王彩玲，王俊生，候新芳，周 靜，闞隨隨

0 引言

胃癌是我國發(fā)病率和死亡率比較高的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，根治性手術(shù)是唯一有治愈可能的措施[1]。胃癌細(xì)胞屬于對(duì)化療藥物相對(duì)敏感的一類惡性腫瘤細(xì)胞，含鉑類化療方案是目前臨床使用最為廣泛的標(biāo)準(zhǔn)方案之一，但是仍有部分患者會(huì)發(fā)生繼發(fā)性耐藥[2]。針對(duì)目前胃癌的治療現(xiàn)狀，篩選出具有耐藥風(fēng)險(xiǎn)的高危患者，增強(qiáng)和重建胃癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，提高化療療效，改善患者預(yù)后，是胃癌治療領(lǐng)域一直關(guān)注的熱點(diǎn)。化療耐藥機(jī)制極為復(fù)雜，與上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition，EMT)[3]的關(guān)系研究一直是腫瘤領(lǐng)域的熱點(diǎn)話題。有研究證實(shí)，發(fā)生EMT的細(xì)胞表現(xiàn)出較強(qiáng)的化療藥物抗性，這可能與某些信號(hào)通路的異常活化有關(guān)，促使EMT轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)上調(diào)，從而促使腫瘤細(xì)胞發(fā)生EMT，產(chǎn)生耐藥性[4]。E盒結(jié)合鋅指蛋白(Zinc-finger E-box-binding protein 2，ZEB2)屬于鋅指轉(zhuǎn)錄因子Snail超家族成員之一，通過抑制細(xì)胞角蛋白、E-cadherin等因子的轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)EMT的發(fā)生[5]。此外，miRNAs也是參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞耐藥性的重要因子[6]，有望成為精準(zhǔn)醫(yī)療時(shí)代下惡性腫瘤的診斷和干預(yù)靶點(diǎn)。鑒于miRNA的內(nèi)源性、保守型、穩(wěn)定性特點(diǎn)，其無疑是化療療效預(yù)測(cè)的潛在良好指標(biāo)，亦是逆轉(zhuǎn)化療耐藥的有效靶點(diǎn)。因此，本項(xiàng)研究通過建立順鉑(Cisplatin，DDP)耐藥性SGC7901細(xì)胞株模型，擬探討miR-203和ZEB2的相互調(diào)控作用以及對(duì)胃癌耐藥性細(xì)胞株的影響，從而為逆轉(zhuǎn)胃癌細(xì)胞順鉑耐藥性的研究提供新的突破口。

1 材料與方法

1.1 受試細(xì)胞來源和培養(yǎng) 人胃癌順鉑耐藥細(xì)胞株SGC7901/DDP及其親本非耐藥的胃癌細(xì)胞株SGC7901購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫。將細(xì)胞株接種至含有10%胎牛血清、100 U/ml青霉素-鏈霉素雙抗的RPMI1640培養(yǎng)基中，置于37 ℃、5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。0.25%胰蛋白酶溶液消化傳代，2～3 d傳代1次。

1.2 主要試劑 注射用順鉑購自山東齊魯制藥，用前用生理鹽水倍比稀釋至實(shí)驗(yàn)濃度；RPMI1640細(xì)胞培養(yǎng)基、胰蛋白酶-EDTA細(xì)胞消化液(0.25%)(美國Gibco公司)；胎牛血清(FBS)和鏈霉素-青霉素雙抗(美國Thermo Fisher公司)；噻唑藍(lán)(monotetrazolium，MTT)、Trizol試劑、細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑LipofectamineTM2000、Opti-MEM、SuperScript RT kit(美國Invitrogen公司)；mirPremier?microRNA Isolation Kit購自日本Takara公司；SYBR DDPeen PCR master Mix(美國Applied Biosystems公司)；Annexin V-FITC細(xì)胞凋亡試劑盒(上海碧云天生物技術(shù)研究所)；雙熒光素酶報(bào)告基因載體pisCHECK-2(美國Promega公司)；上皮型鈣黏附素(Epithelial cadherin，E-cadherin)抗體、Snail抗體(美國Abcam公司)；ZEB2多克隆抗體(美國Cell Signaling Technology公司)；實(shí)驗(yàn)用水為超純水，其他試劑均為國產(chǎn)分析純。miR-203模擬物(mimics)及陰性對(duì)照(NC)序列購自上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司；ZEB2 siRNA及陰性對(duì)照(si-NC)由上海吉?jiǎng)P基因化學(xué)有限公司合成。PCR引物自行設(shè)計(jì)，并由上海吉?jiǎng)P基因化學(xué)有限公司合成。

