王雨涵，黃遠帥

(西南醫(yī)科大學附屬醫(yī)院輸血科，四川瀘州 646000)

梅毒(syphilis)是由蒼白密螺旋體(treponema pallidum，TP)引起的慢性全身性傳染病[1-2]，主要由性接觸傳播，也可通過輸血或母嬰垂直傳播[3]。近年來梅毒發(fā)病率升高較快，已成為較嚴重的公共衛(wèi)生問題[4]。TP病毒感染早期診斷和發(fā)現(xiàn)，對預防傳播和控制流行至關(guān)重要[5]。目前，梅毒檢測已成為臨床患者、獻血人員和體檢人群的常規(guī)篩查項目。面對標本量的急增，臨床實驗室需要有高靈敏度和特異性的梅毒測定方法，同時又需要操作簡便和自動化程度高?；瘜W發(fā)光法因其靈敏度高，特異性好，已經(jīng)成為國外TP檢測的主要方法，而國內(nèi)化學發(fā)光TP檢測還處在初期階段[6]?；瘜W發(fā)光微粒子免疫分析法(chemiluminescence microparticle immunoassay,CMIA)是一種新型免疫學檢測技術(shù)，檢測樣本發(fā)光信號S/CO值明顯高于ELISA方法，對于抗體效價低弱陽性標本，有明顯的優(yōu)勢，利于早期發(fā)現(xiàn)感染[7]。但高敏感性的檢測方法可能受到其他因素影響，導致假陽性增高，而老年人群基礎(chǔ)疾病多，身體狀況差，免疫功能紊亂，更易影響CMIA的檢查結(jié)果，造成假陽性率增高，因此本研究旨在研究CMIA在老年人群TP抗體檢測中的假陽性情況，并分析原因，提出相應處理措施。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2017年11月至2018年12月西南醫(yī)科大學附屬醫(yī)院門診及住院部108 345份需要進行TP篩查的患者血清為研究對象。根據(jù)年齡將研究對象分為觀察組（年齡≥60歲）和對照組（年齡18～59歲）。其中觀察組40 229例，對照組68 116例。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 儀器

鄭州安圖生物科技有限公司Autolumo PLUS全自動化學發(fā)光測定儀。

1.2.2 試劑

鄭州安圖生物科技有限公司人類免疫缺陷病毒抗體檢測試劑盒（CMIA法）；英國OMEGA公司梅毒螺旋體血球凝集試驗試劑盒（TPHA法）。

1.3 方法

采用化學發(fā)光微粒子免疫分析法（鄭州安圖公司）對108 345份患者血清進行檢測，陽性結(jié)果采用TPHA方法進行確診。所有檢測過程均按照標準化操作程序完成。

1.4 結(jié)果判定標準

CMIA法結(jié)果判定標準：待測樣本發(fā)光值＜Cutoff值時，檢測呈陰性反應；待測樣本發(fā)光值≥Cutoff值時，檢測呈陽性反應。Cutoff值=陽性對照孔平均發(fā)光值×0.2，儀器操作時，自動計算并保存每批試劑的Cutoff值。本實驗中Cutoff值=1.0。有效性判斷：陽性對照孔平均發(fā)光值/陰性性對照孔平均發(fā)光值應大于10，否則應重新試驗。

TPHA法結(jié)果判讀標準：陽性對照：在血凝板底部形成不規(guī)則凝集塊；陰性對照：在孔底形成致密、規(guī)則的圓形細胞沉淀。目測：凡出現(xiàn)細胞凝集者為陽性反應，不出現(xiàn)凝集者為陰性反應：-/不凝集：細胞沉積在板孔中央呈邊緣光滑的紐扣狀；+/凝集：細胞形成多邊形或不規(guī)則環(huán)狀沉積；2+～4+/強凝集：細胞形成邊緣粗糙不規(guī)則形狀或薄膜狀覆蓋到板孔底。加入對照血清細胞的反應孔不應出現(xiàn)凝集，如果出現(xiàn)凝集，說明存在抗血細胞抗體，應重復試驗。重復試驗時，應先用對照細胞懸液將標本按1∶4稀釋，在室溫靜置45～60 min，再經(jīng)1 000 r/min離心5 min，取上清液按1∶5稀釋，再進行試驗，如果加入試驗細胞懸液仍出現(xiàn)凝集，可判為陽性結(jié)果。

假陽性判斷：化學發(fā)光微粒子免疫分析法陽性而TPHA試驗陰性。真陽性判斷：磁微粒發(fā)光化學法與TPHA試驗均為陽性。

1.5 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 20.0軟件，率的比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

納入研究的108 345例患者血清標本采用化學發(fā)光微粒子免疫分析法共篩查出陽性樣本4 442例，陽性率為4.10%。陽性結(jié)果全部采用TPHA方法進行確診，確診陽性率為93.86%。初篩陽性率觀察組高于對照組（P＜0.05)。假陽性率觀察組高于對照組（P ＜0.05)，男性高于女性（P ＜0.05)，見表1、表2。

