吳淑華，苗 銳

(湖南省永州市中心醫(yī)院檢驗科,湖南永州 425000)

新生兒溶血病(HDN)，又稱母兒血型不合溶血病，是一種與遺傳相關(guān)的免疫性溶血疾病，以高膽紅素血癥為主要臨床表現(xiàn)，嚴(yán)重者可導(dǎo)致新生兒膽紅素腦病，造成新生兒智力低下甚至死亡。因此，對高膽紅素血癥新生兒溶血病進(jìn)行早期診斷、及早干預(yù)，是避免膽紅素腦病的關(guān)鍵診療工作。

高膽紅素血癥新生兒溶血病最常見發(fā)病原因為新生兒ABO血型不合，主要發(fā)生在母親血型為O型，新生兒血型為A型或者B型。如母嬰血型存在不合，應(yīng)盡早預(yù)測是否有發(fā)生新生兒溶血性疾病的可能，以及判定發(fā)生高膽紅素血癥的危險程度及其影響因素，以便實現(xiàn)早期干預(yù)，避免并發(fā)癥的發(fā)生[1]。

目前，臨床上對HDN的檢測主要為溶血三項檢測，即直接抗人球蛋白試驗(直接試驗)、抗體釋放試驗(釋放試驗)和游離抗體試驗(游離試驗)。本研究選取了本院血液中心2016年6月至2018年6月150例患有高膽紅素血癥的HDV患兒，進(jìn)行溶血三項檢測及血清總膽紅素測定，并收集患兒臨床資料，從而對高膽紅素血癥新生兒溶血三項檢測及相關(guān)影響因素進(jìn)行分析，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年6月至2018年6月送檢本中心的150例確診為ABO血型不合導(dǎo)致高膽紅素血癥新生兒溶血病(ABO-HDN)的新生兒標(biāo)本(ABO-HDN組)及母血標(biāo)本，所有新生兒母親的血型均為O型，Rh(D)陽性，出生時間在3 h至12 d，其中，男78例，女72例；血型A型患兒85例，血型B型患兒65例。同時，選取出生時間在3 h至12 d的健康新生兒150例作為對照組，男76例，女74例，血型A型者83例，血型B型者67例，對照組與ABO-HDN組在年齡、性別、血型等基礎(chǔ)資料方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。所有患兒進(jìn)行新生兒溶血三項檢測及血清總膽紅素測定，母親血清進(jìn)行IgG抗體效價測定，并收集患兒臨床資料。

1.2診斷標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1HDN診斷標(biāo)準(zhǔn)[2](1)母嬰ABO血型或者Rh血型不合；(2)抗體釋放試驗結(jié)果為陽性或三項試驗中2～3項為陽性，均可診斷為HDN。

1.2.2新生兒高膽紅素血癥診斷標(biāo)準(zhǔn)[3](1)足月新生兒血清膽紅素>220.6 μmol/L(12.9 mg/dL)，早產(chǎn)兒血清膽紅素>256.5 μmol/L(15 mg/dL)；(2)排除同時≥2個病因?qū)е碌母吣懠t素血癥(如肝臟疾病、膽汁淤積癥或腎臟疾病等)。

1.3儀器與試劑 標(biāo)準(zhǔn)抗-A、抗-B血清；抗-D血清、抗體篩選紅細(xì)胞、2-巰基乙醇試劑、抗人球蛋白試劑采購于上海血液生物醫(yī)藥有限公司，HDN微柱凝膠檢測卡、血型專用離心機(jī)、37℃孵育器采購于長春博迅生物技術(shù)有限公司。

1.4方法 ABO血型鑒定、溶血三項檢測(直接試驗、釋放試驗和游離試驗)參照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第4版的方法進(jìn)行；母親血清IgG抗體效價采用微柱凝膠卡片法進(jìn)行；新生兒血清總膽紅素測定采用貝克曼AU5800全自動生化儀進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.1150例高膽紅素血癥ABO-HDN患兒血型檢測結(jié)果 經(jīng)臨床統(tǒng)計，150例ABO-HDN，母O子A不合者為85例占56.67%(85/150)，母O子B不合者為65例占43.33%(65/150)，A型患者的陽性率高于B型患者。見表1。

