò)構(gòu)建?OsCDAP?過(guò)表達(dá)載體，用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)化水稻愈傷組織，再經(jīng)多代篩選和鑒定，獲得過(guò)表達(dá)?OsCDAP?的轉(zhuǎn)基因株系，并對(duì)其表型進(jìn)行分析，以期更好地解析羧酸酯酶在植物中的功能及為水稻育種研究提供參考。

1?材料與方法

1.1?材料與試劑

植物材料：水稻“中花11”種子由本實(shí)驗(yàn)室保存。

菌株與載體：大腸桿菌DH5α感受態(tài)購(gòu)自Transgen公司（濟(jì)南雨同生物科技有限公司）;農(nóng)桿菌菌種LBA4404及含有目的基因的克隆載體pMD18-T-CDAP由本實(shí)驗(yàn)室保存;植物雙元表達(dá)載體p1301-?bar?-UBI由山東農(nóng)業(yè)大學(xué)溫孚江教授惠贈(zèng)，該載體是以pCAMBIA1301為骨架改造而成，含有除草劑Basta篩選基因和單子葉植物Ubiqutin啟動(dòng)子。

主要試劑：限制性內(nèi)切酶、T4 DNA ligase 以及RNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒PrimeScript??TM??1st Strand cDNA Synthesis Kit （Code： D6110A） 均購(gòu)自TaKaRa公司（大連寶生物）;植物RNA提取試劑盒TransZol Plant （Code： ET101-01） 以及高保真?Taq??DNA Polymerase購(gòu)自Transgen 公司;質(zhì)粒提取試劑盒及凝膠回收試劑盒購(gòu)自博大泰克生物技術(shù)有限公司;熒光定量PCR所用FastStart Universal SYBR Green Master（Rox）（Code：13135900）試劑購(gòu)自羅氏公司;除草劑PPT購(gòu)自Sigma公司;除草劑Basta（有效成分PPT=18%）購(gòu)自日本農(nóng)藥株式會(huì)社;所用引物均由上海英濰捷基公司合成;其余試劑均為進(jìn)口或國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2?植物表達(dá)載體的構(gòu)建及水稻的遺傳轉(zhuǎn)化

用?Pst??I和?Bam?H I分別雙酶切含有目的基因的克隆載體pMD18-T-CDAP以及植物雙元表達(dá)載體p1301-?bar?-UBI，切膠回收目的基因片段和線性化的植物表達(dá)載體，經(jīng)T4 ligase連接，將酶切鑒定正確的陽(yáng)性重組質(zhì)粒命名為p1301-?bar?-?OsCDAP?。構(gòu)建成功的植物雙元表達(dá)載體用熱激法轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌菌株LBA4404中，侵染水稻愈傷組織，用10 mg/L的PPT進(jìn)行3次抗性篩選，經(jīng)誘導(dǎo)及分化獲得轉(zhuǎn)基因組培苗。

將培養(yǎng)基上的轉(zhuǎn)基因苗移栽至土中，待生長(zhǎng)至6葉期，用濃度0.2%Basta溶液涂抹葉片進(jìn)行抗性篩選。篩選出的陽(yáng)性苗，提取葉片DNA，利用基因上游引物OsCDAPF（5′-GCCAAGATAGCAAGAGAGTCC-3′）與植物表達(dá)載體上的Nos（5′- CCCGATCTAGTAACATAGAT-3′）下游引物組合檢測(cè)過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性植株，并經(jīng)多代篩選獲得純合株系。

1.3?RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄

按照TransZol Plant 試劑盒說(shuō)明書(shū)提取水稻組織總RNA，并參照TaKaRa PrimeScript??TM??1st Strand cDNA Synthesis Kit試劑盒說(shuō)明書(shū)將檢測(cè)合格的RNA反轉(zhuǎn)錄合成第一鏈cDNA。