表1 化學發(fā)光微粒子免疫分析法檢測TP抗體的性能分析

3 討論

由于人們對性傳播疾病知識了解及防護程度不足，梅毒感染已由高危人群轉(zhuǎn)向普通人群，隱性感染者大量增加。梅毒的臨床癥狀表現(xiàn)多樣，且隱性梅毒患者較多，傳播速度快，社會危害大，且能經(jīng)母嬰傳播，給胎兒帶來重大危害[8-9]。臨床工作中應推薦使用敏感性和特異性高的試劑用于篩查，有效降梅毒傳播的風險?；瘜W發(fā)光微粒子免疫分析法是將磁性分離技術(shù)、化學發(fā)光技術(shù)、免疫分析技術(shù)三者結(jié)合起來的一種新興分析方法。該技術(shù)充分利用了磁性分離技術(shù)的快速易自動化，化學發(fā)光技術(shù)的高敏感性，以及免疫分析的特異性，在梅毒抗體檢測領(lǐng)域展現(xiàn)了不可替代的作用[10-11]。但據(jù)文獻報道CMIA法檢測TP抗體高敏感性的同時伴隨著假陽性率增高，尤其是在老年人群中[12]。

本研究中采用CMIA法對最近1年本院就醫(yī)患者進行TP抗體篩查，發(fā)現(xiàn)TP初篩陽性率為4.10%，與張旭東等[6]的4.52%相近，高于秦宏、龐麗平、靳秀英等[13-15]的報道，流行情況仍較為嚴峻。一方面是本院所在地區(qū)位于川、滇、黔、渝結(jié)合部，人口流動大、勞務輸出和靜脈吸毒人員均比較多，使得TP的陽性率較高[16]。另一方面，所在地經(jīng)濟發(fā)展水平相對落后，在梅毒檢測、預防、治療以及宣傳等方面的經(jīng)費投入不足，公眾對梅毒的危害以及自我保護知識了解甚少。

在本研究中采用CMIA法檢測陽性結(jié)果中與TPHA結(jié)果比較假陽性率為6.15%，與國內(nèi)學者報道結(jié)果[2]接近。在CMIA法梅毒血清學試驗陽性的老年人中，較大一部分無任何臨床癥狀及體征、無疾病相關(guān)流行史、無高危行為、無TP病毒感染史，其假陽性的可能性大。本研究中，老年患者（年齡≥60歲）經(jīng)CMIA法檢測出的陽性率為8.14%，而經(jīng)TPHA檢測出的假陽性率為0.76%，經(jīng)比較老年組出現(xiàn)的低值陽性率和假陽性率均明顯升高，差距有統(tǒng)計學意義（P＜0.05)，與何江才的報告類似[17]。這部分人假陽性的原因可能是：①老年人身體功能減退，常合并一些基礎(chǔ)疾病，如心血管病、糖尿病等，這些疾病可使機體釋放誘導產(chǎn)生抗類脂抗體（或）抗TP抗體的交叉抗原；②老年患者伴有類風濕關(guān)節(jié)炎、接受免疫抑制劑治療的患者比例相對更高，更容易產(chǎn)生一些自身抗體、異嗜性抗體、異常蛋白等交叉反應物質(zhì)[18]，干擾化學發(fā)光反應出現(xiàn)假陽性。因此，老年人CMIA法檢測TP抗體結(jié)果呈現(xiàn)低值陽性時，一定要結(jié)合病史、臨床表現(xiàn)和其他檢驗結(jié)果等綜合考慮[19]。盡量避免梅毒化驗結(jié)果假陽性造成的誤診，這對于避免醫(yī)患糾紛是十分必要的[20]。值得注意的是本研究所采取的TP確診方法是TPHA法，具有一定的局限性。據(jù)報道，如果用TPHA法確證TP-CMIA法的假陽性，會有真陽性誤判為假陽性，可采用靈敏度、特異性均較高的TP-Western Blot作為確診試驗[21]。

CMIA技術(shù)檢測TP抗體具有靈敏性高、特異度高、重復性好、線性范圍寬等優(yōu)點。但同時存在假陽性率較高，特別是老年人群更要慎重對待?？蓮囊韵聨讉€方面采取措施，提高診斷的準確性：①首先，對老年人群陽性結(jié)果尤其是低值陽性檢測結(jié)果應采取多種方法進行復檢及確診，或定期隨訪觀察；②與臨床醫(yī)生溝通，結(jié)合患者的疾病診斷、癥狀體征、病史、其他實驗室檢查、治療反應及流行病學等信息綜合考慮；③患者處于其它感染活動期，體內(nèi)可能存在抗體干擾，建議間隔一段時間復查；④對不合格的樣本拒收，做好樣本檢測前處理工作；⑤必要時結(jié)合TP免疫印跡試驗或梅毒螺旋體檢測和定期復檢，以最大限度預防TP的傳播。

4 結(jié) 論

CMIA技術(shù)具有很高的靈敏度，良好的特異性和線性范圍，但老年人群基礎(chǔ)疾病多，身體狀況差，免疫功能紊亂，更易影響CMIA的檢查結(jié)果，造成假陽性率增高，對此類結(jié)果應慎重處理，做好復檢及確診試驗工作，并結(jié)合臨床實際情況綜合判斷，以防漏診或誤診。