林水花，黃幼霞，黃小藝，吳建國

（1.泉州醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，福建 泉州 362000；2.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建 福州 350122）

決明子為豆科植物決明Cassia obtusifoliaL.或小決明Cassia toraL.的干燥成熟種子，性微寒，味甘、苦、咸，歸肝、大腸經(jīng)，具有清熱明目、潤腸通便的功效，臨床上常用其炒制品，主治目赤澀痛，羞明多淚，頭痛眩暈，目暗不明，大便秘結(jié)等不適癥狀［1］。

研究表明決明子主要含有大黃素、大黃酚等蒽醌類化合物，以結(jié)合態(tài)和游離態(tài)存在，具有降脂降壓、保肝、調(diào)節(jié)脂肪代謝的作用［2］。本文將決明子生品以不同炒制時間和火力進(jìn)行炮制，比較不同炮制品游離蒽醌類和總蒽醌類化合物的含量及抗氧化活性，探討蒽醌類化合物含量與抗氧化活性之間的相關(guān)性，為進(jìn)一步提高決明子炮制工藝和其飲片質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。決明子中的主要有效成分大黃素和大黃酚結(jié)構(gòu)中均含有1，8-二羥基蒽醌結(jié)構(gòu)，因此本實驗采用1，8-二羥基蒽醌為對照品。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 UV-1800PC DS2型紫外可見分光光度計（上海美普達(dá)儀器有限公司）；KQ5200DE型數(shù)控超聲波清洗儀 （昆山市超聲儀器有限公司）；ME104／02電子天平 （梅特勒-托利多儀器有限公司）；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司）；DFT-100手提式高速中藥粉碎機 （溫嶺市林大機械有限公司）。

1.2 試藥 決明子購于福建銘遠(yuǎn)制藥有限公司，經(jīng)泉州醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校黃秀珍教授鑒定為豆科植物決明Cassia obtusifoliaL.的干燥成熟種子；四水合醋酸鎂、二氯甲烷、甲醇（均為分析純，西隴化工股份有限公司）；1，8-二羥基蒽醌、二苯基-1-苦肼基（DPPH）、維生素C（上海源葉生物科技有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 決明子炒制 分別稱取干燥決明子7份各300 g，用七種不同的炒制方法進(jìn)行炮制：樣品1用文火炒制3 min；樣品2用文火炒制 5 min；樣品3用文火炒制8 min；樣品4用文火炒制10 min；樣品5用中火炒制3 min；樣品6用武火炒制3 min；樣品7為生品。不同的炒制方法使樣品表現(xiàn)出不同的外觀性狀，隨著炒制火力和時間增加，可產(chǎn)生焦斑、焦氣、鼓起和爆裂等變化。結(jié)果見表1。

2.2 1，8-二羥基蒽醌標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 配制0.054 mg／mL 的 1，8-二羥基蒽醌溶液， 分別取 0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL 于 10 mL 量瓶中，揮干溶劑，用0.5%醋酸鎂甲醇溶液定容；在512 nm處測定吸光值，以1，8-2羥基蒽醌溶液的濃度為橫坐標(biāo)，測得的吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線［3］。線性方程為：

如圖1。圖1表明：1，8-二羥基蒽醌在濃度為0.002 7～0.027 0 mg／mL范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線形關(guān)系。

2.3 總蒽醌含量測定 將決明子樣品粉碎，分別稱取不同決明子炒制品1.0 g，加100 mL甲醇溶液超聲提取25 min，用甲醇定容后過濾即得樣品溶液；吸取樣品溶液20 mL置于50 mL量瓶中，揮干溶劑，加30 mL 10%稀鹽酸溶解，水浴加熱1 h，使其完全水解；取出水解液立即冷卻，用二氯甲烷萃取4次后，水解液按照2.2項步驟進(jìn)行顯色，在512 nm無吸收；合并二氯甲烷萃取液，回收溶劑，殘渣加0.5%醋酸鎂甲醇液溶解，定容至100 mL，搖勻，在512 nm處測定吸光度，測總蒽醌含量［4-6］。由表1可知：生品總蒽醌含量明顯高于炮制品總蒽醌含量；炮制時間越長，總蒽醌含量越低；不同炮制品中的總蒽醌含量與與生品決明子中的總蒽醌含量具有顯著性差異（P＜0.05）。

表1 不同炮制方法對決明子總蒽醌、游離蒽醌含量及DPPH抗氧化活性的影響（±s）

表1 不同炮制方法對決明子總蒽醌、游離蒽醌含量及DPPH抗氧化活性的影響（±s）

樣品1234567炮制方法文火炒制3 min文火炒制5 min文火炒制8 min文火炒制10min中火炒制3 min武火炒制3 min不做處理外觀性狀微鼓起，微有焦香氣，少量爆裂鼓起，有焦香氣，部分爆裂焦香氣，大部分爆裂，可見少量焦斑焦香氣，大部分爆裂，可見焦斑焦香氣，大部分爆裂，可見少量焦斑焦香氣，大部分爆裂，可見焦斑表面平滑有光澤，氣微游離蒽醌含量 ／（mg／g）2.52±0.01 2.31±0.02 2.43±0.04 2.35±0.07 2.50±0.04 2.89±0.02 2.06±0.05總蒽醌含量 ／（mg／g）2.86±0.09 2.53±0.13 2.53±0.21 2.42±0.03 2.53±0.08 2.89±0.13 3.34±0.57抗氧化活性／（μg VC／mg）0.0782±0.002 0.0754±0.004 0.0722±0.007 0.0709±0.004 0.0785±0.003 0.0801±0.003 0.0827±0.004

