林文耀，宋慶慶，劉玉梅，王 凱，劉國民，黃 超

（金宇保靈生物藥品有限公司，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010030）

自2011年以來，新流行的豬偽狂犬?。≒R）變異毒株毒力增強，對豬的致病力增強，主要表現(xiàn)為豬群gE抗體陽性率顯著升高，發(fā)病妊娠母豬流產(chǎn)，產(chǎn)弱仔、死胎；新生仔豬死亡率高，同時出現(xiàn)角弓反張等神經(jīng)癥狀，病死率在10%~50%。病毒的分離鑒定表明疫病由變異偽狂犬病病毒（PRV）毒株引起，并且新流行毒株處于獨立的進化分支，這對PR的防控提出了嚴峻挑戰(zhàn)[1-3]。2012年，我國首次頒布了《國家中長期動物疫病防治規(guī)劃（2012—2020年）》，針對豬偽狂犬病的防控明確提出種豬場在2020年必須維持gE抗體陰性。為掌握現(xiàn)有的防疫控制體系下我國豬場偽狂犬病野毒感染的狀況，有效控制和凈化豬偽狂犬病，筆者對2018年1—12月中國24個省市358個規(guī)模化豬場不同豬群的偽狂犬病野毒血清流行病學進行了全面調查與系統(tǒng)分析，現(xiàn)將結果報告如下。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

1.1.1 采樣方法 樣品采用橫斷面采樣方法，分別采集公豬、后備豬、不同胎次生產(chǎn)母豬以及不同生長階段商品豬群的血液，分離血清，送金宇保靈國家工程實驗室檢測。

1.1.2 血清樣品 血清樣品采集時間為2018年1—12月，共36 565份，其中種豬群血清樣品18 256份，不同周齡仔豬和生長育成豬群樣品18 309份。樣品來自我國24個省市358個規(guī)?；i場，包括種豬場和商品育成豬場，記錄各豬場各主要疫病免疫程序，方便對結果進行分析。

1.1.3 檢測試劑 豬偽狂犬病病毒野毒抗體檢測采用gE-ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）鑒別診斷試劑盒。

1.2 試驗方法

阻斷ELISA法。操作方法以及結果判定參照試劑盒說明書進行。

1.3 結果判定

結果判定參照試劑盒說明書進行。檢測的血清樣品全部來自使用gE基因缺失疫苗免疫的豬場，所以檢測到gE抗體陽性豬可以判斷該豬場被偽狂犬病野毒感染。在進行豬場結果判定和統(tǒng)計時，只要豬場有一個樣品為陽性，則該場判定為偽狂犬病野毒陽性場。

2 結果

2.1 2018年規(guī)?；i場偽狂犬病野毒gE抗體檢測結果

在2018年所檢測的358個規(guī)?；i場中，260個豬場為偽狂犬病野毒陽性，豬場陽性率為72.63%；總血清樣品數(shù)36 565份，11 282份為陽性，樣品陽性率為30.85%（表1）?？傮w而言，不同地區(qū)的豬場陽性率均居高不下，24個送檢省市中，有21個省市豬場陽性率≥50%。但是，不同地區(qū)的陽性豬場樣品陽性率卻差異較大，24個送檢省市中，只有3個省市樣品陽性率≥50%。這種差異可能是由于不同地區(qū)對偽狂犬病的防控重視程度和生產(chǎn)管理水平不同造成的。

表1 2018年不同地區(qū)規(guī)?；i場偽狂犬病野毒gE抗體檢測結果

按照地區(qū)統(tǒng)計，七大區(qū)域均有豬偽狂犬病野毒感染，其中華東豬場陽性率和樣品陽性率均為最高，分別為93.85%和49.56%（表2），提示華東地區(qū)豬偽狂犬病防控的壓力更大。

表2 2018年不同地區(qū)規(guī)?；i場偽狂犬病野毒gE抗體陽性率

2.2 2018年偽狂犬病野毒陽性豬場不同類別和階段種豬的陽性率

由表3可知，不同類別和階段的種豬都存在豬偽狂犬病野毒感染。生產(chǎn)母豬的陽性率高于公豬和后備母豬。gE抗體陽性率與母豬胎次密切相關，胎次越高陽性率越高，表明新進群的母豬隨著時間的推移，被感染的幾率提高，提示豬場內(nèi)偽狂犬病野毒的循環(huán)感染壓力較大。