1.4?實(shí)時(shí)熒光定量PCR

根據(jù)GA及BR合成及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因全長(zhǎng)序列設(shè)計(jì)實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物，所用基因名稱及引物序列見(jiàn)表1。反應(yīng)在ABI PRISM 7900 HT（Applied Biosystems）熒光定量PCR儀上進(jìn)行，反應(yīng)體系為20 μL，方法參照FastStart Universal SYBR Green Master（Rox）說(shuō)明書(shū)。反應(yīng)條件：95℃ 10 min;95℃ 10 s，60℃ 20 s，72℃ 20 s，40個(gè)循環(huán)。按照2??-ΔΔCT?法計(jì)算基因的相對(duì)表達(dá)量。

1.5?轉(zhuǎn)基因株系表型分析

成熟期水稻株高：以生長(zhǎng)到抽穗期結(jié)束的水稻為材料，測(cè)定莖基部至穗頂部的長(zhǎng)度;成熟期水稻節(jié)間：以每株水稻主要分蘗為材料，從第一節(jié)開(kāi)始測(cè)定每節(jié)長(zhǎng)度，一共測(cè)量5節(jié);成熟期水稻穗長(zhǎng)：以每株水稻主要分蘗為材料，測(cè)定從穗部節(jié)到穗頂部的長(zhǎng)度;成熟期水稻劍葉夾角：以生長(zhǎng)到抽穗期結(jié)束的水稻為材料，利用量角器測(cè)定劍葉與主莖之間的角度，每株系測(cè)量20株。

1.6?數(shù)據(jù)分析

采用Microsoft Excel 2007進(jìn)行數(shù)據(jù)整理并作圖，利用SPSS 23.0進(jìn)行差異顯著性分析。

2?結(jié)果與分析

2.1?轉(zhuǎn)基因株系的獲得

轉(zhuǎn)基因組培苗經(jīng)繼代、Basta抗性篩選及PCR鑒定，最終獲得過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)基因株系7個(gè)。通過(guò)熒光定量PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)基因株系中基因的表達(dá)量，結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)基因株系中?OsCDAP?基因的表達(dá)量明顯上升，表明?OsCDAP?基因成功轉(zhuǎn)入水稻植株（圖1）。根據(jù)各株系中基因表達(dá)量的差異，選取OE1、OE3和OE5三個(gè)株系，分別命名為OECDAP1、OECDAP2和OECDAP3，其基因表達(dá)量分別為對(duì)照的78.24倍、128.41倍和407.38倍，以這三個(gè)株系為基礎(chǔ)開(kāi)展下一步研究。

2.2???OsCDAP?轉(zhuǎn)基因株系表型分析

對(duì)OECDAP1、OECDAP2、OECDAP3各株系進(jìn)行株高、節(jié)間長(zhǎng)度、穗長(zhǎng)以及劍葉夾角統(tǒng)計(jì)，結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)基因水稻的株高和穗長(zhǎng)與對(duì)照相比沒(méi)有顯著差異。過(guò)表達(dá)水稻植株的第一節(jié)間長(zhǎng)度與對(duì)照植株相比差異顯著，OECDAP1、OECDAP2、OECDAP3第一節(jié)間長(zhǎng)度分別為43.04、41.42、41.56 cm，各為對(duì)照的1.10、1.06、1.07倍;而各轉(zhuǎn)基因株系第五節(jié)間長(zhǎng)度均短于對(duì)照，且過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)基因株系OECDAP1、OECDAP2的長(zhǎng)度與對(duì)照相比差異顯著，分別為2.04 cm和2.19 cm，其他節(jié)間長(zhǎng)度差異不明顯（圖2，圖3）。各過(guò)表達(dá)株系的劍葉夾角均顯著大于對(duì)照，對(duì)照植株的劍葉夾角大部分處于30°到60°之間，最大角度不會(huì)超過(guò)100°，而各轉(zhuǎn)基因株系劍葉夾角大部分處于120°到150°之間，最小角度在100°左右（圖4）。

2.3???OsCDAP?過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)基因株系中GA及BR相關(guān)基因的表達(dá)分析