圖1 1，8-二羥基蒽醌標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.4 游離蒽醌含量測定 精密量取樣品溶液（同2.3項下制得）1 mL置于10 mL量瓶中，揮干溶劑，殘渣加0.5%醋酸鎂甲醇溶液溶解，定容至10 mL，搖勻，在512 nm處測定吸光度，測游離蒽醌含量［4-6］。由表1可知：炮制品中游離蒽醌含量高于生品，且炒制溫度升高，游離蒽醌含量也相應(yīng)的有所增高。但是炮制時間越久，游離蒽醌的含量越低，不同炮制品決明子中的游離蒽醌含量兩兩比較均有顯著差異性（P＜0.05）。由此可推測：決明子的炮制加工可以使結(jié)合性蒽醌分解成游離型蒽醌，同時決明子在較長時間加熱條件下蒽醌類化合物可能會被分解，導(dǎo)致游離蒽醌含量降低。

2.5 抗氧化活性實驗 參照文獻(xiàn)［7］，采用DPPH法測定決明子的抗氧化活性。制作DPPH法標(biāo)準(zhǔn)曲線，吸取5 mL濃度為0.05 mg／mL的DPPH溶液于10 mL量瓶中，分別加入濃度為0.06 mg／mL的維生素 C（VC）溶液 0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL，用甲醇定容，25℃下水浴反應(yīng)60 min，于518 nm下測定吸光值。以DPPH自由基的清除率為縱坐標(biāo)Y／%＝100×（1－At／A0）， 其中 A0為濃度為 0.025 mg／mL DPPH的吸光值，At為不同濃度VC的吸光值，VC的濃度為橫坐標(biāo)X，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到的線性方程為：

如圖2。圖2表明VC在濃度為0.3～3.0μg／m范圍內(nèi)與DPPH自由基清除率呈良好線性關(guān)系。

圖2 DPPH法抗氧化活性標(biāo)準(zhǔn)曲線

分別取樣品溶液（同2.3項下制得）0.5 mL置于10 mL量瓶中，加 5 mL濃度為 0.05 mg／mL的DPPH溶液，甲醇定容，25℃下水浴反應(yīng)60 min，于518 nm下測定吸光值，計算出樣品的DPPH自由基清除率，結(jié)果以每毫克樣品干重含有的VC當(dāng)量表示（μg VC／mg），采用 PASW statistics 18.0 軟件分析抗氧化活性與總蒽醌含量的相關(guān)性。由表1可知：所有樣品中，決明子生品的總蒽醌含量最高（3.34±0.57）mg／g，抗氧化活性最強（5.48±0.41）μg VC／mg，而游離蒽醌含量低；采用不同的炮制方法，決明子中游離蒽醌的含量均提高，且與總蒽醌含量相接近，提示炮制后的決明子中結(jié)合蒽醌幾乎水解為游離蒽醌；炮制品中，樣品6的總蒽醌和游離型蒽醌含量均最高，抗氧化活性最強，其次是樣品1和樣品5；不同炒制溫度對游離蒽醌含量也有一定影響，表現(xiàn)為溫度越高，游離蒽醌含量越高。另外，決明子的炮制時間越久，總蒽醌類化合物的含量越低，抗氧化活性也相應(yīng)的降低，由此推測決明子的抗氧化活性可能與總蒽醌類化合物的含量有關(guān)。

3 討 論

決明子生品藥性寒滑，在臨床上不宜使用，常常需要對其進(jìn)行加熱炮制后使用。2015年版中國藥典中記載，決明子的炮制用清炒法炒至鼓起、有香氣，偶見焦斑［8］，可使其寒滑之性得到緩和，且質(zhì)地較松脆，易于粉碎和煎出藥效［9］。本研究發(fā)現(xiàn)隨著炮制時間的增加，決明子中的總蒽醌含量逐漸減少，明顯低于生品中的含量（P＜0.05），抗氧化活性也相應(yīng)降低。本研究采用傳統(tǒng)的鐵鍋炒制方法，將決明子中蒽醌類化合物的含量與其抗氧化活性相結(jié)合，首次考察蒽醌類化合物與抗氧化活性的相關(guān)性，結(jié)果表明決明子的抗氧化活性與總蒽醌類化合物的含量呈現(xiàn)一定的正相關(guān)。因結(jié)合蒽醌有滑腸致瀉的毒副作用，為降低毒副作用，選擇決明子中結(jié)合蒽醌含量較低時為佳，同時也應(yīng)考慮到游離蒽醌有潤下、抗菌、降脂等生理活性［1］。本實驗結(jié)果可知：在不同的炮制方法中，采用武火炒制3 min，能夠使游離蒽醌的含量達(dá)到最高，抗氧化活性最強，該法炮制的決明子抗氧化作用最佳。