全銳

摘 要：館藏紙質(zhì)書(shū)畫(huà)文物具有較高的收藏價(jià)值，但紙質(zhì)書(shū)畫(huà)的較難保存，較易引發(fā)霉菌污染等情況的發(fā)生。對(duì)紙質(zhì)書(shū)畫(huà)污染菌進(jìn)行分離及鑒定，不但可以提高紙質(zhì)書(shū)畫(huà)文物霉變防治工作的有效性，還能夠提高防治效果。文章提取貴州省博物館館藏紙質(zhì)書(shū)畫(huà)文物上的霉菌，通過(guò)對(duì)霉菌形狀及特征的分析，提出分離與鑒定霉菌的相關(guān)方法。

關(guān)鍵詞：紙質(zhì)書(shū)畫(huà)文物;霉菌;鑒定方法;分離

在我國(guó)歷史發(fā)展進(jìn)程中，紙質(zhì)書(shū)畫(huà)起到較為關(guān)鍵的作用。其不但能夠充分展現(xiàn)我國(guó)歷史風(fēng)貌，還能夠凸顯我國(guó)特色歷史文化。但相比較其他材質(zhì)文物，紙紙質(zhì)書(shū)畫(huà)文物較易出現(xiàn)霉菌污染等情況。若無(wú)法對(duì)此種情況進(jìn)行有效解決，會(huì)使其出現(xiàn)糟朽變質(zhì)的現(xiàn)象，一定程度上影響紙質(zhì)書(shū)畫(huà)文物的展示效果。

1 材料與方法

1.1 采集樣品

本次實(shí)驗(yàn)提取的樣品來(lái)自貴州省博物館內(nèi)部帶有霉斑的紙質(zhì)書(shū)畫(huà)文物。一般情況下，霉斑多以棕褐色、黑色以及黃色的形式出現(xiàn)于紙質(zhì)書(shū)畫(huà)文物的表面。在具體實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，需及時(shí)對(duì)霉菌進(jìn)行取樣。此期間可采用一次性無(wú)菌拭子進(jìn)行提取，提取方式按照單一擦拭規(guī)律進(jìn)行。完成霉菌樣本采集后，將樣本放置于管器中，并在管器表面標(biāo)明時(shí)間及編號(hào)。然后將霉菌樣本放置于冰盒中，對(duì)其進(jìn)行分離培養(yǎng)。

1.2 霉菌的分離及純化

在實(shí)驗(yàn)前期，需保證實(shí)驗(yàn)在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行。首先，使用無(wú)菌剪刀對(duì)霉菌采樣時(shí)使用的拭子頭進(jìn)行裁剪;其次，準(zhǔn)備一只錐形瓶，在瓶?jī)?nèi)注入SDA液體;最后，將裁剪下來(lái)的拭子頭放至錐形瓶?jī)?nèi)進(jìn)行霉菌培養(yǎng)。在實(shí)際培養(yǎng)期間，需注意霉菌較易出現(xiàn)菌膜等現(xiàn)象。為避免此現(xiàn)象的發(fā)生，在瓶?jī)?nèi)放置少量無(wú)菌玻璃珠。完成以上環(huán)節(jié)后，將錐形瓶放置于100r/min震蕩環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng)，此期間溫度應(yīng)保持在25℃左右。培養(yǎng)3天后即可對(duì)培養(yǎng)液進(jìn)行稀釋處理，主要按照10倍配比，利用無(wú)菌去離子水進(jìn)行處理。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，稀釋梯度的設(shè)置尤為關(guān)鍵，其不僅決定實(shí)驗(yàn)的成敗與否，還影響最終的實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性。因此，在進(jìn)行稀釋梯度的設(shè)置期間，需按照10-2、10-3、10-4的比例來(lái)進(jìn)行。與此同時(shí)，及時(shí)對(duì)稀釋液按照不同梯度及濃度進(jìn)行針對(duì)性采集，采集數(shù)量應(yīng)保持在200μL左右。將采集到的稀釋液均勻涂抹于葡萄糖瓊脂表面，然后將葡萄糖瓊脂放置于25℃溫度下進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)3天后，即可觀察到霉菌出現(xiàn)的分離現(xiàn)象。霉菌分離后，多呈現(xiàn)菌落形態(tài)，并且顏色較為多樣。在完成霉菌分離實(shí)驗(yàn)后，即可對(duì)其進(jìn)行純化處理。部分霉菌的產(chǎn)孢量相對(duì)較大，對(duì)于此類型霉菌，可進(jìn)行劃線培養(yǎng)。若經(jīng)劃線培養(yǎng)后霉菌依然存在污染等情況，可加大劃線純化的次數(shù)，以達(dá)到霉菌純化效果。

1.3 觀察霉菌形態(tài)

在進(jìn)行菌落形態(tài)的觀察期間，首先需對(duì)凍存后的瓷珠進(jìn)行提取。大多瓷珠呈紅色，并且表面吸附了菌液。使用無(wú)菌鑷子進(jìn)行夾取，夾取數(shù)量為1粒。將夾取的瓷珠放置于帶有葡萄糖瓊脂的平板表面，將平板放置于25℃環(huán)境下培養(yǎng)4天左右。在此期間定期對(duì)菌落現(xiàn)象進(jìn)行觀察，針對(duì)菌落的外觀、濕潤(rùn)度、顏色以及生長(zhǎng)情況進(jìn)行實(shí)時(shí)記錄。在觀察菌落顯微形態(tài)期間，將水作為主要浮載劑，用解剖針挑取菌落邊緣的菌絲。將挑取的菌絲放置于載玻片上，以順時(shí)針形式將載玻片表面的菌絲挑散。將蓋玻片放置于菌絲表面，用顯微鏡對(duì)其進(jìn)行深層觀察，明確孢子以及菌絲在顯微鏡下的微觀形態(tài)，并將此形態(tài)進(jìn)行拍照存儲(chǔ)。