表1 150例高膽紅素血癥ABO-HDN患兒血型檢測結(jié)果

2.2150例高膽紅素血癥ABO-HDN患兒血清溶血三項檢測結(jié)果 150例高膽紅素血癥ABO-HDN患兒進(jìn)行血清溶血三項檢測結(jié)果顯示：直接試驗、游離試驗和釋放試驗陽性率分別為20%、37.33%和100%。O-A組和O-B組組間進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)兩組間直接試驗、游離試驗、釋放試驗的陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 150例高膽紅素血癥ABO-HDN患兒血清溶血 三項檢測結(jié)果[n(%)]

2.3150例高膽紅素血癥ABO-HDN患兒溶血三項檢測結(jié)果與血清總膽紅素結(jié)果 150例高膽紅素血癥ABO-HDN患兒血清溶血三項檢測陽性構(gòu)成結(jié)果、血清總膽紅素結(jié)果見表3。結(jié)果顯示：溶血三項檢測陽性構(gòu)成，三項陽性率為7.33%(11/150)，兩項陽性率為42.67%(64/150)，一項陽性率為50.00%(75/150)。總膽紅素結(jié)果顯示：高膽紅素血癥ABO-HDN患兒總膽紅素水平較對照組明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，試驗組中以三項陽性組的總膽紅素升高最明顯，但較兩項陽性和一項陽性組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

表3 150例高膽紅素血癥ABO-HDN患兒溶血三項檢測 結(jié)果與血清總膽紅素結(jié)果分析

注：*表示總膽紅素水平與對照組相比較,P<0.05；/表示無數(shù)據(jù)

2.4150例高膽紅素血癥ABO-HDN患兒溶血三項檢測結(jié)果與送檢時間的關(guān)系 150例高膽紅素血癥ABO-HDN患兒溶血三項檢測結(jié)果與送檢時間的關(guān)系見表4。在24 h內(nèi)送檢，血清溶血三項檢測結(jié)果陽性率最高，為46.67%(70/150)，且隨著黃疸發(fā)生時間的延長，溶血三項檢測結(jié)果陽性率逐漸減低。

2.5150例高膽紅素血癥ABO-HDN患兒與母親血清IgG抗體效價分布 150例高膽紅素血癥ABO-HDN患兒母親血清IgG抗體效價為1∶16～1∶64的共13例(13/150,8.67%)，母親血清IgG抗體效價為1∶128～1∶256的共121例(121/150，80.67%)，母親血清IgG抗體效價為1∶512的共16例(16/150,10.67%)，見表5。

表4 150例高膽紅素血癥ABO-HDN患兒溶血三項檢測 結(jié)果與送檢時間的關(guān)系

表5 150例高膽紅素血癥ABO-HDN患兒與母親血清 IgG抗體效價分布(n)

3 討 論

HDN是由于母親血清IgG抗體使得胎兒紅細(xì)胞發(fā)生致敏反應(yīng)，從而導(dǎo)致紅細(xì)胞在網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)中被異常破壞，通過血清學(xué)檢查可檢測到高膽紅素血癥。因此，HDN與母嬰血型是否相合、母親血清中是否存在抗嬰兒紅細(xì)胞IgG抗體，母親IgG抗體是否致敏嬰兒紅細(xì)胞這三點有著重要關(guān)系。

HDN的臨床診斷并不困難，根據(jù)患兒一系列臨床表現(xiàn)，結(jié)合實驗室檢查，即可作出診斷。而實驗室檢查中的血清學(xué)檢查是其主要的診斷依據(jù)，血清學(xué)溶血三項檢測中的直接試驗是為了檢測新生兒紅細(xì)胞是否已經(jīng)被母親血清中的IgG抗體致敏，游離試驗和釋放試驗是為了檢測新生兒血清中是否存在IgG類抗體，因此溶血三項檢測在HDN中具有重要的診斷價值。其中，釋放試驗在HDN的診斷中敏感度最高，也是判定HDN的最有力證據(jù)[4-5]。

