侯震濤 冀子中 鄔萬新等

[摘要] 目的 探究胃癌組織中Lgr5和β-catenin蛋白表達(dá)的差別及相關(guān)性。 方法 選擇2012年1月～2017年12月間嘉興市第一醫(yī)院80例胃癌患者組織病理標(biāo)本作為觀察組，30例淺表性胃炎患者組織病理標(biāo)本和30例萎縮性胃炎患者組織病理標(biāo)本分別作為對照組，采用免疫組化法檢測Lgr5和β-catenin蛋白的表達(dá)。 結(jié)果 Lgr5和β-catenin蛋白在觀察組中的表達(dá)率高于對照組，三者之間存在顯著差異（χ2=12.937、13.654，P均<0.05）。Lgr5蛋白在胃癌中的表達(dá)與患者的組織分化程度及患者的腫瘤TNM分期存在明顯相關(guān)性（P均<0.05）;β-catenin蛋白在胃癌中的表達(dá)與患者是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及患者的腫瘤TNM分期存在明顯相關(guān)性（P均<0.05）。同時(shí)，在胃癌組織中，Lgr5和β-catenin蛋白的表達(dá)呈明顯相關(guān)性（rp=0.226，P=0.038）。 結(jié)論 在胃癌的發(fā)生發(fā)展過程中，Lgr5 和 β-catenin蛋白發(fā)揮著重要作用，二者的檢測對于胃癌的靶向診療意義重大。

[關(guān)鍵詞] Wnt信號通路;胃癌;Lgr5;β-catenin

[中圖分類號] R735.2? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2019）04-0001-05

[Abstract] Objective To investigate the difference and correlation of Lgr5 and β-catenin protein expression in gastric cancer tissues. Methods Histopathological specimens of 80 gastric cancer patients in Jiaxing First Hospital from January 2012 to December 2017 were selected as observation group. Histopathological specimens of 30 superficial gastritis patients and 30 atrophic gastritis patients were selected as the control group. The expression of Lgr5 and β-catenin protein was detected by immunohistochemistry. Results The expression rates of Lgr5 and β-catenin in the observation group were higher than those in the control group， and there were significant differences among the three groups（χ2=12.937 and 13.654， P<0.05）. The expression of Lgr5 protein in gastric cancer was significantly correlated with the degree of tissue differentiation and the TNM stage of patients（P<0.05）. There was a significant correlation between the expression of β-catenin protein in gastric cancer and whether the patient had lymph node metastasis and tumor TNM stages（P<0.05）. At the same time， the expression of Lgr5 and β-catenin protein was significantly correlated in gastric cancer tissues（rp=0.226， P=0.038）. Conclusion Lgr5 and β-catenin proteins play an important role in the development of gastric cancer. The detection of these two is of great significance for the targeted diagnosis and treatment of gastric cancer.

