王 睿，閆兆鵬，吉?jiǎng)P強(qiáng)，吳興茂，臧 彬△

(中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院：1.重癥醫(yī)學(xué)科；2.普外科，沈陽(yáng) 110004)

高脂血癥是急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)的危險(xiǎn)因素之一,也是繼膽源性、酒精性之后AP的常見(jiàn)病因,AP與高脂血癥的并存率為12%～38%[1]。過(guò)去在我國(guó)AP的發(fā)病因素以膽道疾病為主，占50%以上。近年來(lái)隨著生活水平的提高和飲食結(jié)構(gòu)的改變，高脂血癥性胰腺炎(hyperlipidemic pancreatitis，HP)的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，HP本身及其并發(fā)癥的發(fā)病機(jī)制的探索及治療手段的開發(fā)也開始引起人們更多的關(guān)注。HP可以引起與其他類型胰腺炎相同的并發(fā)癥[2]，并有證據(jù)證明HP導(dǎo)致的并發(fā)癥更為嚴(yán)重，發(fā)病率更高。腎功能障礙在重癥胰腺炎(SAP)中的發(fā)生率為14%～43%，僅次于肺功能障礙[2]。急性腎損傷(acute kidney injury，AKI)是導(dǎo)致SAP死亡的常見(jiàn)原因之一，病死率高達(dá)71%～84%[3]。另外，脂代謝紊亂也對(duì)腎臟損傷有著促進(jìn)作用，因此HP并發(fā)的AKI很可能較單純SAP誘發(fā)的AKI更為嚴(yán)重。然而該并發(fā)癥的病理表現(xiàn)和分子機(jī)制目前并沒(méi)有文章報(bào)道。

PPARγ激動(dòng)劑作為胰島素增敏劑被用于2型糖尿病的治療。研究表明，其代表藥物羅格列酮(RSG)能夠有效緩解?；悄懰徕c(sodium taurocholate，sTCA)誘導(dǎo)的AP癥狀，減輕炎性反應(yīng)[4],并能夠改善AP并發(fā)的肺損傷[5]。本研究擬采用高脂飲食聯(lián)合?；悄懰徕c逆行胰膽管注射方法，建立HP大鼠模型，觀察HP并發(fā)AKI的病理特點(diǎn)，并在此基礎(chǔ)上探討羅格列酮對(duì)腎小管上皮細(xì)胞凋亡的作用及其調(diào)控機(jī)制。

1 材料與方法

1.1主要藥品與試劑 ?；悄懰徕c(T4009-250MG)和羅格列酮(R2408-50MG)購(gòu)自美國(guó)Sigma公司,大鼠腎損傷分子1(Kim-1)檢測(cè)試劑盒和NGAL檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)Uscn公司，In Situ Cell Death Detection Kit 購(gòu)自上海羅氏公司，抗體購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling Technology公司。