1.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染和分組 取對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的SGC-7901/DDP細(xì)胞，培養(yǎng)在6孔板中，根據(jù)LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染試劑盒說明書，將miR-203 mimics和無關(guān)系列轉(zhuǎn)染至SGC-7901/DDP細(xì)胞中，置于熒光倒置顯微鏡下觀察熒光染色，以判斷感染率。提取細(xì)胞RNA，驗(yàn)證miR-203表達(dá)情況及轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染成功后用1 μg/ml嘌呤霉素篩選2～3周，耐嘌呤霉素的細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞分組：SGC-7901組、SGC-7901/DDP組、miR-203mimics轉(zhuǎn)染組(miR-203組)和陰性對(duì)照組(NC組)。采用同樣的轉(zhuǎn)染方法將si-ZEB2和si-NC序列轉(zhuǎn)染至SGC-7901/DDP細(xì)胞，將細(xì)胞分為si-ZEB2組和陰性對(duì)照組(si-NC組)。

1.4 細(xì)胞活力測(cè)定(MTT法) 將對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的SGC-7901細(xì)胞或SGC-7901/DDP細(xì)胞(1×104個(gè)/孔)單層接種至96孔板中，每組設(shè)置8個(gè)平行孔，分別加5、10、20、40、80、160 μmol/L(終濃度)DDP，培養(yǎng)48 h后，加入MTT，孵育4 h后，置于450酶標(biāo)儀上，檢測(cè)波長(zhǎng)為570 nm處的吸光光度值(OD值)，計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率：增殖抑制率(%)=1-OD值受試組/OD值對(duì)照組×100%。計(jì)算半數(shù)抑制濃度(50% inhibition concentration，IC50)以及SGC-7901/DDP細(xì)胞的耐藥指數(shù)(Resistance index，RI)。RI=IC50(SGC-7901/DDP)/IC50(SGC-7901)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值。

1.5 Annexin V/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡 收集對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的細(xì)胞，洗滌3次后，3 000 r/min離心5 min，離心半徑10 cm，棄上清；加入500 μl Binding Buffer重懸，加入Annexin V 5 μl，避光孵育15 min；上機(jī)前加入PI 5 μl，避光孵育15 min；上機(jī)檢測(cè)。所有操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作進(jìn)行。采用流式細(xì)胞儀(Ex=488 nm，Em=530 nm)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.6 熒光素酶分析 設(shè)計(jì)合成ZEB2-3′UTR序列及突變序列，并插入pGL3熒光素酶報(bào)告載體的XbaI和FseI位點(diǎn)以構(gòu)建熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒。取對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的人上皮細(xì)胞HEK293T細(xì)胞5×105個(gè)，接種于6孔板中，將pisCHECK-2/ZEB2 WT 3′-UTR、pisCHECK-2/ZEB2 MUT 3′-UTR和miR-203 mimics，采用Promega GloMaxTM20/20發(fā)光檢測(cè)儀檢測(cè)熒光素酶活性。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.7 RNA提取及實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR) 采用TRIzol法提取細(xì)胞總RNA。采用凝膠電泳檢測(cè)RNA分子量；采用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)RNA濃度。根據(jù)試劑盒說明書操作進(jìn)行。進(jìn)一步采用mirPremierTMmicroRNA Isolation Kit分離miRNAs，根據(jù) SuperScript RT kit說明書合成cDNA。按照SYBR DDPeen PCR master Mix 說明書進(jìn)行qRT-PCR。冰浴中配制20 μl PCR反應(yīng)體系，95 ℃ 10 min，95 ℃ 10 s，60 ℃ 30 s，循環(huán)40次。根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫獲得的資料設(shè)計(jì)引物。引物序列如下：miR-203(F：5′-GTATTCGCACTGGATACGACCGACC-3′，R：5′-TGCGCTAACAGTCTACAGCCA-3′)；ZEB2(F：5′-CAGCAAACCAACAATGCCGA-3′；R：5′-GATCTGCGACCACACCATGA-3′)。根據(jù)使用說明調(diào)整基線，將閾值設(shè)定在熒光值對(duì)數(shù)圖的線性部分，從軟件中讀取Ct值。ΔCt=樣品Ct均值-內(nèi)參Ct均值，ΔΔCt=ΔCt-(隨機(jī)陰性對(duì)照樣品Ct均值-內(nèi)參Ct均值)，以2-ΔΔCt表示目的基因mRNA相對(duì)表達(dá)量。