[Key words] Wnt signaling pathway; Gastric cancer; Lgr5; β-catenin

胃癌是全球第二大癌癥相關(guān)死亡原因，盡管目前在手術(shù)、化療、放療、靶向分子治療等方面均取得了長足進(jìn)展，但晚期胃癌患者的5年生存率仍然較低[1]。因此，識別新的診斷和預(yù)后標(biāo)志物，對于進(jìn)一步闡明胃癌進(jìn)展的機(jī)制及其預(yù)防和治療至關(guān)重要。近年來，腫瘤干細(xì)胞（CSCs）對腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的重要性得到了公認(rèn)，CSCs是具有自我更新功能的多能細(xì)胞，對胃癌的增殖、轉(zhuǎn)移具有重要作用[2]，Wnt/β-catenin信號通路的異常激活參與了胃癌CSCs的調(diào)控[3]。在人類的進(jìn)化過程中，Wnt/β-catenin信號通路高度保守，目前普遍認(rèn)為，Wnt /β-catenin信號通路通過參與多種人類生理活動(dòng)與腫瘤的形成，胃癌的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)[4]。作為Wnt信號通路的重要組成部分之一，富含亮氨酸重復(fù)序列G蛋白偶聯(lián)受體5（Lgr5）在多種腫瘤中存在異常表達(dá)，參與了CSCs增殖分化異常的過程，是不可或缺的重要因素之一[5]。作為Wnt/β-catenin信號通路中的關(guān)鍵蛋白，β-連環(huán)蛋白（β-catenin）在Wnt信號通路中扮演著重要的角色，其異常表達(dá)與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切[6]。本研究通過聯(lián)合檢測胃癌、萎縮性胃炎和淺表性胃炎組織中Lgr5和β-catenin蛋白的表達(dá)，對二者在胃癌進(jìn)展過程中發(fā)揮的作用進(jìn)行探討，并最終為胃癌的診療以及改善患者的預(yù)后提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次研究隨機(jī)選取的標(biāo)本均取自嘉興市第一醫(yī)院2012年1月～2017年12月間門診或住院患者80例，所有胃癌組織標(biāo)本均經(jīng)手術(shù)切除并經(jīng)病理學(xué)證實(shí)，包括男49例，女31例，年齡37～82歲。同時(shí)隨機(jī)選取淺表性胃炎患者組織標(biāo)本30例，包括男14例，女16例，年齡27～71歲;隨機(jī)選取萎縮性胃炎患者組織標(biāo)本30例，包括男14例，女16例，年齡33～73歲。二者組織標(biāo)本均取自胃鏡活檢并經(jīng)病理學(xué)證實(shí)。本次研究所選取的患者病理組織標(biāo)本均保存完好并具有完善的臨床資料。

1.2主要試劑

Lgr5蛋白抗體試劑，購自英國Abcam公司，克隆號：ab75732，工作濃度：1∶100;β-catenin蛋白抗體試劑，購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，克隆號：UMAB 15，工作濃度：1∶100。

1.3 方法

1.3.1 檢測方法? 利用免疫組化染色SP法對Lgr5和β-catenin蛋白的表達(dá)進(jìn)行檢測，陽性對照選取已知陽性的切片，陰性對照選取每種抗體的Tris作為一抗的代替。本研究的所有免疫組化方法均按照說明書步驟嚴(yán)格進(jìn)行。

1.3.2 判定方法? ①Lgr5結(jié)果判定：主要通過參照Fromo-witz綜合計(jì)分法[7]進(jìn)行雙盲半定量觀察分析，整個(gè)結(jié)果判斷過程由2位工作經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師進(jìn)行判讀，Lgr5的主要陽性著色部位位于細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)，呈淺黃色、棕黃色及深褐色顆粒。隨機(jī)在400倍高倍顯微鏡下選取5個(gè)視野并在每個(gè)視野中計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，通過觀察細(xì)胞的著色情況進(jìn)行計(jì)分[8，9]：基本不著色為0分，淺黃計(jì)為1分、棕黃色計(jì)為2分、深褐色計(jì)為3分。同時(shí)計(jì)算著色細(xì)胞占總計(jì)數(shù)細(xì)胞的百分比，根據(jù)著色細(xì)胞占比情況進(jìn)行計(jì)分：無陽性細(xì)胞計(jì)0分，1%～25%計(jì)1分，26%～49%計(jì)2分，≥50%計(jì)3分。最后計(jì)算總積分，將二者所得計(jì)分相加：0～1分計(jì)為陰性（-），2分及以上計(jì)為陽性（+），當(dāng)二者觀察結(jié)果相差大于10%提示差異過大，則需2位病理科醫(yī)師對標(biāo)本情況進(jìn)行重新評定。②β-catenin結(jié)果判定：正常胃黏膜上皮細(xì)胞β-catenin蛋白主要定位于細(xì)胞膜及細(xì)胞間質(zhì)，表達(dá)陽性時(shí)多呈黃色，而細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中β-catenin的表達(dá)多為陰性。胃癌腫瘤細(xì)胞中細(xì)胞膜上β-catenin的表達(dá)呈明顯減弱或消失，同時(shí)胞質(zhì)胞核出現(xiàn)異常染色或完全陰性染色。本研究中以細(xì)胞質(zhì)和/或細(xì)胞核中的黃色顆粒作為β-catenin表達(dá)的陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)。隨機(jī)在400倍高倍顯微鏡下選取5個(gè)視野并在每個(gè)視野中計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，通過觀察細(xì)胞的著色情況進(jìn)行計(jì)分[10-11]：無黃色：0分;淡黃色：1分;棕黃色：2分;棕褐色：3分。根據(jù)著色細(xì)胞占比情況進(jìn)行計(jì)分：陽性細(xì)胞<10%為0 分; 10%～50%為1分;51%～75%為2分;>75%為3分。每張切片的染色總分值為二者乘積，0分計(jì)為陰性，計(jì)為“-”;總分值1分及以上為陽性，計(jì)為“+”，當(dāng)二者觀察結(jié)果相差大于10%提示差異過大，則需兩位病理科醫(yī)師對標(biāo)本情況進(jìn)行重新評定。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本次研究采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法;采用列聯(lián)系數(shù)分析Lgr5和β-catenin蛋白在胃癌組織中表達(dá)的關(guān)系。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組Lgr5和β-catenin的表達(dá)比較