1.2動(dòng)物分組及模型制備 36只清潔級(jí)健康雄性SD大鼠，8周齡，體質(zhì)量180～200 g，購(gòu)自中國(guó)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(遼)-2013-0001]。本實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案符合動(dòng)物倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。按隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為正常飲食對(duì)照組(Normal組)；正常飲食+逆行胰膽管注射5%牛磺膽酸鈉組(AP組)；高脂飲食組(HFD組)；高脂血癥性胰腺炎組(HP組)；正常飲食+羅格列酮組(N+RSG組)和高脂血癥性胰腺炎+羅格列酮組(HP+RSG組)，每組6只。HFD、HP組和HP+RSG組大鼠給予高脂飼料喂養(yǎng)4周(高脂飼料配方為87.8%基礎(chǔ)飼料+10%豬油+2%膽固醇+0.2%膽酸鈉)，Normal、AP組和N+RSG組給予正常飼料喂養(yǎng)4周。飼養(yǎng)4周后行逆行胰膽注射法建立大鼠AP模型，術(shù)前禁食、不禁水12 h，以保證腸道條件一致。以2 mL/kg(100 mg/kg)5%氯胺酮+10 mg/kg甲苯噻嗪腹腔注射麻醉后固定、腹部脫毛、消毒、鋪無(wú)菌巾；沿腹正中線作1.5 cm 切口，AP、HP組和HP+RSG組經(jīng)上腹劍突下正中切口進(jìn)腹，切口2～3 cm，顯露肝下間隙，暴露十二指腸，將十二指腸翻出體外。暴露胰腺，確認(rèn)胰膽管及十二指腸乳頭位置，以血管夾阻斷近肝門處胰膽管，用BD密閉式靜脈留置針(規(guī)格24 G，批號(hào)383408)于十二指腸乳頭附近經(jīng)十二指腸腸壁穿刺進(jìn)入腸腔，經(jīng)乳頭逆行刺入胰膽管，進(jìn)入約5 mm，確認(rèn)針頭已進(jìn)入胰膽管后，在十二指腸乳頭處用另一血管夾夾畢、固定。使用微量注射泵將5% sTCA溶液按1 mL/kg用量注入胰膽管內(nèi)，以0.2 mL/min的速度注射完畢，保持壓力5 min后除去血管夾，逐層關(guān)腹。其余各組采用逆行胰膽管注射生理鹽水。所有動(dòng)物術(shù)后立即皮下注射生理鹽水10 mL抗休克，之后將動(dòng)物放回飼養(yǎng)籠中，待麻醉清醒后可自由活動(dòng)、進(jìn)食、飲水。造模后24 h后，HP+RSG組和N+RSG組經(jīng)腹腔注射10 mg/kg羅格列酮，其余組給予等體積溶劑。48 h后處死各組大鼠，心尖取血離心留血清及取材腎組織，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.3血清生化檢測(cè) 取6組大鼠血清，送中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院檢驗(yàn)科用采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清淀粉酶(AMY)活性、三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)水平；檢測(cè)血清肌酐(Scr)、尿素氮含量(BUN)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法檢測(cè)早期AKI標(biāo)記物尿KIM-1，血清及尿液中的NGAL水平。

1.4大鼠腎臟組織 標(biāo)本常規(guī)脫水、透蠟、包埋、切成5 μm的薄片，行PAS染色，于顯微鏡下觀察染色效果。于400倍鏡下拍照，行PAS半定量評(píng)分，依據(jù)皮質(zhì)腎小管上皮細(xì)胞壞死百分比評(píng)分：0分為無(wú)壞死；1分為壞死面積小于10%；2分為壞死面積10%～25%；3分為壞死面積>25%～75%；4分為壞死面積大于75%。電鏡下觀察腎臟超微結(jié)構(gòu)變化。電鏡標(biāo)本取厚度小于1 mm的組織，2.5%戊二醛固定，1% 鋨酸-0.1 mmol/L二甲胂酸鈉緩沖液固定，脫水，丙酮浸透、包埋、聚合，制成1 μm厚半薄切片。 日立(H-7650)透射電子顯微鏡下觀察，拍片。

1.5TUNEL染色檢測(cè)大鼠腎臟組織凋亡情況 依照試劑盒說(shuō)明書，石蠟切片常規(guī)脫蠟、水化，加TUNEL反應(yīng)液，再加入轉(zhuǎn)化劑-POD，然后DAB顯色，于400倍光學(xué)顯微鏡觀察并計(jì)數(shù)。TUNEL 陽(yáng)性表達(dá)率= 陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×100%。

1.6Western blot檢測(cè)大鼠腎臟Bax、Bcl-2及cleaved-caspase-3等相關(guān)凋亡蛋白表達(dá) 取腎臟組織，加入等體積RIPA裂解液，冰浴下超聲破碎制成組織勻漿液，4 ℃ 12 000 r/min離心10 min，取上清液，BAC法測(cè)定蛋白濃度，蛋白樣本凝膠電泳分離后，轉(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯(PVDF)膜室溫封閉1 h，加入一抗(β-actin抗體為1∶5 000，其他抗體為1∶1 000) 4 ℃孵育過(guò)夜，羊抗兔IgG-HRP二抗(1∶5 000)室溫孵育1 h，滴加增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光色液后于化學(xué)發(fā)光成像儀內(nèi)曝光顯影，用凝膠圖像處理系統(tǒng)(Gel-Pro-Analyzer軟件)分析目標(biāo)條帶的光密度值。