鑒于GA和BR在節(jié)間伸長(zhǎng)和葉夾角調(diào)控中發(fā)揮重要作用，因此檢測(cè)了各轉(zhuǎn)基因水稻株系中參與GA及BR合成及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)關(guān)鍵基因的表達(dá)變化，發(fā)現(xiàn)：各轉(zhuǎn)基因株系中GA合成相關(guān)基因OsGA3ox-2、OsGA2ox-3、OsGA20ox-1、OsGA20ox-3的表達(dá)與對(duì)照相比變化均不明顯，但OsGA20ox-2和SLR1在各轉(zhuǎn)基因株系中表達(dá)均上調(diào)（圖5）。OsGA20ox-2表達(dá)量上調(diào)最高為對(duì)照3.89倍，SLR1表達(dá)量上調(diào)最高為對(duì)照2倍。BR合成相關(guān)基因D2、D11表達(dá)下調(diào)，而OsBR6ox表達(dá)明顯上調(diào)，表達(dá)量最高為對(duì)照5倍;BR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因表達(dá)上調(diào)，其中OsBAK1表達(dá)上調(diào)明顯，最高為對(duì)照?5.74?倍（圖6）。

3?討論與結(jié)論

節(jié)間是水稻生活力最旺盛的部位，節(jié)間數(shù)目與著生在節(jié)基部的葉片數(shù)目對(duì)應(yīng)，一般有十幾個(gè)不等，但只有地面以上的4～5個(gè)節(jié)間才是株高的主要構(gòu)成部分。課題組前期研究顯示?OsCDAP?在水稻莖中表達(dá)量明顯高于其他組織，顯示該基因可能參與水稻莖稈的伸長(zhǎng)[16]。對(duì)成熟期水稻株高、穗長(zhǎng)及節(jié)間長(zhǎng)度進(jìn)行測(cè)量發(fā)現(xiàn)，該基因的過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)基因株系整體株高及穗長(zhǎng)都略高于或長(zhǎng)于對(duì)照，但是差異不顯著;過(guò)表達(dá)水稻株系的第一節(jié)間長(zhǎng)度明顯長(zhǎng)于對(duì)照，而第五節(jié)間長(zhǎng)度明顯短于對(duì)照，其他節(jié)間長(zhǎng)度差異不明顯。推測(cè)該基因參與水稻節(jié)間發(fā)育過(guò)程，水稻中節(jié)間伸長(zhǎng)過(guò)程受到多個(gè)基因的協(xié)同調(diào)控，許多編碼GA生物合成和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑相關(guān)的基因都與水稻節(jié)間伸長(zhǎng)密切相關(guān)[17]，如水稻GA13氧化酶基因CYP714B1和CYP714B2，能夠降低內(nèi)源GA的生物活性，這兩個(gè)基因的雙突變體倒一節(jié)間相比于對(duì)照更長(zhǎng);EUI1基因參與GA合成的反饋調(diào)控，該基因的缺失突變體可導(dǎo)致水稻頂部節(jié)間異常伸長(zhǎng)[18，19]。利用熒光定量對(duì)GA合成及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因的表達(dá)進(jìn)行測(cè)定發(fā)現(xiàn)，GA合成關(guān)鍵基因OsGA20ox-2和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)關(guān)鍵基因SLR1表達(dá)上調(diào)。研究發(fā)現(xiàn)，OsGA20ox-2能夠催化GA53轉(zhuǎn)化成GA20，該基因的突變能夠?qū)е轮仓曛蠫A53的積累，GA20和有活性的GA1含量降低，從而產(chǎn)生水稻半矮稈表型[20]。在本研究中，過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)基因株系中OsGA20ox-2的表達(dá)上調(diào)能夠提高活性GA1的積累，從而促進(jìn)莖稈伸長(zhǎng)。SLR1編碼一個(gè)DELLA蛋白，是GA信號(hào)傳導(dǎo)的負(fù)調(diào)控因子，也能整合并放大水楊酸（SA）和茉莉酸（JA）介導(dǎo)的防衛(wèi)信號(hào)，在調(diào)控水稻生長(zhǎng)和先天免疫反應(yīng)中發(fā)揮多重作用[21]。研究表明GA的信號(hào)傳導(dǎo)受SLR蛋白出現(xiàn)和消失的控制，即GA達(dá)到一定濃度時(shí)，SLR蛋白消失，GA的信號(hào)得以傳導(dǎo)下去，但GA反過(guò)來(lái)刺激SLR的轉(zhuǎn)錄和翻譯，從而抑制GA的傳導(dǎo)[22]。推測(cè)過(guò)表達(dá)?OsCDAP?基因能夠調(diào)節(jié)活性GA1含量增加從而刺激?SLR?的轉(zhuǎn)錄，使轉(zhuǎn)基因株系中?SLR?基因表達(dá)量升高。對(duì)?OsCDAP?基因是否通過(guò)調(diào)控水稻內(nèi)源GA活性，從而調(diào)控水稻節(jié)間的發(fā)育還需要進(jìn)一步驗(yàn)證。