2.2不同病理特征的胃癌患者Lgr5和β-catenin的表達(dá)比較

Lgr5蛋白在胃癌中的表達(dá)與患者的組織分化程度及腫瘤TNM分期存在明顯相關(guān)性（P均<0.05）;β-catenin蛋白在胃癌中的表達(dá)與患者是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及患者的腫瘤TNM分期存在明顯相關(guān)性（P均<0.05）。同時(shí)，本次研究發(fā)現(xiàn)Lgr5和β-catenin均與患者的年齡、性別、腫瘤浸潤深度等無明顯相關(guān)性（P均>0.05）。見表2。

2.3 胃癌中Lgr5和β-catenin表達(dá)的關(guān)系

3 討論

胃癌是一種十分常見的惡性腫瘤，同時(shí)是全世界癌癥死亡最常見的原因之一，在亞洲地區(qū)發(fā)病率較高[12]。與許多其他類型的癌癥相同，多種遺傳和分子因素可以影響胃癌的發(fā)生和進(jìn)展過程，主要包括多種癌基因的激活和抑癌基因的抑制。胃癌早期無明顯臨床癥狀，患者就診后往往提示胃癌晚期，后期療效及預(yù)后不佳。對于可切除的胃癌患者，手術(shù)和輔助放化療是治療的主要途徑，然而，盡管接受了標(biāo)準(zhǔn)的治療，許多胃癌患者仍有復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。目前普遍認(rèn)為CSCs起源于正常的干細(xì)胞或祖細(xì)胞[13]，被認(rèn)為是胃癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和治療失敗的重要原因，許多研究發(fā)現(xiàn)CSCs可能在腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮關(guān)鍵作用，CSCs相關(guān)的特異性標(biāo)志物可能是靶向治療和預(yù)后預(yù)測的關(guān)鍵[14]。Wnt/β-catenin信號通路是生物體內(nèi)重要的信號通路之一，在人體的多種生理活動(dòng)方面發(fā)揮重要的調(diào)控作用，通過調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化、凋亡、遷移和細(xì)胞極性等控制胚胎發(fā)生過程和調(diào)控人體穩(wěn)態(tài)[15]。在大量的散發(fā)性腫瘤中均發(fā)現(xiàn)了Wnt/β-catenin信號通路的活化突變，包括乳腺癌、白血病和胃腸道癌等，Wnt/β-catenin信號通路對促進(jìn)CSCs的自我更新和誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）具有重要的意義，其異常激活可以促進(jìn)多種腫瘤的轉(zhuǎn)移與進(jìn)展，與胃癌腫瘤細(xì)胞的增殖和細(xì)胞凋亡減少有關(guān)[16-18]。因此，作為Wnt/β-catenin信號通路不可或缺的重要組成部分，Lgr5和β-catenin在胃癌的發(fā)生發(fā)展、靶向治療和預(yù)后預(yù)測方面意義重大。