2 結(jié) 果

2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般情況 飼養(yǎng)期間各組大鼠無(wú)死亡，手術(shù)造模過(guò)程順利，各組大鼠全部存活至術(shù)后48 h。Normal、HFD、N+RSG組大鼠的術(shù)后恢復(fù)較快，4～6 h后可活動(dòng)、飲水，生命狀態(tài)平穩(wěn)。AP、HP組大鼠的一般情況最差，術(shù)后精神萎靡，平臥休息，有呼吸急促、弓背豎毛寒戰(zhàn)、動(dòng)作呆滯等應(yīng)激表現(xiàn)，少數(shù)大鼠腹部切口周圍可見(jiàn)黃色滲出。HP+RSG干預(yù)組的大鼠不同程度地出現(xiàn)以上應(yīng)激癥狀，但較HP組都有明顯改善，活動(dòng)、飲水、精神狀況等有所好轉(zhuǎn)。

2.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的大體解剖觀察 普通飼料喂養(yǎng)組(Normal、N+RSG組)大鼠，肝臟呈暗紅色，邊緣銳利；高脂飼料喂養(yǎng)組(HFD、HP、HP+RSG)大鼠肝臟可見(jiàn)黃色條紋，邊緣變鈍，腹腔大網(wǎng)膜脂肪組織較多。Normal組大鼠胰腺無(wú)充血水腫，腎臟顏色暗紅，未見(jiàn)明顯異常。個(gè)別大鼠胰腺組織稍有水腫，可見(jiàn)少量淡黃色腹腔積液。AP、HP組腹腔內(nèi)存在大量血性腹腔積液，胰組織胰腺體積較Normal組增大、包膜緊張，部分區(qū)域可見(jiàn)液化、出血、壞死等改變；有鈣化斑附著，腎臟暗紅色，無(wú)明顯腫脹。HP+RSG組可見(jiàn)大量黃色腹腔積液，胰組織胰腺體積增大、包膜緊張，部分可見(jiàn)液化、出血、壞死等改變；有鈣化斑附著，腎臟暗紅色，無(wú)明顯腫脹。

2.3組織病理學(xué)檢查

2.3.1PAS染色腎小管間質(zhì)損傷 PAS染色結(jié)果見(jiàn)圖1，Normal組及N+RSG組大鼠腎小管排列整齊，結(jié)構(gòu)完整，腎小球及腎間質(zhì)未見(jiàn)明顯異常。HFD組腎小管基底面增厚，少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。 AP、HP組可見(jiàn)腎小管間質(zhì)水腫，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，腎小管基底面脫落、皺縮、部分小管上皮壞死，失去原有形態(tài)，另HP組可見(jiàn)腎小管上皮細(xì)胞空泡變性。HP+RSG組腎組織的上述損傷減輕。行PAS染色半定量評(píng)分結(jié)果見(jiàn)圖2A，與Normal組比較，AP、HFD、HP組腎小管損傷指數(shù)明顯增高(P<0.01)；與AP組相比，HP組損傷指數(shù)增高(P<0.01)；與HFD組相比，HP組損傷指數(shù)增高(P<0.01)；與HP組相比，HP+RSG組損傷指數(shù)降低(P<0.01)。

2.3.2電鏡下觀察腎臟超微病理變化 電鏡下可見(jiàn)高脂飲食組(HFD、HP組)腎小球基底膜(GBM)增厚,足細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞孔增大，足細(xì)胞足突變形,排列異常,內(nèi)皮細(xì)胞孔變大或不清。HP組可見(jiàn)內(nèi)皮孔隙消失，足突大部分融合，結(jié)構(gòu)紊亂，部分濾過(guò)膜薄厚不均勻，足突寬度明顯增加，大部分可見(jiàn)融合。HP+RSG組足細(xì)胞結(jié)構(gòu)不完整，體積增大，部分可見(jiàn)融合，并有微絨毛形成，病變較HP組減輕，見(jiàn)圖1。