1.8 免疫印跡(Western blot)法檢測(cè)蛋白表達(dá)量 收集對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的細(xì)胞1×1010個(gè)，加入200 μl細(xì)胞裂解液，提取總蛋白；BCA法檢測(cè)蛋白濃度。蛋白樣品凝膠電泳；轉(zhuǎn)膜；用5%的脫脂奶粉封閉60 min；加入E-cadherin抗體(1∶1 000稀釋)、Snail抗體(1∶200稀釋)、ZEB2抗體(1∶500稀釋)孵育；加入二抗(1∶5 000稀釋)孵育；按照ECL顯影試劑盒說明書進(jìn)行顯影操作；采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)膜上的蛋白表達(dá)條帶，采用FluorChem FC3凝膠成像數(shù)碼分析系統(tǒng)進(jìn)行定量分析，以積分光密度(IOD)表示灰度值。

2 結(jié)果

2.1 MTT法檢測(cè)SGC-7901/DDP細(xì)胞對(duì)DDP的耐藥指數(shù) 經(jīng)MTT法檢測(cè)，隨著DDP作用濃度的增加，DDP對(duì)SGC-7901細(xì)胞增殖活性的抑制率明顯高于SGC-7901/DDP細(xì)胞，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。DDP對(duì)SGC-7901、SGC-7901/DDP細(xì)胞的IC50分別為18.37、94.68 μmol/L。SGC-7901/DDP的RI為5.15±0.27，說明SGC-7901/DDP細(xì)胞耐藥性良好，可用于后續(xù)試驗(yàn)。見圖1。

圖1MTT法檢測(cè)DDP對(duì)SGC-7901/DDP細(xì)胞和SGC-7901細(xì)胞增殖活性的差異(n=8)

2.2 SGC-7901和各組SGC-7901/DDP細(xì)胞miR-203和ZEB2表達(dá)量 SGC-7901/DDP細(xì)胞中miR-203表達(dá)量明顯低于SGC-7901細(xì)胞，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。經(jīng)miR-203 mimics轉(zhuǎn)染后，miR-203組SGC-7901/DDP細(xì)胞miR-203表達(dá)量明顯高于SGC-7901組、SGC-7901/DDP組和NC組，同時(shí)，si-ZEB2組miR-203的表達(dá)量較SGC-7901組、SGC-7901/DDP組和si-NC組SGC-7901/DDP細(xì)胞也明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。另外，沉默SGC-7901/DDP細(xì)胞ZEB2基因表達(dá)后，ZEB2 mRNA表達(dá)量降低，而miR-203表達(dá)量明顯升高，與Si-NC組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.3 miR-203 mimics慢病毒轉(zhuǎn)染效率以及qRT-PCR驗(yàn)證 經(jīng)慢病毒轉(zhuǎn)染后，SGC-7901/DDP細(xì)胞出現(xiàn)GFP綠色熒光，則表示轉(zhuǎn)染成功。miR-203 mimics慢病毒滴度為1×108PFU/ml時(shí)，細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率為77.35%±2.46%。見圖2。