Lgr5，又名GPR49，在人體內(nèi)分布廣泛，是G-蛋白偶聯(lián)受體（GPCR）家族的成員之一，研究指出Lgr5是Wnt/β-catenin信號通路的重要組成部分之一，在包括食管腺癌、胃癌、結(jié)直腸癌、肝癌、卵巢癌的多種人類腫瘤中均發(fā)現(xiàn)異常表達(dá)[19]。目前普遍認(rèn)為Lgr5是胃腸道惡性腫瘤中的干細(xì)胞標(biāo)志物之一[20]，作為Wnt通路的重要組成部分在啟動(dòng)腫瘤生長和推動(dòng)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移中起著重要作用[21]。在人類染色體上，Lgr5 基因定位于12號染色體的q22～23處，由21個(gè)內(nèi)含子和22個(gè)外顯子組成[22]。Lgr5蛋白一共包括907個(gè)氨基酸分子，另一方面，Lgr5蛋白具有一處特征性的外功能區(qū)域，該區(qū)域含有17個(gè)富含亮氨酸的重復(fù)序列。Lgr5在正常人類組織中只在成人干細(xì)胞的細(xì)胞表面呈低水平表達(dá)[23]，多位于隱窩基底部，在胃腸上皮化生病變中和胃癌中Lgr5陽性表達(dá)顯著上調(diào)[24]，并且與幽門螺旋桿菌感染和EMT密切相關(guān)[25-26]。目前Lgr5+細(xì)胞已經(jīng)被證明具有腫瘤啟動(dòng)細(xì)胞或CSCs的特性，在胃癌的發(fā)生和進(jìn)展過程中保留了自我更新的能力[27]。有報(bào)道指出[28]，通過殺死胃癌組織中的Lgr5陽性細(xì)胞，在體外和體內(nèi)可以幾乎完全抑制胃癌細(xì)胞的增殖。Gong等[29]發(fā)現(xiàn)使用Lgr5靶向抗體藥物偶聯(lián)物（antibody-drug conjugate，ADC）可以有效地根除胃腸道癌細(xì)胞并抑制體內(nèi)腫瘤的生長和復(fù)發(fā)，同時(shí)可以有效的治療胃腸腫瘤并消除胃癌CSCs。因此，Lgr5是一個(gè)新的靶點(diǎn)，Lgr5的拮抗劑或人類Lgr5的單克隆抗體可能在臨床上適用于胃癌侵襲和轉(zhuǎn)移的預(yù)防和治療，基于Lgr5的靶向治療可能是胃癌診療和改善患者預(yù)后的重要途徑。本研究結(jié)果顯示Lgr5蛋白在淺表性胃炎、萎縮性胃炎及胃癌中的表達(dá)逐次升高，三者之間存在顯著差異（χ2=12.937，P<0.05）。Lgr5的陽性表達(dá)與患者的TNM分期及組織分化程度存在明顯相關(guān)性（P均<0.05）。目前的研究對Lgr5蛋白在Wnt/β-catenin信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、胃癌CSCs的增殖分化以及胃癌的發(fā)生和進(jìn)展過程中的具體作用機(jī)制仍然尚未完全明確，仍然需要未來進(jìn)一步的研究。