水稻葉夾角是水稻品種的重要評(píng)價(jià)指標(biāo)，與水稻的生產(chǎn)和抗病性息息相關(guān)，合適的葉夾角可以使植株具有良好的光捕獲能力，提高植株光合作用效率。已知植物激素參與葉夾角的調(diào)控，迄今鑒定到調(diào)控葉夾角的大多數(shù)基因都與BR合成及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑有關(guān)。例如：水稻BR合成關(guān)鍵基因D2和D11的突變體表型均為：葉夾角明顯減小，葉片直立，莖稈短而粗，上部第2節(jié)間明顯比野生型短甚至不伸長(zhǎng)[7，8]。在本研究中D2和D11這兩個(gè)基因表達(dá)均下調(diào)，但是轉(zhuǎn)基因株系葉夾角反而變大，與D2和D11缺失突變體表型相反，進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)另外一個(gè)BR合成的關(guān)鍵基因OsBR6ox表達(dá)明顯上調(diào)，推測(cè)由于該基因的上調(diào)回補(bǔ)了D2和D11的下調(diào)表型，導(dǎo)致葉夾角變大。另外BR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因OsBAK1表達(dá)明顯上調(diào)，OsBAK1是OsBRI1的共受體，研究表明OsBAK1的表達(dá)會(huì)改變水稻多個(gè)重要農(nóng)藝性狀，如：株高、葉夾角、粒型和抗病性[23]。通過(guò)抑制OsBAK1的表達(dá)，可以在不影響生殖生長(zhǎng)的情況下獲得直立葉的表型，OsCDAP基因是否通過(guò)調(diào)控該基因的表達(dá)從而調(diào)控葉夾角的大小，還需要進(jìn)一步驗(yàn)證。

參?考?文?獻(xiàn)：

[1]洪凱，張斌，高陽(yáng)，等.水稻劍葉夾角和單株產(chǎn)量的QTL分析[J].分子植物育種，2015，13（4）：761-768.

[2]李臻，王慶國(guó)，潘教文，等.水稻細(xì)胞色素P450基因OsDWARF48調(diào)控株高的功能分析[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2018，50（11）：1-9.

[3]Sasaki A， Ashikari M， Ueguchi-Tanaka M， et al. Green revolution： a mutant gibberellin-synthesis gene in rice[J]. Nature， 2002， 416（6882）：701-702.

[4]Itoh H， Tatsumi T， Sakamoto T， et al. A rice semi-dwarf gene， ?Tan-Ginbozu（D35）?， encodes the gibberellin biosynthesis enzyme， ent-kaurene oxidase[J]. Plant Molecular Biology， 2004， 54（4）：533-547.

[5]Oikawa T， Koshioka M， Kojima K， et al. ?A role of OsGA20ox1， encoding an isoform of gibberellin 20-oxidase， for regulation of plant stature in rice[J]. Plant Molecular Biology， 2004， 55（5）：687-700.

[6]Tong H， Xiao Y， Liu D， et al.Brassinosteroid regulates cell elongation by modulating gibberellin metabolism in rice[J]. Plant Cell， 2014， 26（11）：4376-4393.