1.4 提取霉菌基因組的DNA

完成霉菌純化工作后需及時(shí)對(duì)其進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)環(huán)境溫度保持在25℃。根據(jù)真菌DNA試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定進(jìn)行提取，首先準(zhǔn)備離心管，保證離心管的儲(chǔ)存量為2mL。將200mg的真菌絲放置于離心管內(nèi)部進(jìn)行凍融，凍融次數(shù)為3～4次。然后將溶菌酶放置于離心管中，溶菌酶的總量要達(dá)到20μL。完成以上環(huán)節(jié)工作后，將離心管儲(chǔ)存于37℃的培養(yǎng)箱中。放置1天后，將離心管取出，放置于帶有55℃的水浴鍋內(nèi)，再將100%的乙醇加入至離心管進(jìn)行攪拌。最后經(jīng)收集管以及吸附柱的特殊處理得到DNA洗脫液。

2 結(jié)果與討論

2.1 分離純化及形態(tài)觀察

通過(guò)霉菌分離、純化，得到紙質(zhì)書(shū)畫(huà)文物帶有的8株霉菌。經(jīng)對(duì)8株霉菌的對(duì)比及分析可發(fā)現(xiàn)，霉菌經(jīng)不同處理后的形態(tài)及顏色皆存在較大差異。霉菌顏色較為多樣，主要為黃、綠、灰等顏色，菌落整體呈絨毛及平展形態(tài)，部分菌落存在較強(qiáng)特性。大部分菌絲的高度較為發(fā)達(dá)，但仍有少部分菌絲并未見(jiàn)明顯生長(zhǎng)趨勢(shì)。霉菌除具有吸附生長(zhǎng)特性外，其中的木霉及曲霉皆有纖維素酶，并且二者的纖維素酶皆具有較強(qiáng)的高活性。纖維素酶能夠有效分解纖維素，在生物降解作用下，會(huì)對(duì)織物產(chǎn)生一定損傷，導(dǎo)致織物出現(xiàn)破損。與此同時(shí)，煙曲霉、黃曲霉以及黑曲霉皆會(huì)對(duì)紙質(zhì)書(shū)畫(huà)造成損壞，使其出現(xiàn)脫色等現(xiàn)象。由此可見(jiàn)，上述霉菌種類皆將嚴(yán)重影響紙質(zhì)書(shū)畫(huà)文物的存儲(chǔ)。

2.2 分子生物學(xué)鑒定結(jié)果

對(duì)提取的8株真菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)及鑒定可得，在8株霉菌中，帶有黃曲霉、大葉黃耆、尼日曲霉菌株及根瘤菌屬。表1是不同真菌在同源性對(duì)比下的不同數(shù)據(jù)。

傳統(tǒng)真菌種類相對(duì)較多，需依靠形態(tài)觀察才能對(duì)真菌結(jié)構(gòu)進(jìn)行深入分析。但就形態(tài)鑒定方法而言，此方法在實(shí)際鑒定期間需花費(fèi)大量鑒定時(shí)間，需及時(shí)對(duì)菌落的顏色及形態(tài)進(jìn)行實(shí)時(shí)觀察。同時(shí)，真菌形態(tài)存在較大差異性，針對(duì)其形態(tài)特征的研究相對(duì)復(fù)雜，并且受真菌培養(yǎng)環(huán)境及條件等方面影響，真菌鑒定結(jié)果缺乏準(zhǔn)確性。為改變傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)研究弊端，可利用分析生物學(xué)的研究方法對(duì)真菌進(jìn)行系統(tǒng)分析。此方法能夠較大程度地彌補(bǔ)傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)的不足，并且利用分子生物學(xué)所得到的序列同源性高達(dá)99%。由此可見(jiàn)，分子生物學(xué)具有較強(qiáng)實(shí)用性及準(zhǔn)確性，應(yīng)加大對(duì)此方法的研究力度。在霉菌實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，充分利用分子生物學(xué)中的分析技術(shù)，實(shí)現(xiàn)對(duì)真菌的有效鑒定及分類，進(jìn)而為真菌研究提供有效參考依據(jù)。

3 結(jié)語(yǔ)

霉變是館藏紙質(zhì)書(shū)畫(huà)文物主要的病害之一。為避免紙質(zhì)書(shū)畫(huà)文物發(fā)生霉變，可利用霉菌鑒定等方法對(duì)霉菌種類進(jìn)行分析，而后針對(duì)霉菌特點(diǎn)進(jìn)行霉菌抑制劑的選擇。據(jù)實(shí)驗(yàn)研究可得，霉菌種類相對(duì)較多，在霉菌的研究過(guò)程中，分子生物學(xué)能夠?qū)ζ溥M(jìn)行合理解析。因此，在實(shí)際研究過(guò)程中，可利用分析生物學(xué)檢定方法對(duì)霉菌菌株形態(tài)進(jìn)行研究。同時(shí)在文物保護(hù)的相關(guān)工作中，合理將分子生物學(xué)鑒定技術(shù)融入其中，能夠有效提高分類鑒定的準(zhǔn)確性，進(jìn)而避免館藏紙質(zhì)書(shū)畫(huà)文物出現(xiàn)霉菌等問(wèn)題，從而為紙質(zhì)書(shū)畫(huà)文物建立合理儲(chǔ)存空間。

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