β-catenin是連環(huán)素家族的一員，在多種生理活動(dòng)中發(fā)揮重要的作用，是Wnt/β-catenin信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的核心組件，目前普遍的研究指出其表達(dá)上調(diào)可以誘導(dǎo)Wnt靶基因激活，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展[30]。β-catenin蛋白在正常人類組織中主要定位于細(xì)胞膜，也有一部分β-catenin蛋白可見于細(xì)胞間質(zhì)，主要通過結(jié)合細(xì)胞膜上的E-鈣黏蛋白維持人體正常的生理功能，其中一小部分的β-catenin在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)發(fā)生磷酸化并最終在蛋白酶體的作用下逐漸降解[31]。而在多種人類腫瘤中，β-catenin蛋白可出現(xiàn)異常表達(dá)，通常表現(xiàn)為在細(xì)胞膜處β-catenin表達(dá)呈現(xiàn)明顯減弱和（或）缺失的趨勢，同時(shí)在細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核等處的表達(dá)較前顯著增強(qiáng)[32]。眾所周知，β-catenin核積累是Wnt信號通路轉(zhuǎn)錄激活的關(guān)鍵性標(biāo)志，此時(shí)異常激活的Wnt相關(guān)蛋白與多種細(xì)胞表面受體結(jié)合，進(jìn)而導(dǎo)致糖原合成酶激酶（glycogen synthase kinase，GSK）-3β的生物活性受到抑制，使得β-catenin向核內(nèi)移位，細(xì)胞核中不斷積累的β-catenin蛋白最終與下游因子結(jié)合并激活Wnt/β-catenin信號通路下游相關(guān)靶基因，最終導(dǎo)致多種人類腫瘤的發(fā)生及進(jìn)展[33]。同時(shí)有報(bào)道指出，通過增加β-catenin的降解可以顯著抑制EMT過程，減少胃癌細(xì)胞在體外的遷移和侵襲以及體內(nèi)的轉(zhuǎn)移潛能，有效改善胃癌患者預(yù)后[34]。另一方面，Xi等[35]的研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)使用小干擾RNA（small interfering RNA，siRNA）沉默胃癌細(xì)胞中Lgr5的表達(dá)后，β-catenin的表達(dá)出現(xiàn)顯著降低，表明針對Lgr5的沉默和干擾可能會(huì)影響Wnt/β-catenin信號通路的激活，從而降低β-catenin進(jìn)入細(xì)胞核的積累和易位，并可能最終抑制胃癌的侵襲，提示二者之間具備相關(guān)性。因此，對于評價(jià)胃癌生物學(xué)行為，β-catenin可以作為較好的指標(biāo)并為胃癌的診療提供新的思路。本研究結(jié)果顯示β-catenin蛋白的異常表達(dá)在淺表性胃炎組和萎縮性胃炎組以及胃癌組中的表達(dá)逐次升高，三者之間存在顯著差異（χ2=13.654，P<0.05）。β-catenin蛋白在胃癌中的表達(dá)與患者是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及患者的腫瘤TNM分期存在明顯相關(guān)性（P均<0.05）。因此，β-catenin是人類胃癌發(fā)生和侵襲轉(zhuǎn)移的重要原因之一，進(jìn)一步研究β-catenin的功能和調(diào)控機(jī)制是必要的，這將有助于更好地理解胃癌的發(fā)生和侵襲轉(zhuǎn)移，有助于闡明胃癌治療的新策略。

此外，本次研究結(jié)果還顯示，作為Wnt /β-catenin信號通路的關(guān)鍵靶基因和組成部分，Lgr5和β-catenin之間關(guān)系密切，在胃癌中的表達(dá)呈明顯相關(guān)性，推測在胃癌的發(fā)生發(fā)展過程中Lgr5和β-catenin可能具有協(xié)同作用。近年來，腫瘤治療中一個(gè)主要的難題在于需要瞄準(zhǔn)并消滅腫瘤，同時(shí)最小化對正常組織的不希望的毒性和損傷。因此，尋找可靠、敏感的腫瘤標(biāo)志物和靶點(diǎn)對于胃癌的診療和預(yù)后極為重要。

綜上所述，本次研究指出了Lgr5和β-catenin作為靶向胃癌CSCs和抑制腫瘤生長復(fù)發(fā)的治療靶點(diǎn)的巨大潛力，有望為未來胃癌診療方法的開發(fā)提供新的方向。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Fang ZL，Deng J，Zhang L，et al. TRIM24 promotes the aggression of gastric cancer via the Wnt/β-catenin signaling pathway[J]. Oncol Lett，2017，13（3）：1797-1806.

