徐 莉，李紅梅

(江蘇省寶應縣市場監(jiān)督管理局，江蘇 寶應 225800)

1 引言

烏洛托品又名六次甲基四胺[1～3]，它由甲醛與氨水起化學反應而得。烏洛托品在pH值低于7的條件下容易分解出甲醛和氨，甲醛對人體有毒性，所以衛(wèi)生部禁止在食品中檢測出烏洛托品的殘留。食品中烏洛托品含量經常使用的檢測方法就是比色法和色譜法，液相色譜法在檢測機構用應用廣泛。本文采用液質串聯四級桿聯用檢測米粉中烏洛托品殘留量，方法回收率較高，適用于米粉中烏洛托品殘留量的測定。

2 材料與方法

2.1 材料和儀器

烏洛托品標準品(農業(yè)部環(huán)境保護科研檢測所)；米粉(農貿市場購買)；甲醇、乙腈(色譜純)(美國默克公司)；乙酸胺、正己烷、硫酸鈉(分析純)；超純水；MCX-SPE固相萃取柱(天津博納艾杰爾科技有限公司)；美國安捷倫液相色譜串聯四級桿質譜聯用儀1290-6410B。

2.2 實驗方法

2.2.1 色譜條件

色譜柱：C18 CAPCELL Pak 1∶4(50 mm×2.1 mm；1.5 μm)；流動相：乙腈+1%乙酸水溶液體積比例為80∶20，設定流動相流速為0.2 mL/min；樣品進樣量：1 μL。

2.2.2 質譜條件

電噴霧離子源(ESI)：正離子模式，離子檢測模式為多反應監(jiān)測模式，選擇監(jiān)測烏洛托品的母離子峰及子離子峰，即m/z 141.1母離子和m/z 112.2子離子。解離電壓：100 V，干燥氣流速為10 L/min，離子源溫度：350 ℃，碰撞能：20 V，霧化電壓：45psi，毛細管電壓：4000 V。

2.2.3 標準溶液配制

用十萬分之一電子天平正確稱取烏洛托品標準品0.1 mg，用乙腈配成10,20,40,80,100ng/ mL 5個濃度點。

2.2.4 樣品制備

稱取約5 g樣品于50 mL離心管中，加入2 g無水硫酸鈉及20 mL乙腈，均質，離心，上清液加入乙腈飽和的正己烷溶液10 mL，震蕩離心后，棄去上清液，乙腈相過無水硫酸鈉，然后濃縮近干后待凈化。經MCX固相萃取柱凈化后，經過45 ℃下氮氣吹干，殘渣用1 mL乙腈溶解，過濾膜供液相色譜-串聯質譜儀測定。

3 結果與討論

3.1 流動相選擇

實驗中比較了不同流動相對烏洛托品分離效果的影響。乙腈-乙酸水相跟甲醇-乙酸水流動相進行了比較，乙腈-1%乙酸水作為流動相，保留時間較短，分離度好，能夠達到實驗要求，而且配制比較簡便。在乙腈-1%乙酸水相中逐步提高乙腈比例，乙腈達到體積比為80∶20的時候，分離度和峰形較好，所以選擇乙腈-1%乙酸水=80+20作為本次實驗的流動相。

3.2 質譜條件的選擇

烏洛托品分子式C6H12N4，相對分子質量為140.1，在ESI源中容易得到一個氫而帶正電荷，因此選擇電噴霧離子源正離子模式對其進行檢測。在正離子模式下，對儀器的條件進行了優(yōu)化，解離電壓、干燥氣流速、碰撞能、霧化電壓等，烏洛托品質譜圖和MRM圖如圖1、圖2，因此烏洛托品定性定量采用母離子(m/z 141.1)和子離子(m/z 112.2)掃描，外標法定量。

3.3 樣品前處理

實驗中比較了NH2-SPE萃取柱、C18-SPE萃取柱、MCX-SPE萃取柱，發(fā)現MCX-SPE柱子處理能夠較好的去除樣品中的雜質，效果比較好，本實驗選用MCX-SPE固相萃取柱，本實驗方法能夠獲得較好的回收率和重現性。

3.4 方法的線性范圍、精密度、回收率和最低檢出限

烏洛托品1 μg/mL的標準儲備液逐級稀釋成濃度為10、20、40、80、100 ng/mL的標準工作液，濃度由低到高進樣檢測，以峰面積-濃度作圖，得到標準曲線回歸方程。如下圖3所示，回歸方程為：y=246.1733x+312.241493，相關系數r2為0.997。在10～100 ng/mL之間線性關系良好。

圖1 烏洛托品ESI(+)質譜圖

以未檢出烏洛托品的樣品為空白樣品，在空白樣品中分別添加0.5、1、10 μg/kg 3個水平的空白加標樣品進行了回收率實驗，每個做5次平行試驗，得到平均回收率跟相對標準偏差見表1，并以信噪比等于3為標準，測得烏洛托品的檢出限(LOD)為0.3 μg/kg，以信噪比等于10時計算定量限(LOQ)為5 μg/kg。說明此方法的回收率和精明度能夠達到實驗要求。

圖2 烏洛托品MRM質譜圖

圖3 標準曲線

表1 回收率實驗

3.5 樣品測定

根據本實驗建立的方法對實際米粉進行檢測分析，烏洛托品標準品色譜圖見圖4，烏洛托品標準品出峰時間在0.8 min左右，從圖中可以看出，烏洛托品分析時間很短，只需4 min之內就能完成一個樣品的檢測。

圖4烏洛托品標樣質量色譜

4 結論

研究建立了米粉中烏洛托品含量的高效液相色譜-串聯質譜檢測分析方法。樣品經過提取和C18-SPE柱子凈化后，進液相串聯四級桿質譜儀檢測，檢測結果表明烏洛托品在米粉中平均加標回收率為82.3%～90.2%，RSD為2.95%～6.52%，最低檢出限為0.3 μg/kg。該方法回收率較高，準確度較好，分析簡便快捷，能夠達到實驗要求。