高膽紅素血癥是HDN的最常見臨床癥狀，以未結(jié)合膽紅素升高為主，膽紅素可透過血-腦屏障而沉積在中樞核團(tuán)，導(dǎo)致膽紅素腦病進(jìn)而危及新生兒生命[6-7]。本研究發(fā)現(xiàn)母子血型為O-A型陽性率高于母子血型O-B型，這與楊冬梅等[8]的報道一致，可能與嬰兒紅細(xì)胞膜上A抗原決定簇多于B抗原決定簇，與IgG抗體結(jié)合力強(qiáng)有關(guān)。研究中統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，150例高膽紅素血癥ABO-HDN患兒的溶血三項檢測結(jié)果為直接試驗、游離試驗和釋放試驗陽性率分別為20.00%、37.33%和100.00%，母子血型不合O-A型組和O-B型組三項結(jié)果差異并無統(tǒng)計學(xué)意義，這與國內(nèi)謝楠楠等[9]的研究結(jié)果一致，即直接試驗陽性率最低，釋放試驗陽性率最高，這可能與三項試驗的設(shè)計原理有關(guān)。釋放試驗因為紅細(xì)胞的大量破壞，細(xì)胞膜上的IgG抗體被釋放出來，因此具有較高的靈敏度。而直接試驗因為抗原密度在新生兒紅細(xì)胞上相對較低，吸附抗體能力較小，因此結(jié)果常呈弱陽性或者陰性。

從表3中可以發(fā)現(xiàn)，ABO-HDN組血清總膽紅素水平明顯高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，溶血三項測試陽性結(jié)果顯示，當(dāng)三項均為陽性時，血清總膽紅素水平最高，結(jié)合患者臨床資料，發(fā)現(xiàn)三項均陽時，患兒的臨床病情最重。從表4中可以看出患兒血清溶血三項檢測與黃疸發(fā)生時間有著密切關(guān)系：在24 h內(nèi)送檢，血清溶血三項檢測結(jié)果陽性率最高，為46.67%(70/150)，且隨著黃疸發(fā)生時間的延長，溶血三項檢測結(jié)果陽性率逐漸減低。這表明應(yīng)盡早采集患兒血液送檢，可能原因為隨著病程進(jìn)展，致敏紅細(xì)胞逐漸溶解，血型抗體將被中和而失去抗原性，從而使得溶血三項檢測陽性率減低。因此，盡早加強(qiáng)總膽紅素測定有助于評估HDN患者的病情，有助于早治療、減少并發(fā)癥、降低對患兒的傷害。

有研究表明[10-11]，孕婦血清中IgG抗體效價與胎兒的受損害程度呈正比，本文的檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，150例高膽紅素血癥ABO-HDN患兒母親血清IgG抗體效價主要集中在1∶128～1∶256，這提醒臨床工作中對母體血清IgG抗體的效價進(jìn)行準(zhǔn)確測定，對診斷和預(yù)防高膽紅素血癥ABO-HDN有著重要意義。

綜上所述，當(dāng)母體血型為O型時，ABO-HDN中A型新生兒發(fā)病率高于B型新生兒；血清溶血三項試驗檢測結(jié)果，以釋放試驗陽性率最高，直接試驗陽性率最低；ABO-HDN血清學(xué)溶血三項檢測陽性率與標(biāo)本送檢時間及膽紅素水平有著密切關(guān)系；ABO-HDN患兒母親血清IgG抗體效價主要集中在1∶128～1∶256。因此，對ABO血型不合導(dǎo)致的高膽紅素血癥新生兒溶血，應(yīng)盡早行血清學(xué)溶血三項試驗，對早診斷、早治療，減少并發(fā)癥，縮短病程等有著重要意義。