2.4 DDP對(duì)miR-203 mimics轉(zhuǎn)染細(xì)胞株增殖活性的影響 重復(fù)測(cè)量的方差分析結(jié)果顯示，SGC-7901/DDP組、NC組和miR-203組細(xì)胞增殖抑制率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=489.53，P<0.05)；

表1 各組細(xì)胞中miR-203和ZEB2的表達(dá)量

注：與SGC-7901組比較，aP<0.05；與SGC-7901/DDP組比較，bP<0.05；與NC組比較，cP<0.05；與miR-203組比較，dP<0.05；與Si-NC組比較，eP<0.05

圖2 顯微鏡下觀察miR-203 mimics轉(zhuǎn)染效果(200×)

隨著藥濃度的增加，各組細(xì)胞增殖活性抑制率也逐漸增加。另外，相同濃度條件下，DDP對(duì)miR-203組SGC-7901/DDP細(xì)胞增殖活性的抑制率明顯高于SGC-7901/DDP組和NC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。DDP對(duì)SGC-7901/DDP組、NC組和miR-203組細(xì)胞的IC50分別為92.81、94.35、22.68 μmol/L。見圖3。

圖3MTT法檢測(cè)DDP對(duì)SGC-7901/DDP組、NC組、miR-203組SGC-7901/DDP細(xì)胞增殖活性的影響

2.5 Annexin V/PI雙染法分析SGC-7901/DDP細(xì)胞凋亡情況 經(jīng)FCM法檢測(cè)，25 μmol/L濃度的DDP分別作用于SGC-7901組、NC組和miR-203組細(xì)胞24 h后，細(xì)胞凋亡率分別為6.38%±1.55%、5.69%±1.76%、23.14%±2.03%，DDP對(duì)miR-203組細(xì)胞凋亡的促進(jìn)作用明顯高于SGC-7901/DDP組和NC組細(xì)胞，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖4。

2.6 沉默ZEB2基因的表達(dá)對(duì)SGC-7901/DDP細(xì)胞增殖活性的影響 重復(fù)測(cè)量的方差分析結(jié)果顯示，SGC-7901/DDP組、Si-NC組和Si-ZEB2組細(xì)胞增殖抑制率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=243.17，P<0.05)；隨著藥物濃度的增加，各組細(xì)胞增殖活性抑制率也逐漸增加。另外，相同濃度條件下，DDP對(duì)Si-ZEB2組SGC-7901/DDP細(xì)胞增殖活性的抑制率明顯高于SGC-7901/DDP組和Si-NC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。DDP對(duì)SGC-7901/DDP組、Si-NC組和Si-ZEB2組細(xì)胞的IC50分別為94.53、97.89、29.76 μmol/L。見圖5。

圖4 FCM法檢測(cè)DDP對(duì)SGC-7901/DDP組、NC組、miR-203組細(xì)胞凋亡活性的影響

圖5 MTT法檢測(cè)DDP對(duì)SGC-7901/DDP組、Si-NC組、Si-ZEB2組SGC-7901/DDP細(xì)胞增殖活性的影響

2.7 過表達(dá)miR-203或沉默ZEB2表達(dá)對(duì)EMT通路相關(guān)蛋白的調(diào)節(jié) 經(jīng)Western blot法檢測(cè)，miR-203組SGC-7901/DDP細(xì)胞Snail蛋白表達(dá)量明顯低于SGC-7901/DDP組和NC組，而E-cadherin蛋白表達(dá)量高于SGC-7901/DDP組和NC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。另外，沉默SGC-7901/DDP細(xì)胞ZEB2基因表達(dá)后，E-cadherin蛋白表達(dá)量升高，而Snail蛋白的表達(dá)量明顯降低，與Si-NC組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。表2。