[2] 杜華，師迎旭.胃癌干細(xì)胞表面標(biāo)記物的研究與最新進(jìn)展[J].中國組織工程研究，2016，20（41）：6225-6232.

[3] Barat S，Chen X，Bui KC，et al. Gamma-secretase inhibitor IX（GSI）impairs concomitant activation of notch and Wnt-Beta-catenin pathways in CD441 gastric cancer stem cells[J]. Stem Cell Transl Med，2017，6（3）：819-829.

[4] Clevers H，Nusse R. Wnt/beta-catenin signaling and disease[J]. Cell，2012，149（6）： 1192-1205.

[5] Alizadeh-Navaei R，Rafiei A，Abedian-Kenari S，et al. Comparison of leucine-rich repeat-containing G protein-coupled receptor 5 expression in different cancer and normal cell lines[J]. Biomed Rep，2016，5（1）：130-132.

[6] Li HL，Liang S，Cui SJ，et al. Targeting of GSK-3β by miR-214 to facilitate gastric cancer cell proliferation and decrease of cell apoptosis[J]. Eur Rev Med Pharmaco，2018，22（1）：127-134.

[7] Fromowitz FB，Viola MV，Chao S，et al. Ras p21 expression in the progression of breast cancer[J]. Hum Pathol，1987，18（12）：1268-1275.

[8] Zheng ZX，Sun Y，Bu ZD，et al. Intestinal stem cell marker LGR5 expression during gastric carcinogenesis[J]. World J Gastroentero，2013，19（46）8714-8723.

[9] Sobin L，Gospodarowicz M，Wittekind C.TNM classification of malignant tumors. UICC international union Against cancer[M]. 7th ed. New York：Wiley-Liss，2010：117-226.

[10] Wang J，Wang XY，Gong W，et al. Increased expression of beta-catenin， phosphorylated glycogen synthase kinase 3beta，cyclin D1， and c-myc in laterally spreading colorectal tumors[J]. J Histochem Cytochem，2009，57（4）：363-371.

[11] Qiao Q，Ramadani M，Gansauge S，et al. Reduced membranous and ectopic cytoplasmic expression of beta-catenin correlate with cyclin D1 overexpression and poor prognosis in pancreatic cancer[J]. Int J Cancer，2001，95（3）：194-197.

[12] Ajani JA，Bentrem DJ，Besh S，et al. National comprehensive cancer network. gastric cancer version 2.2013：Featured updates to the NCCN Guidelines[J]. J Natl Compr Canc Netw，2013，11（5）：531-546.

[13] Hayakawa Y，F(xiàn)ox JG，Wang TC. The origins of gastric cancer from gastric stem cells： Lessons from mouse models[J]. Cell Mol Gastroentero Hepatology，2017，3（3）：331-338.

[14] Chen XL，Chen XZ，Wang YG，et al. Clinical significance of putative markers of cancer stem cells in gastric cancer： A retrospective cohort study[J]. Oncotarget，2016，7（38）：62049-62069.

[15] 李月雅，李凱. Wnt/β-catenin信號通路對腫瘤干細(xì)胞作用的研究進(jìn)展[J].山東醫(yī)藥，2016，56（9）：98-100.

[16] Huang HT，Chen ZQ，Ni XQ. Tissue transglutaminase-1 promotes stemness and chemoresistance in gastric cancer cells by regulating Wnt/bcatenin signaling[J]. Exp Biol Med，2017，242（2）：194-202.

[17] Zhan T，Rindtorff N，Boutros M. Wnt signaling in cancer[J].Oncogene，2017，36（11）：1461-1473.

[18] 李國棟，王洋洋，劉玉河，等.EPHA2通過增強(qiáng)Akt/mTOR信號通路促進(jìn)SGC-7901細(xì)胞的增殖[J].中國癌癥雜志，2016，26（2）：128-133.

[19] Xi HQ，Zhang KC，Li JY，et al. RNAi-mediated inhibition of Lgr5 leads to decreased angiogenesis in gastric cancer[J]. Oncotarget，2017，8（19）：31581-31591.