2.3 2018年偽狂犬病野毒陽性豬場不同生長階段肥育豬gE抗體陽性率

由表4可知，肥育豬從16周開始gE抗體陽性率開始上升，從16周到24周由21.67%升到40.32%，顯然由偽狂犬病野毒感染所致，因為母源抗體一般維持約4個月[4]。肥育豬后期出現(xiàn)呼吸道疾病，日增重不理想等現(xiàn)象，這與偽狂犬病野毒感染肥育豬后表現(xiàn)的臨床癥狀一致。

表3 2018年偽狂犬病野毒陽性豬場不同類別和階段種豬gE抗體陽性率

表4 2018年偽狂犬病野毒陽性豬場不同生長階段肥育豬gE抗體陽性率

3 分析與討論

3.1 豬偽狂犬病仍是我國養(yǎng)豬業(yè)的主要傳染病

本次調查持續(xù)1年。調查樣品來自我國24個省市358個規(guī)?；i場，共36 565份，是目前國內(nèi)調查范圍較廣的規(guī)模化豬場偽狂犬病野毒感染血清流行病學調查。結果表明豬偽狂犬病在規(guī)模化豬場仍普遍存在，野毒感染較為嚴重。七大區(qū)域均存在偽狂犬病野毒的感染，其中華東豬場陽性率和樣品陽性率均為最高，分別為93.85%和49.56%。

國內(nèi)相關學者也對偽狂犬病野毒血清流行病學作了相關調查。胡睿銘等對9個省市2011—2013年692份血清樣品進行gE抗體檢測，結果顯示血清樣品陽性率為67.05%（464/692）[5]。鄒敏等對來自18個省市2012—2013年393個送檢豬場共14 801份血清樣品進行檢測，調查結果顯示豬場陽性率為44.02%（173/393），樣品陽性率為 16.13%（2 388/14 801），并發(fā)現(xiàn)陽性率有上升的趨勢[6]。解偉濤在2014年第一季度的檢測結果表明，血清樣品gE抗體陽性率為37.92%（1 244/3 281），比 2013年上升 6.6%；豬場陽性率為 89.9%（124/138），比 2013 年上升 6.3%[7]。

不同的調查研究產(chǎn)生了不盡相同的結果，可能是采樣地區(qū)、采樣階段、采樣數(shù)量不同而產(chǎn)生差異，但是豬偽狂犬病的發(fā)生有維持上升趨勢的結論是一致的，提示豬偽狂犬病在未來一段時間仍是中國養(yǎng)豬業(yè)的主要傳染病，豬偽狂犬病的預防和凈化不容樂觀。

3.2 種豬帶毒是豬偽狂犬病持續(xù)流行的重要原因

由表3可知，生產(chǎn)母豬gE抗體陽性率與胎次密切相關，胎次越高陽性率越高，提示豬場內(nèi)野毒的循環(huán)感染壓力較大，可能與公豬感染野毒有關，場內(nèi)母豬人工授精時受到污染野毒的精液感染，隨著人工授精的次數(shù)增加，感染的幾率也隨之增加，因為公豬精液可以攜帶偽狂犬病野毒。調查結果也表明，公豬確實存在豬偽狂犬病野毒的感染，比例為25.77%。后備母豬gE抗體陽性率為20.46%，提示補充的陽性后備母豬可能是豬場偽狂犬病反復發(fā)生的原因之一，提醒引種時必須進行gE抗體的檢測，確保引進的種豬為gE抗體陰性，同時做好生物安全隔離區(qū)，保證后備母豬更新不受偽狂犬病野毒的感染，導致種豬的帶毒率居高不下。