2.3.3TUNEL染色檢測(cè)大鼠腎臟組織凋亡情況 TUNEL染色顯示(圖1)，陽(yáng)性細(xì)胞核呈棕黑色，Normal、N+RSG組大鼠腎臟偶見(jiàn)凋亡細(xì)胞，AP 、HFD、HP、HP+RSG組有不同程度的凋亡，凋亡細(xì)胞以腎小管上皮細(xì)胞為主，腎小球細(xì)胞見(jiàn)少量凋亡。凋亡率反映細(xì)胞凋亡的程度，顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)凋亡率:每張切片從不同的10個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞/視野，計(jì)算出凋亡率(圖2B)。結(jié)果顯示:Normal、N+RSG組可見(jiàn)個(gè)別散在的細(xì)胞發(fā)生凋亡；與Normal組比較，AP、HFD、HP、HP+RSG各組凋亡細(xì)胞明顯增多,凋亡率顯著增加(P<0.01)，以HP組最為顯著；與HP組比較，HP+RSG組凋亡細(xì)胞明顯減少,凋亡率顯著降低(P<0.01)。

2.4大鼠血清生化檢測(cè)結(jié)果 各組大鼠的AMY活性、TG、總膽固醇(TC)、HDL、LDL測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。與Normal組相比，AP、HFD、HP組血清淀粉酶明顯增高(P<0.01)，與Normal組相比AP、HFD、HP組血脂系列(TG、TC、HDL、LDL)明顯增高(P<0.01)。 與HP組相比，HP+RSG組血清淀粉酶明顯降低(P<0.01)，HP+RSG組血脂系列(TG、TC、HDL、LDL)明顯降低(P<0.01)。各組大鼠的血清尿素氮、肌酐測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。與Normal組相比，AP、HFD、HP組Scr水平明顯增高(P<0.01)，與HP組相比HP+RSG組Scr水平明顯下降(P<0.01)。與Normal組相比，AP、HFD、HP組血清BUN水平明顯增高(P<0.01)，與HP組相比HP+RSG組BUN水平明顯下降(P<0.01)。

表1 各組大鼠血清生化結(jié)果

▲：P<0.01，與Normal組比較；△：P<0.01，與HP組比較

2.5ELISA檢測(cè)尿KIM-1，NGAL表達(dá) ELISA法檢測(cè)尿KIM-1，NGAL水平，與Normal組相比，AP、HFD、HP組KIM-1水平明顯增高(P<0.01)，NGAL水平明顯增高(P<0.01)，見(jiàn)表2。

2.6Western blot檢測(cè)大鼠腎臟Bax、Bcl-2及cleaved-caspase-3等相關(guān)凋亡蛋白表達(dá) Western-blot 檢測(cè)顯示(圖2)，Bax條帶出現(xiàn)在23×103，Bcl-2條帶出現(xiàn)在26×103，cleaved-caspase-3條帶出現(xiàn)在17×103,β-actin出現(xiàn)在43×103，灰度分析顯示：與 Normal組比較，AP、HFD、 HP組Bax和cleaved-caspase-3在腎組織中表達(dá)明顯升高(P<0.01)，而Bcl-2卻顯著下降(P<0.01)；經(jīng)羅格列酮干預(yù)后HP+RSG組較HP組Bax和cleaved-caspase-3表達(dá)下降(P<0.01)，而Bcl-2表達(dá)卻明顯上調(diào)(P<0.01)。