表2 各組細(xì)胞中E-cadherin和Snail蛋白的表達(dá)量

注：與SGC-7901組比較，aP<0.05；與SGC-7901/DDP組比較，bP<0.05；與NC組比較，cP<0.05；與miR-203組比較，dP<0.05；與Si-NC組比較，eP<0.05

2.8 雙熒光素酶基因報(bào)告分析 通過靶基因預(yù)測(cè)數(shù)據(jù)庫TargetScan、microrna和miRanda篩選，發(fā)現(xiàn)ZEB2基因結(jié)合位點(diǎn)與miR-203互補(bǔ)，可能是miR-203下游的靶基因。通過構(gòu)建含有靶基因野生型或突變型3′-UTR的熒光酶報(bào)告基因質(zhì)粒來檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)源性miR-203對(duì)預(yù)測(cè)靶基因的抑制作用。結(jié)果顯示，克隆了野生型ZEB2 3′-UTR的基因報(bào)告質(zhì)粒同miR-203 mimics共轉(zhuǎn)染之后，熒光酶活性被明顯減弱(P<0.05)，而將突變型ZEB2 3′-UTR的基因報(bào)告質(zhì)粒與miR-203 mimics共轉(zhuǎn)染之后，其并沒有對(duì)熒光素酶活性產(chǎn)生明確影響。提示ZEB2可能是miR-203的下游靶基因。見圖6、圖7。

圖6 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果

圖7 ZEB2 3′-UTR與miR-203 mimics雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果

3 討論

在胃癌綜合治療中，以鉑類藥物為基礎(chǔ)的化療是進(jìn)展期胃癌的標(biāo)準(zhǔn)一線治療方案[7]，但是隨著化療次數(shù)的增加，部分腫瘤細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生順鉑耐藥性，從而導(dǎo)致治療失敗。鉑類藥物(包括順鉑)的耐藥機(jī)制復(fù)雜，包括細(xì)胞DNA損傷與錯(cuò)配修復(fù)能力增強(qiáng)，靶點(diǎn)表達(dá)異常、藥物進(jìn)入靶細(xì)胞通路受阻等[7]。在實(shí)際臨床中，至少有一半的患者會(huì)對(duì)DDP產(chǎn)生原發(fā)性或繼發(fā)性耐藥。因此，尋找逆轉(zhuǎn)DDP耐藥的作用靶點(diǎn)，是進(jìn)行個(gè)體化治療、提高患者預(yù)后的關(guān)鍵。