[7]Hong Z， Ueguchi-Tanaka M， Umemura K， et al. A rice brassinosteroid-deficient mutant， ebisu dwarf（d2）， is caused by a loss of function of a new member of cytochrome P450[J]. Plant Cell， 2003， 15（12）：2900-2910.

[8]Tanabe S， Ashikari M， Fujioka S， et al. A novel cytochrome P450 is implicated in brassinosteroid biosynthesis via the characterization of a rice dwarf mutant， dwarf11， with reduced seed length[J]. Plant Cell， 2005， 17（3）：776-790.

[9]Mori M， Nomura T， Ooka H， et al.Isolation and characterization of a rice dwarf mutant with a defect in brassinosteroid biosynthesis[J]. Plant Physiology， 2002， 130（3）：1152-1161.

[10]Qiao S， Sun S， Wang L， et al. The RLA1/SMOS1 transcription factor functions with OsBZR1 to regulate brassinosteroid signaling and rice architecture[J]. Plant Cell， 2017， 29（2）：292-309.

[11]Hirano K， Yoshida H， Aya K， et al.Small organ size 1 and small organ size 2/dwarf and low-tillering form a complex to integrate auxin and brassinosteroid signaling in rice[J]. Molecular Plant， 2017， 10（4）：590-604.

[12]Ko M， Cho J H， Seo H H， et al. Constitutive expression of a fungus-inducible carboxylesterase improves disease resistance in transgenic pepper plants[J]. Planta， 2016， 244（2）：1-14.

[13]Schmeitzl C， Varga E， Warth B， et al. Identification and characterization of carboxylesterases from brachypodium distachyon deacetylating trichothecene mycotoxins[J]. Toxins， 2015， 8（1）：6.

[14]Stuhlfelder C， Lottspeich F， Mueller M J. Purification and partial amino acid sequences of an esterase from tomato[J]. Phytochemistry， 2002， 60（3）：233-240.

[15]劉建光， 趙貴元， 趙俊麗，等. 植物羧酸酯酶的結(jié)構(gòu)、表達(dá)調(diào)控及生物功能研究進(jìn)展[J]. 作物雜志， 2018（3）： 32-36.

[16]李臻，潘教文，王慶國(guó)，等.水稻羧酸酯酶基因?OsCDAP?的克隆及表達(dá)分析[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2018，50（11）：10-15.

[17]Fukao T ， Bailey-Serres J . Submergence tolerance conferred by Sub1A is mediated by SLR1 and SLRL1 restriction of gibberellin responses in rice[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences， 2008， 105（43）：16814-16819.

[18]Magome H， Nomura T， Hanada A， et al.CYP714B1 and CYP714B2 encode gibberellin 13-oxidases that reduce gibberellin activity in rice[J]. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A，2013， 110 （5）：1947-1952.

[19]Luo A， Qian Q， Yin H， et al. EUI1， encoding a putative cytochrome P450 monooxygenase， regulates internode elongation by modulating gibberellin responses in rice.[J].Plant Cell Physiol.，2006， 47（2）：181-191.

[20]Qiao F， Zhao K J. The influence of RNAi targeting of OsGA20ox2 gene on plant height in rice[J]. Plant Molecular Biology Reporter， 2011， 29（4）：952-960.

[21]De Vleesschauwer D， Seifi S， Filipe O， et al. The DELLA protein SLR1 integrates and amplifies salicylic acid- and jasmonic acid-dependent innate immunity in rice[J]. Plant Physiology， 2016， 170（3）：1831-1847

[22]Hirano K， Kouketu E， Katoh H， et al. The suppressive function of the rice DELLA protein SLR1 is dependent on its transcriptional activation activity[J].The Plant Journal， 2012， 71（3）：443-453.

[23]Zuo S， Zhou X， Chen M， et al. OsSERK1 regulates rice development but not immunity to Xanthomonas oryzae pv. oryzae or Magnaporthe oryzae[J]. Journal of Integrative Plant Biology， 2014， 56（12）：1179-1192.