江錫銘 朱鑫磊 黃臻輝

摘 要 以自制的保護型縮宮素MBHA樹脂為原料，通過優(yōu)化裂解反應(yīng)中的裂解液配比、反應(yīng)時間并在低反應(yīng)濃度下采用雙氧水氧化進行成環(huán)反應(yīng)，建立了縮宮素新生產(chǎn)工藝。新生產(chǎn)工藝操作簡便、省時高效，且所得中間產(chǎn)物的含量提高、雜質(zhì)減少，對縮宮素粗品純化有利。

關(guān)鍵詞 縮宮素 環(huán)化 裂解

中圖分類號：O629.72； TQ464.7 文獻標(biāo)志碼：A 文章編號：1006-1533（2019）09-0065-02

Study on the optimization of process for the production of oxytocin

JIANG Ximing， ZHU Xinlei， HUANG Zhenhui*

（ SPH No.1 Biochemical & Pharmaceutical Co.， Ltd.， Shanghai 200240， China）

ABSTRACT Using self-made protective oxytocin MBHA resin as a raw material， a new process for the production of oxytocin was established by optimizing the ratio of lysate in cleavage solution， reaction time and cyclization reaction by oxidation of hydrogen peroxide at low reaction concentration. This process was simple， time-saving and efficient， and the content of intermediate products was increased and the impurities were reduced， which was of benefit to the purification of crude oxytocin.

KEY WORDS oxytocin； cyclization； cleavage

縮宮素是一種由9個氨基酸組成并含有一個二硫鍵的環(huán)肽（圖1），臨床上主要用于引產(chǎn)、催產(chǎn)以及治療產(chǎn)后或流產(chǎn)后因?qū)m縮無力或縮復(fù)不良而引起的子宮出血，也可用于促使排乳。

本研究旨在以固相合成得到的保護型縮宮素MBHA樹脂為原料，通過優(yōu)化裂解和成環(huán)反應(yīng)條件，建立縮宮素的新生產(chǎn)工藝。

1 試劑

保護型縮宮素MBHA樹脂、純化水，均自制；三氟乙酸、甲基叔丁基醚（MTBE）、醋酸、氫氧化鈉，均國藥集團化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)；三異丙基硅烷（TIS），吉爾生化（上海）有限公司生產(chǎn)；色譜乙腈，美國Tedia有限公司生產(chǎn)；30%雙氧水，上海凌峰化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)。

2 實驗方法

2.1 保護型縮宮素MBHA樹脂的裂解反應(yīng)[1]

在10 L雙層玻璃砂芯反應(yīng)釜中按比例配制三氟乙酸/TIS/純化水裂解液，降溫至<10 ℃，攪拌下加入保護型縮宮素MBHA樹脂，22 ～ 30 ℃下反應(yīng)1 ～ 1.5 h。過濾，濾液減壓濃縮，濃縮液倒入冷的MTBE中，出現(xiàn)大量白色沉淀物，靜置30 min后離心處理并去上清液。沉淀物以冷的MTBE洗滌、離心處理并去上清液；再重復(fù)操作2次。沉淀物經(jīng)真空干燥，即得還原型縮宮素。

2.2 還原型縮宮素的成環(huán)反應(yīng)[2-4]

用50%醋酸溶液溶解還原型縮宮素，再用純化水稀釋還原型縮宮素濃度至1 mg/ml，然后加入30%雙氧水并用4 mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH至7.0 ～ 9.0，室溫下反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后用醋酸調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH至3.0 ～ 5.0，用0.45 μm膜過濾，即得縮宮素粗品溶液。

2.3 縮宮素粗品的純化[5]

采用Varian Prepstar SD-1制備型高效液相色譜儀進行縮宮素粗品純化：色譜柱Load & lock 4002，50 mm×260 mm，填料Kromasil 100-10-C18。流動相A：0.02%醋酸/水；流動相B：0.02%醋酸/色譜乙腈。流速100 ml/min，操作柱壓700 psi左右，檢測波長210 nm。梯度洗脫，收集樣品主峰，然后濃縮去乙腈，冷凍干燥，所得白色粉末即為縮宮素純品。

3 結(jié)果與討論

3.1 不同裂解液配比對所得還原型縮宮素純度的影響

我們對裂解反應(yīng)中的裂解液配比進行了研究，重點考察了不同配比的裂解液對所得還原型縮宮素純度的影響。結(jié)果顯示，同于室溫下反應(yīng)1 h，裂解液配比（V/V/V）為三氟乙酸∶TIS∶純化水=90∶7.5∶2.5時所得還原型縮宮素的純度最高（表1）。

3.2 裂解反應(yīng)時間對所得還原型縮宮素純度的影響

我們以最優(yōu)裂解液配比（V/V/V）三氟乙酸∶TIS∶純化水=90∶7.5∶2.5進行實驗，考察了裂解反應(yīng)時間對所得還原型縮宮素純度的影響。結(jié)果顯示，隨著裂解反應(yīng)時間延長，所得還原型縮宮素的純度逐漸下降（表2），同時雜質(zhì)含量逐漸增加。

3.3 氧化方式及其時間對成環(huán)反應(yīng)結(jié)果的影響

我們比較了空氣氧化和雙氧水氧化兩種成環(huán)反應(yīng)所得縮宮素粗品溶液中的縮宮素和雜質(zhì)的含量。結(jié)果顯示，當(dāng)采用空氣氧化時，隨著成環(huán)反應(yīng)時間延長，還原型縮宮素逐漸轉(zhuǎn)化為縮宮素，24 h后反應(yīng)基本完全，最終所得縮宮素粗品溶液中的縮宮素含量為64.77%（表3）；而當(dāng)采用雙氧水氧化時，成環(huán)反應(yīng)進行10 min，還原型縮宮素即基本完全轉(zhuǎn)化成縮宮素，所得縮宮素粗品溶液中的縮宮素含量為72.64%（表4）。

3.4 還原型縮宮素的反應(yīng)濃度對成環(huán)反應(yīng)結(jié)果的影響

我們在雙氧水氧化成環(huán)反應(yīng)中還考察了還原型縮宮素的反應(yīng)濃度對所得縮宮素粗品溶液中縮宮素和雜質(zhì)含量的影響。結(jié)果顯示，當(dāng)還原型縮宮素的反應(yīng)濃度為1 mg/ml時，所得縮宮素粗品溶液中的縮宮素含量最高，雜質(zhì)含量最低（表5）。實驗中還發(fā)現(xiàn)，反應(yīng)濃度越高，反應(yīng)液越渾濁，甚至出現(xiàn)黃色黏稠物，為多聚物。

4 小結(jié)

本研究以固相合成得到的保護型縮宮素MBHA樹脂為原料，通過優(yōu)化裂解和成環(huán)反應(yīng)條件，包括優(yōu)化裂解反應(yīng)中的裂解液配比、反應(yīng)時間和采用雙氧水氧化成環(huán)反應(yīng)等，建立了縮宮素新生產(chǎn)工藝。新生產(chǎn)工藝不僅操作簡便、經(jīng)濟環(huán)保、省時高效，且所得縮宮素粗品溶液中的縮宮素含量也提高，同時雜質(zhì)含量降低，有利于縮宮素粗品的進一步純化操作。

參考文獻

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