在本項(xiàng)研究中，我們自上海細(xì)胞庫購入胃癌耐藥細(xì)胞株SGC-7901/DDP，并通過MTT法證實(shí)其對(duì)DDP的耐藥性。既往已有研究證實(shí)，miR-203在膀胱癌[8]、食管癌[9-10]等多種腫瘤組織中呈低表達(dá)或陰性表達(dá)，而且季超等[11]研究也證實(shí)，miR-203與胃癌患者的預(yù)后密切相關(guān)。我們?cè)谇捌谡{(diào)研工作中發(fā)現(xiàn)，ZEB2可能是miR-203的下游靶基因。而ZEB家族成員與EMT的關(guān)系早已被眾多研究所證實(shí)[11]，因此，我們考慮miR-203是否與SGC-7901細(xì)胞耐藥性有關(guān)。miRNAs作為一類非編碼小分子調(diào)控基因，可對(duì)靶基因轉(zhuǎn)錄或翻譯過程進(jìn)行調(diào)節(jié)，從而影響下游蛋白的表達(dá)量[12]。而這些靶基因若與藥物敏感性有關(guān)，則可能通過上調(diào)或下調(diào)miRNAs的表達(dá)進(jìn)而影響藥物抗腫瘤作用[13]。因此，我們通過細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法上調(diào)SGC-7901細(xì)胞miR-203的表達(dá)，確定其轉(zhuǎn)染率達(dá)到70%以上后，進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。加入DDP干預(yù)后，轉(zhuǎn)染組SGC-7901/DDP細(xì)胞增殖和遷移活性明顯受到抑制，而且凋亡活性大大增加，表明miR-203在胃癌細(xì)胞中屬于功能性基因，上調(diào)miR-203的表達(dá)量可明顯增加SGC-7901/DDP耐藥細(xì)胞株對(duì)DDP的敏感性。隨后，我們又通過雙熒光素酶基因報(bào)告分析和qRT-PCR法檢測(cè)，證實(shí)上調(diào)miR-203的表達(dá)可以抑制ZEB2的表達(dá)；同時(shí)也發(fā)現(xiàn)EMT相關(guān)蛋白，包括E-cadherin和Snail的表達(dá)均受到影響，與SGC-7901/DDP組細(xì)胞相比，miR-203組細(xì)胞E-cadherin的表達(dá)量增加，且Snail蛋白的表達(dá)量降低，說明miR-203的直接靶點(diǎn)是ZEB2，通過ZEB2抑制EMT進(jìn)程。E-cadherin是維持上皮細(xì)胞極性最主要的細(xì)胞黏附分子[14]，通過與β-catenin結(jié)合形成復(fù)合物，與肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架連接，形成細(xì)胞間黏附，從而阻止細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移[15]。而Snail也屬于影響EMT進(jìn)程的轉(zhuǎn)錄因子之一[16]，通過與多種miRNAs形成雙向負(fù)性調(diào)節(jié)，對(duì)腫瘤細(xì)胞EMT進(jìn)程有更強(qiáng)烈的效應(yīng)[16]。在本項(xiàng)研究中，上調(diào)SGC-7901/DDP耐藥細(xì)胞株miR-203的表達(dá)，使得與EMT進(jìn)程有關(guān)的E-cadherin蛋白表達(dá)量升高，而Snail蛋白表達(dá)量降低，說明EMT進(jìn)程受到明顯抑制。

另外，在本項(xiàng)研究中，我們還采用了RNA干擾技術(shù)沉默SGC-7901/DDP耐藥細(xì)胞中ZEB2基因的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-203表達(dá)量也相應(yīng)增加。說明miR-203在靶向調(diào)控ZEB2時(shí)，ZEB2基因也在負(fù)反饋調(diào)節(jié)miR-203的表達(dá)。并且沉默ZEB2基因的表達(dá)，同樣也可提高SGC-7901/DDP細(xì)胞對(duì)DDP的敏感性，因此，與Snail/miRNAs系統(tǒng)一樣[17]，ZEB2可能與miR-203形成雙向負(fù)性調(diào)節(jié)通路，從而增強(qiáng)其對(duì)EMT進(jìn)程的效應(yīng)[12]。但是ZEB2并非是miR-203唯一的靶點(diǎn)，同樣miR-203也不是ZEB2唯一的靶基因[18]，而具體的作用機(jī)制和調(diào)控網(wǎng)絡(luò)尚處于研究中。

綜上所述，上調(diào)miR-203表達(dá)或沉默ZEB2的表達(dá)均可顯著提高SGC-7901/DDP細(xì)胞株對(duì)DDP的敏感性，并通過上調(diào)E-cadherin黏附因子的表達(dá)和抑制Snail轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，最終抑制EMT進(jìn)程。因此我們認(rèn)為，miR-203可與ZEB2啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合，兩者都有望成為預(yù)測(cè)胃癌對(duì)含鉑類化療方案敏感性的重要參考指標(biāo)，同時(shí)可考慮其作為逆轉(zhuǎn)化療藥物耐藥靶點(diǎn)的潛力，為臨床個(gè)體化治療提供新的思路。