[20] 劉元華，樊祥山，惲艷.應(yīng)用組織芯片技術(shù)檢測胃癌組織中Lgr5和CD44的表達(dá)[J].中國腫瘤外科雜志，2015， 7（6）：341-345.

[21] Li XB，Yang G，Zhu L，et al. Gastric Lgr5（+）stem cells are the cellular origin of invasive intestinal-type gastric cancer in mice[J]. Cell Res，2016，26（7）：838-849.

[22] 周小嬪，王佐妤，謝立群.Lgr5與胃癌關(guān)系的研究進(jìn)展[J].胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志，2015，24（2）：226-228.

[23] Munoz J，Stange DE，Schepers AG，et al. The Lgr5 intestinal stem cell signature：Robust expression of proposed quiescent '+4' cell markers[J]. Embo J，2012，31（14）：3079-3091.

[24] Jang BG，Lee BL，Kim WH. Distribution of Lgr5+ cells and associated implications during the early stage of gastric tumorigenesis[J]. PloS one，2013，8（12）：82390-82403.

[25] Wang B，Chen QT，Cao Y，et al. LGR5 is a gastric cancer stem cell marker associated with stemness and the EMT signature genes NANOG，NANOGP8，PRRX1，TWIST1， and BMI1[J]. PloS one，2016，11（12）：1-21.

[26] Chang TS，Wei KL，Lu CK，et al. Inhibition of CCAR1，a coactivator of β-catenin，suppresses the proliferation and migration of gastric cancer cells[J]. Int J Mol Sci，2017， 18（2）：460-474.

[27] Han Y，Xue X，Jiang M，et al. LGR5，a relevant marker of cancer stem cells，indicates a poor prognosis in colorectal cancer patients：A meta-analysis[J]. Clin Res Hepatol Gastroenterol，2015，39（2）：267-273.

[28] Wang ZL，Liu C. Lgr5-positive cells are cancer-stem-celllike cells in gastric cancer[J]. Cell Physiol Biochem，2015，36（6）：2447-2455.

[29] Gong X，Azhdarinia A，Ghosh SC，et al. Lgr5-targeted antibody-drug conjugate eradicates gastrointestinal tumors and prevents recurrence[J]. Mol Cancer Ther，2016， 15（7）：1580-1590.

[30] Kidani T，Nakamura A，Kamei S，et al. Overexpression of cytoplasmic β-catenin inhibits the metastasis of the murine osteosarcoma cell line LM8[J]. Cancer Cell Int，2014，14（1）：31-40.

[31] Liu NN，Zhou N，Chai N，et al. Helicobacter pylori promotes angiogenesis depending on Wnt/beta-catenin-mediated vascular endothelial growth factor via the cyclooxygenase-2 pathway in gastric cancer[J]. Bmc Cancer，2016，16（1）：321-332.

[32] Lee SY，Saito T，Mitomi H，et al. Mutation spectrum in the Wnt/β-catenin signaling pathway in gastric fundic gland-associated neoplasms/polyps[J]. Virchows Arch，2015，467（1）：27-38.

[33] Tang XL，Zheng D，Hu P，et al. Glycogen synthase kinase 3 beta inhibits microRNA-183-96-182 cluster via the b-catenin/TCF/ LEF-1 pathway in gastric cancer cells[J].Nucleic Acids Res，2014，42（5）：2988-2998.

[34] Ye JX，Jie Xu J，Li Y，et al. DDAH1 mediates gastric cancer cell invasion and metastasis via Wnt/b-catenin signaling pathway[J]. Mol Oncol，2017，11（9）：1208-1224.

[35] Xi HQ，Cai AZ，Wu XS，et al. Leucine-rich repeat-containing G-proteincoupled receptor 5 is associated with invasion，metastasis，and could be a potential therapeutic target in human gastric cancer[J]. Brit J Cancer，2014， 110（8）：2011-2020.

（收稿日期：2018-09-21）