表2 各組大鼠尿NGAL、KIM-1水平

▲：P<0.01，與Normal組相比

1：PAS染色腎小管間質(zhì)損傷，Normal組(1A)及N+RSG組(1E)大鼠腎小管排列整齊，結(jié)構(gòu)完整，腎小球及腎間質(zhì)未見(jiàn)明顯異常；HFD組(1C)腎小管基底面增厚，少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；AP組(1B)、HP組(1D)可見(jiàn)腎小管間質(zhì)水腫，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，腎小管基底面脫落、皺縮、部分小管上皮壞死，失去原有形態(tài)，另HP組可見(jiàn)腎小管上皮細(xì)胞空泡變性；HP+RSG組(1F)可減輕腎組織的上述損傷。2：電鏡下觀察腎臟超微病理變化Normal組(2A)腎小球?yàn)V過(guò)膜結(jié)構(gòu)基本正常，基膜均勻完整、無(wú)增厚；內(nèi)皮細(xì)胞空隙明顯，分布均勻；足細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，足突寬度正常，均勻排布于基膜外側(cè)；細(xì)胞質(zhì)密度均勻，細(xì)胞器完整。AP 組(2B)：基膜均勻完整、無(wú)增厚；內(nèi)皮細(xì)胞空隙明顯，分布均勻；足細(xì)胞結(jié)構(gòu)不完整，部分足突寬度明顯增加，部分可見(jiàn)融合，并有微絨毛形成；HFD組(2C)足細(xì)胞結(jié)構(gòu)尚完整，部分足突寬度明顯增加，部分可見(jiàn)融合，并有微絨毛形成。HP組(2D)可見(jiàn)內(nèi)皮孔隙消失，足突大部分融合，結(jié)構(gòu)紊亂，部分濾過(guò)膜薄厚不均勻，足突寬度明顯增加，大部分可見(jiàn)融合；HP+RSG組(2F)足細(xì)胞結(jié)構(gòu)不完整，體積增大，部分可見(jiàn)融合，并有微絨毛形成。3：TUNEL染色檢測(cè)大鼠腎臟組織凋亡情況，TUNEL染色陽(yáng)性細(xì)胞核呈棕黑色，Normal組(3A)、N+RSG(3E)組大鼠腎臟偶見(jiàn)凋亡細(xì)胞，AP、HFD、HP、HP+RSG組有不同程度的凋亡，凋亡細(xì)胞以腎小管上皮細(xì)胞為主，腎小球細(xì)胞見(jiàn)少量凋亡

圖1各組大鼠腎組織PAS染色、電鏡、TUNEL染色結(jié)果

A:PAS染色半定量評(píng)分；B：TUNEL染色腎組織凋亡率；C：凋亡相關(guān)蛋白Western blot結(jié)果；D：凋亡相關(guān)蛋白Western blot結(jié)果分析；*:P<0.01,與Normal組相比；#：P<0.01，與HP組相比

圖2病理染色半定量評(píng)分結(jié)果及凋亡相關(guān)蛋白Westernblot結(jié)果

3 討 論

近年來(lái)隨著人們生活水平的提高和飲食習(xí)慣的改變，由高TG血癥誘發(fā)的HP逐年增多，其臨床表現(xiàn)除特征性的乳糜血外，常伴有嚴(yán)重的代謝紊亂，并發(fā)急性肺損傷、急性腎損傷等器官功能障礙，預(yù)后差，且易復(fù)發(fā)。HP患者發(fā)生AKI的機(jī)制尚未完全明確，可能與HP時(shí)細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)的大量釋放，腎臟血流動(dòng)力學(xué)及微循環(huán)障礙，中晚期腸道細(xì)菌移位，內(nèi)毒素作用加重腎臟損傷等相關(guān)。近期研究表明：腎細(xì)胞的凋亡也在HP腎損傷中起到重要作用。

本研究選取HP腎損傷動(dòng)物模型，前期實(shí)驗(yàn)證實(shí)HP大鼠早期有腎損傷發(fā)生，早期腎損傷標(biāo)記物，如尿KIM-1、NGAL等均升高(P<0.01)。尿KIM-1是一種敏感性和特異性都較高的早期診斷腎小管損傷的標(biāo)記物[3]。缺血早期近端腎小管上皮細(xì)胞大量表達(dá)KIM-1,尿KIM-1表達(dá)在缺血后12 h即可檢測(cè)出,并持續(xù)升高數(shù)天。腎近曲小管細(xì)胞在損傷后可高表達(dá)NGAL,在動(dòng)物及人體研究中均發(fā)現(xiàn)腎臟缺血損傷2 h后，血清及尿液中的NGAL明顯升高,NGAL水平越高,腎臟損傷越重,臨床預(yù)后越差。這些結(jié)果表明，本研究的HP模型中早期便存在急性腎損傷。