預防種豬感染偽狂犬病野毒是偽狂犬病防控和凈化的關鍵問題。首先，要保證更新的公豬和后備母豬偽狂犬病野毒陰性，引種前進行gE抗體檢測，確保引進的種豬為陰性豬。做好隔離等生物安全措施，穩(wěn)定后首先免疫偽狂犬病gE基因缺失疫苗，轉生產(chǎn)前免疫兩次。為了提高中和抗體水平，提高抗感染能力，可免疫高效的偽狂犬病活疫苗，如2011年新分離的毒株C株。C株可有效提高中和抗體滴度，減少抗體離散度。兩次免疫后產(chǎn)生的中和效價高于活疫苗+滅活疫苗+滅活疫苗的免疫組合方案產(chǎn)生的中和抗體，可能與疫苗毒株的免疫原性，疫苗的生產(chǎn)工藝和抗原含量、佐劑等有關系，提示C株可以作為防控豬偽狂犬病的高效疫苗[9]，有效簡化現(xiàn)有“活+死”免疫組合方案，簡化豬場免疫程序，降低疫苗成本。然后通過gE抗體篩查，淘汰陽性的生產(chǎn)公豬，保證生產(chǎn)公豬為陰性。因為偽狂犬病病毒可通過精液傳播，通過人工授精快速傳播[8]。其次，加強種豬免疫強度，年普免4次，可以有效減少種豬的帶毒和排毒時間。最后，生物安全仍是很重要的防線。從表3我們得知，不同胎次的生產(chǎn)母豬都存在一定的野毒感染比例，為減少生產(chǎn)公豬的感染風險，必須禁止查情公豬返回公豬站，防止查情公豬成為偽狂犬病野毒傳播的媒介。

3.3 重視生長肥育豬的偽狂犬病疫苗免疫，減少肥育后期的感染

由表4可知，肥育豬gE抗體陽性率從16周開始上升。一般來講，gE母源抗體維持時間在120 d左右[4]。如沒有野毒的感染，隨著母源抗體的消退，16周開始gE抗體陽性率應該出現(xiàn)下降，不降反升說明在13~16周這個階段有偽狂犬病野毒的感染導致陽性率的上升，同現(xiàn)實生產(chǎn)相吻合?，F(xiàn)實生產(chǎn)很多豬場只重視母豬的免疫，往往忽視仔豬的免疫。有的豬場只免疫母豬，不免疫仔豬。有的豬場母豬免疫進口疫苗，仔豬免疫國產(chǎn)疫苗，對仔豬偽狂犬病疫苗的選擇也比較隨意。有的豬場仔豬只在出生滴鼻免疫一次。隨著母源抗體的消退，肥育豬后期缺乏保護力，感染偽狂犬病野毒，在生產(chǎn)上往往出現(xiàn)呼吸道疾病，繼發(fā)細菌感染，如傳染性胸膜肺炎等，抗生素治療效果不明顯。此外，感染的肥育豬進入后備豬群，形成循環(huán)感染，這也是部分豬場偽狂犬病持續(xù)存在、難于凈化的重要原因。據(jù)我們的經(jīng)驗，在偽狂犬病防控壓力較大的現(xiàn)狀下，仔豬滴鼻一次和兩次肌注偽狂犬病活疫苗，可以有效維持陽性場的生產(chǎn)穩(wěn)定，減少肥育豬的感染機會，進而減少豬場的病毒載量（對一點式生產(chǎn)的豬場尤為重要），陽性場獲得陰性仔豬也是有可能的。

3.4 豬偽狂犬病的防控

本次的調查結果表明豬偽狂犬病在未來一段時間仍是中國養(yǎng)豬業(yè)的重要傳染病。結合檢測豬場免疫程序的分析，發(fā)現(xiàn)肥育后期有偽狂犬病野毒的再感染通常執(zhí)行類似的免疫程序：小豬初生滴鼻，45 d首免，70 d二免。建議每個豬場根據(jù)檢測結果制定自己合適的免疫程序，考慮母源抗體的干擾作用及明確場內(nèi)的感染時間點，畢竟陽性場和陰性場的免疫程序是有區(qū)別的。

An等在免疫Bartha K61疫苗后仍然暴發(fā)豬偽狂犬病的豬場分離到豬偽狂犬病毒變異株[1]，說明該疫苗株對變異株不能提供完全的保護，可能是變異株的gB抗原表位發(fā)生了變化，導致了免疫失敗[10]。本次調查也發(fā)現(xiàn)免疫Bartha K61疫苗的規(guī)模化豬場gE抗體陽性率居高不下，提示變異株的出現(xiàn)對現(xiàn)有疫苗的保護效果提出了巨大的挑戰(zhàn)。在這種流行趨勢下，選用優(yōu)質高效的偽狂犬病gE基因缺失的變異株活疫苗，區(qū)別自然感染或疫苗免疫的豬只，制定科學的免疫程序是預防和控制豬偽狂犬病的主要手段。