進(jìn)一步對(duì)大鼠腎組織進(jìn)行病理分析，行PAS染色，HP組病變主要集中在腎小管內(nèi)膜部位，半定量評(píng)分顯示HP組腎小管損傷指數(shù)明顯增高，羅格列酮干預(yù)可減輕HP腎小管損傷程度。TUNEL染色檢測(cè)大鼠腎臟組織凋亡情況，TUNEL染色顯示HP組腎臟有不同程度的凋亡，凋亡細(xì)胞以腎小管上皮細(xì)胞為主。與HP模型組比較，羅格列酮干預(yù)可顯著降低腎組織凋亡率，筆者推測(cè)抑制凋亡可能可以修復(fù)損傷。

細(xì)胞凋亡即程序性細(xì)胞死亡，是細(xì)胞遵循自身程序自己結(jié)束其生命的主動(dòng)死亡方式，由精確的基因調(diào)控執(zhí)行。細(xì)胞凋亡是組織正常發(fā)育及重構(gòu)的關(guān)鍵因素，在HP腎損傷的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中同樣有重要的意義。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)TUNEL原位檢測(cè)各組大鼠腎組織證實(shí)HP大鼠腎組織存在細(xì)胞凋亡。細(xì)胞凋亡在腎功能下降及腎臟病理?yè)p傷中發(fā)揮了一定的作用。細(xì)胞凋亡受多種凋亡相關(guān)基因及其蛋白的調(diào)控，與凋亡相關(guān)的基因通常分為抗凋亡基因和促凋亡基因。Bcl-2是一種重要的抗凋亡蛋白，而Bax為 Bcl-2家族成員，其作用為促凋亡。caspase-3 是半胱氨酸蛋白酶家族的重要成員,是各種凋亡途徑下游的必經(jīng)之路,被認(rèn)為是執(zhí)行細(xì)胞凋亡最關(guān)鍵的蛋白酶。caspase-3 一旦被激活,凋亡的發(fā)生不可避免,故又稱細(xì)胞凋亡的終末剪切酶[7]。caspase-3活化會(huì)激活DNA斷裂因子,導(dǎo)致失活狀態(tài)下的核酸內(nèi)切酶激活,降解多聚聚合酶和核纖層蛋白等，引起染色體斷裂,造成細(xì)胞凋亡[8]。抑制caspase酶活性可能成為防治HP腎損傷的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[9]。

羅格列酮在不同種類細(xì)胞的凋亡過(guò)程中起到不同的作用，羅格列酮通過(guò)調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和炎性反應(yīng)，可抑制胰腺β細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞、肝細(xì)胞和神經(jīng)元細(xì)胞的凋亡[10-13]。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，應(yīng)用羅格列酮治療后可使HP腎損傷過(guò)程中凋亡指數(shù)下降，Bcl-2 表達(dá)增強(qiáng)，Bax表達(dá)減弱，它可抑制HP誘發(fā)AKI過(guò)程中腎臟凋亡的發(fā)生，且其腎臟保護(hù)作用與抑制 Bcl-2/Bax，capases-3介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡密切相關(guān)，與文獻(xiàn)[14]報(bào)道一致。

本實(shí)驗(yàn)觀察羅格列酮通過(guò)減少腎小管上皮細(xì)胞凋亡減輕高脂血癥胰腺炎所導(dǎo)致的腎損傷，為今后研究打下一定基礎(chǔ)，但實(shí)驗(yàn)存在一定局限，未進(jìn)行相關(guān)凋亡蛋白mRNA水平的檢測(cè)，及進(jìn)一步細(xì)胞信號(hào)通路的深入探討。另針對(duì)膿毒癥腎損傷的研究顯示，自噬能夠拮抗細(xì)胞凋亡，對(duì)LPS介導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞損傷發(fā)揮保護(hù)作用，抑制自噬作用能夠加重LPS介導(dǎo)的AKI。今后本課題組將繼續(xù)就自噬在HP所導(dǎo)致的腎損傷中的功能及具體機(jī)制作進(jìn)一步探索。

綜上所述，羅格列酮能降低高脂血癥胰腺炎大鼠腎臟Bax、caspase-3表達(dá),增加Bcl-2的表達(dá)，減少腎小管上皮細(xì)胞凋亡，保護(hù)腎臟。